抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究

目的研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础。方法采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GV期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量。同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态。结果 RB1在小鼠GV期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GV期的2倍,差别具有统计学意义(P<0.05)。RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化。GV期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化。结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GV～MⅡ)中尚未发生甲基化。     

抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响

目的 研究抗氧化剂半胱氨酸对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响,为进一步优化卵母细胞体外成熟培养体系提供理论依据. 方法 对照组采用基础体外培养液,共培养101枚GV期小鼠卵母细胞;实验组采用基础体外培养液+0.6 mmol/L半胱氨酸,共培养115枚GV期小鼠卵母细胞.观察两组卵母细胞的成熟率、谷胱甘肽的含量和线粒体内膜电位. 结果 对照组和实验组卵母细胞的成熟率分别为68.3％和80.0％,差别具有统计学意义(P＜0.05)；对照组和实验组卵母细胞平均谷胱甘肽含量分别为0.48±0.6 μg/L和0.51±0.5 μg/L,实验组谷胱甘肽含量略高,但两者无统计学差异(P＞0.05).线粒体内膜电位,对照组与实验组分别为0.04±0.003 △Ψm与0.39±0.020△Ψm,实验组线粒体内膜电位明显高于对照组(P＜0.05). 结论 抗氧化剂半胱氨酸对体外培养小鼠卵母细胞成熟有一定的促进作用,并可能会提高卵母细胞的发育潜能.     

拮抗剂方案注射HCG后不同授精时间对IVF助孕结局影响

目的 探讨拮抗剂方案注射人绒毛膜促性腺激素(human choriogonadotropin, HCG)后不同授精时间对体外受精(in vitro fertilization, IVF)助孕结局影响。方法 回顾性分析2021年3月—2023年3月在茂名市人民医院生殖中心接受体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer, IVF-ET)治疗,并采取拮抗剂方案的161例COS患者的临床资料,按照注射HCG后不同授精时间分为4组,其中A组(n=26)：注射HCG后的38～39 h(含39 h)授精;B组(n=77)：注射HCG后的39～40 h(含40 h)授精;C组(n=46)：注射HCG后的40～41 h(含41 h)授精;D组(n=12)：注射HCG后的41～42 h(含42 h)授精。比较4组的临床结局。结果 D组的优质胚胎率为44.00%高于另外3组,差异有统计学意义(χ²=7.125,P<0.05)。4组的临床妊娠率以及每移植周期活产率对比,差异无统计学意义(P>0.05),但是D组的胚胎着床率...     

小鼠单个不同阶段卵母细胞新抑癌印迹基因RB1的表达

目的 研究新抑癌印迹基因RB1 在小鼠单个不同阶段卵母细胞中的表达.方法 采用改良 单细胞RT-PCR 方法检测RB1 在单个不同阶段卵母细胞中的mRNA 表达.结果 RB1 在小鼠单个卵母细胞 GⅤ、MⅠ、MⅡ均有检测到正常表达,不同卵母细胞的RB1 表达量不同,其中8 个MⅡ期卵母细胞,3 个卵母 细胞明显表达,1 个表达较弱,其余4 个无明显表达.结论 RB1 在小鼠不同阶段卵细胞中均有表达,但是不 同细胞RB1 存在明显表达的差异.新印迹基因RB1 的研究有助于研究卵母细胞成熟及胚胎生长发育,尤其 使用单细胞进行研究,更有利于对表观遗传学深入研究探讨.