潜伏相关转录体对单纯疱疹病毒的再激活作用

单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)属于α疱疹病毒科,有HSV-1和HSV-2两个血清型.HSV-1病毒主要感染唇、口、眼、脑等部位,可引起眼结膜炎、致死性脑炎等疾病,而HSV-2病毒则感染腰以下部位,主要引起生殖器疱疹(genital herpes,GH)[1].HSV病毒感染之所以成为世界性的医学难题,其易潜伏特性是症结所在.     

单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制. 方法：以构建成功的pVAX—LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2 LAT ORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5'端分别引入Kpn I和Pst I酶切位点.用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经Kpn I、Pst I双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6／myc—His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子．双酶切及测序鉴定连接产物.在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达. 结果：重组质粒经Kpn I和Pst I双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达. 结论：成功构建了ORF2-pcDNA 6／myc-His B重组质粒,并可在Veto细胞内有效表达.     

单纯疱疹病毒Ⅱ型CTL表位DNA疫苗的Th1/Th2免疫应答研究

目的探讨单纯疱疹病毒Ⅱ型（HSV-2）CTL表位疫苗对小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响。方法用构建的HSV-2pVAX-gD-CTL重组质粒免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gDIgG水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中INF-γ,IL-4水平;流式细胞仪测定小鼠CD4^＋,CD8^＋T淋巴细胞亚群。结果HSV-2pVAX-gD-CTL疫苗免疫小鼠后可以诱导脾淋巴细胞增殖及分泌INF-γ和IL-4,诱导CD4^＋,CD8^＋T细胞百分比的升高;并能刺激血清HSV-2gD特异性抗体的产生。其中pVAX-gD-CTL组在脾淋巴细胞刺激指数及其分泌INF-γ水平、CD4^＋,CD8^＋T细胞百分比升高方面均显著高于pVAX-gD对照组。结论CTL表位对单纯疱疹Ⅱ型重组DNA疫苗诱导的Th1型免疫应答有促进作用。     

单纯疱疹病毒潜伏感染中LAT基因的作用机制

单纯疱疹病毒（herpes simplex virus，HSV）属α疱疹病毒科，原发感染生殖器及口面部黏膜上皮组织，引起眼角膜炎、致死性脑炎、生殖器疱疹（genital herpes）等严重影响人类健康的疾病.有Ⅰ型（HSV-1）和Ⅱ型（HSV-2）两个血清型。HSV易传播．嗜神经潜伏，可因多种非特异应激激活，导致症状复发。HSV的潜伏性是有效治疗和彻底清除该病毒的最大障碍。[第一段]     

白癜风患者CD+4 CD+25调节性T细胞水平检测

目的探讨CD4 CD2 5调节性T细胞在白癜风发病的作用。方法用流式细胞仪直接免疫荧光检测进展期白癜风患者、接受NB-UVB治疗后的白癜风患者及正常人外周血CD4 CD2 5调节性T细胞的百分率。结果进展期白癜风患者CD4 CD2 5调节性T细胞百分比低于正常人,经NB-UVB治疗后的白癜风患者CD4 CD2 5调节性T细胞百分比较进展期白癜风患者明显提高,差异有显著性,与正常对照组相比差异无显著性。结论CD4 CD2 5调节性T细胞可能在白癜风的发病中起一定的作用。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体基因ORF真核表达载体的构建及表达

目的 构建单纯疱疹病毒Ⅱ型潜伏相关转录体基因ORF片段真核表达载体,并在Vero细胞中进行表达. 方法用PCR方法从已成功构建的pVAX-LAT重组质粒中扩增潜伏相关转录体基因ORF片段,克隆到pcDNA 6/myc-his B质粒中,构建pcDNA-ORF重组质粒,双酶切及测序鉴定其正确性.以脂质体法瞬时转染Vero细胞,并用RT-PCR和Western blot检测其表达. 结果双酶切及测序表明ORF片段大小及序列均正确,RT-PCR及Western blot显示重组质粒在Vero细胞中得到了表达. 结论成功构建了pcDNA-ORF重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达.     

单纯疱疹病毒Us3基因功能的研究进展

单纯疱疹病毒Us3基因编码为一个丝/苏蛋白激酶,作为一个附加基因,其产物Us3蛋白激酶(Us3PK)与介导病毒抗宿主细胞凋亡关系密切。Us3基因诱导的宿主细胞形态学变化与病毒在细胞间的传播能力密切相关,此为Us3基因的一个新功能,作者对此作一综述。     

单纯疱疹病毒II型CTL表位DNA疫苗的Th1/Th2免疫应答研究

目的探讨单纯疱疹病毒II型(HSV-2)CTL表位疫苗对小鼠Th1/Th2型免疫应答的影响。方法用构建的HSV-2pVAX-gD-CTL重组质粒免疫BALB/c小鼠3次,末次免疫后第4周检测小鼠血清中gDIgG水平;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中INF-γ,IL-4水平;流式细胞仪测定小鼠CD4+,CD8+T淋巴细胞亚群。结果HSV-2pVAX-gD-CTL疫苗免疫小鼠后可以诱导脾淋巴细胞增殖及分泌INF-γ和IL-4,诱导CD4+,CD8+T细胞百分比的升高;并能刺激血清HSV-2gD特异性抗体的产生。其中pVAX-gD-CTL组在脾淋巴细胞刺激指数及其分泌INF-γ水平、CD4+,CD8+T细胞百分比升高方面均显著高于pVAX-gD对照组。结论CTL表位对单纯疱疹II型重组DNA疫苗诱导的Th1型免疫应答有促进作用。