脂肪间充质干细胞的体外诱导和成血管作用

目的 研究在体外诱导脂肪间充质干细胞(ADMSCs)向内皮细胞分化、在立体培养基上的血管形成情况.方法 将传至第三代的ADMSCs用内皮细胞诱导液、Matrigel三维培养基进行诱导培养,对ADMSCs和诱导细胞选用CD31、CD44细胞表面抗原在流式细胞仪检测表达情况,用HE染色、FⅧ-RAg免疫组织化学染色及倒置显微镜、透射电镜等进行观察鉴定.结果流式细胞仪上检测ADMSCs的表达为CD44阳性、CD31阴性,诱导的细胞CD31阳性、CD44阴性.诱导细胞14d倒置显微镜下呈铺路石样形态,FⅧ-RAg染色细胞呈阳性,透射电镜下在细胞浆内见到内皮细胞特有标志物Weibel-Palade小体。ADMSCs在Matrigel三维培养基上诱导,24h细胞迁徙成团、有伪足伸出,诱导7d伸出的细胞形成交叉网格状,13d形成较长血管,20d较长血管粗而多、出现小分叉,30d长血管、分叉血管变粗厚;FⅧ-RAg染色后诱导血管亦呈阳性.结论 脂肪间充质干细胞在体外经诱导能向内皮细胞分化、能形成血管,可作为促进组织工程移植物血管化的良好的种子细胞.

Abstract：

Objective To study in vitro induction of adipose-derived mesenchymal stem cells (ADMSCs) into endothelial cells and blood vessel formation on three-dimensional (3D) media． Methods The 3rd passage ADMSCs were induced in vitro into endothelial cells on conditional medium and grew on Matrigel medium． The cell surface antigens CD31 and CD44 were detected with flow cytometric analysis before and after induction． HE staining, FⅧ-RAg immunohistochemical staining, inverted microscope and transmission electron microscope were used for morphological study.Results The expression of CD44 was positive and CD31 negative in ADMSCs in flow cytometric analysis.After induction,CD31 became positive while CD44 was negative． Paving-stone-like cell appearance was seen under inverted microscope 14 days after induction.The cells were FⅧ-RAg positively stained with immunohistological method,and Weibel-Palade body was observed under transmission electron microscope.On Matrigel media,the induced cells migrated in lumping with pseudopodia protrusion after 24 hours,and formed grid structure on the 7th day.Long vasculature was observed on the 13th day,and the vessels branched on the 20th to 30th day.The vessels stained positive for FⅧ-Rag． Conclusions ADMSCs have the potential to give rise to endothelial cells with in vitro induction and to form vessel structure in 3D media.ADMSCs have potential role in vascularized tissue engineering grafting．     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞的分化

背景：目前骨髓间充质干细胞已经应用于多种组织血管的修复,但涉及尿道血管组织的报道甚少。 目的：探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-07/2008-01在苏州大学附属儿童医院儿科研究所完成。 材料：清洁级4周龄SD大鼠4只,由苏州大学实验动物中心提供。作为诱导剂的血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞因子为Sigma公司产品。 方法：密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,待细胞达80%~90%融合时消化传代。传至第3代,细胞按1×109 L-1密度接种,加入含血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞因子的DMEM培养基向血管内皮细胞诱导分化。 主要观察指标：MTT测定细胞生长曲线,免疫荧光法检测细胞表面CD44与Vimentin的表达,光学倒置显微镜下观察诱导后细胞形态变化,电镜观察细胞超微结构。 结果：骨髓间充质干细胞生长曲线呈倒“S”型,第3 代细胞表面CD44和Vimentin表达阳性率分别为89.3%和85.6%。向血管内皮细胞诱导1~3 d细胞呈梭形或纺锤形,7 d后变成不规则的圆形或椭圆形,胞浆淡染,胞核较大,核染色质粗,且部分细胞死亡,14 d后整瓶细胞呈漩涡状生长,21~25 d后细胞密集处呈内皮细胞特有的铺路石样排列。诱导后第21天,细胞浆内可见微管、微丝及W-P小体。 结论：血管内皮细胞生长因子与碱性成纤维细胞因子联合诱导条件下,骨髓间充质干细胞在体外可分化为血管内皮细胞。     

多孔丝素复合脂肪间充质干细胞支架修复兔尿道缺损能促进血管的形成

背景：应用脂肪间充质干细胞复合丝素支架修复尿道缺损,国内外尚无公开报道。目的：观察脂肪间充质干细胞复合多孔丝素支架在修复兔尿道缺损中促进血管形成的作用。方法：取兔附睾处脂肪垫组织,分离培养脂肪间充质干细胞。将大白兔按随机数字表法设尿道缺损对照组、多孔丝素膜修复组、脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜修复组。结果与结论：第3代脂肪间充质干细胞CD44、Vimentin均呈阳性表达。造模后2,4,6周苏木精-伊红染色结果显示,脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组和多孔丝素膜组较尿道缺损对照组、脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组较多孔丝素膜组血管形成多。造模后4周,应用FⅧ-RAg免疫组织化学染色法计数微血管密度,脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组和多孔丝素膜组高于尿道缺损对照组(P < 0.05),脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组高于多孔丝素膜组(P < 0.05)。提示脂肪间充质干细胞型丝素支架在尿道缺损的修复中能显著促进血管的形成、生长。     

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞的分化

背景:目前骨髓间充质干细胞已经应用于多种组织血管的修复,但涉及尿道血管组织的报道甚少.目的:探讨体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-07/2008-01在苏州大学附属儿童医院儿科研究所完成.材料:清洁级4周龄SD大鼠4只,由苏州大学实验动物中心提供.作为诱导剂的血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞因子为Sigma公司产品.方法:密度梯度离心法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,待细胞达80%～90%融合时消化传代.传至第3代,细胞按1×109L-1密度接种,加入含血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞因子的DMEM培养基向血管内皮细胞诱导分化.主要观察指标:MTT测定细胞生长曲线,免疫荧光法检测细胞表面CD44与Vimentin的表达,光学倒置显微镜下观察诱导后细胞形态变化,电镜观察细胞超微结构.结果:骨髓间充质干细胞生长曲线呈倒"S"型,第3代细胞表面CD44和Vimentin表达阳性率分别为89.3%和85.6%.向血管内皮细胞诱导1～3 d细胞争梭形或纺锤形,7 d后变成不规则的圆形或椭圆形,胞浆淡染,胞核较大,核染色质粗,且部分细胞死亡,14 d后整瓶细胞呈漩涡状生长,21～25 d后细胞密集处呈内皮细胞特有的铺路石样排列.诱导后第21天,细胞浆内可见微管、微丝及W-P小体.结论:血管内皮细胞生长因子与碱性成纤维细胞因子联合诱导条件下,骨髓间充质干细胞在体外可分化为血管内皮细胞.     

脂肪干细胞复合多孔丝素材料修复兔尿道缺损

目的 探索脂肪间充质干细胞(ADMSCs)复合多孔丝素膜(PSFS)对尿道缺损的修复效果.方法 建立雄性新西兰大白兔尿道缺损模型后分为3组,每组13只.A组用PSFS修补,B组用BrdU标记ADMSCs复合PSFS修补,C组为尿道缺损对照.手术前后行尿道造影.术后2、4、6周取修复段尿道行组织学检查,免疫组织化学染色检测BrdU标记ADMSCs、广谱角蛋白阳性细胞及巨噬细胞情况.结果 术后C组尿道狭窄和尿屡的并发症总发生率为76.92% ,高于A组的23.07% 和B组的15.38% (P<0.05).组织学观察C组的血管、上皮细胞层、平滑肌重建少;A、B组重建最多、B组多于A组.BrdU标记ADMSCs在3时间点缺损区丝素膜中散在可见;广谱角蛋白染色C组缺乏尿道上皮的复层柱状上皮形态,无乳突状黏膜存在;A、B组与正常尿道黏膜相似,有较多乳突状结构;术后4周巨噬细胞表达B组比A组少[(11.66±1.58)/HP vs.(13.88±2.08)/HP](P<0.05).结论 ADMSCs复合PSFS具有促进尿道缺损修复的作用.     

太仓市3-14 岁儿童身材矮小发生率及其影响因素研究

[摘要] 目的:了解太仓市 3 -14 岁儿童身材矮小的流行病学特征及主要影响因素。 方法:采取整群抽样的方法,以 2005 年中 国儿童体格调查数据为标准,分析 2015 年江苏省太仓市 3 ~ 14 岁 63 049 名儿童中矮小症患病率及分布特点。 采用病例对照研 究的方法,发放调查表,由各学校保健老师询问家长后反馈给研究人员,双人独立录入 Epidata 数据库,核对后应用 SPSS18.0 统计软件进行分析,对矮小危险因素进行单因素和多元逐步回归Logistic 回归分析。 结果:2015 年江苏省太仓市 3 -14 岁儿童矮小症患病率为1.86% ,男、女童矮小症患病率分别为 1.87% 和 1.85% ,城区与乡镇儿童矮小症患病率分别为 0.92% 和 2.31% 。 结论: 2015 年江苏省太仓市城区与乡镇儿童身高存在性别差异,身高生长水平总体偏高于 2005 年全国标准,患病率低于 2005 年全国标准,矮小主要影响因素为父亲身高。     

小儿微小病变肾病综合征免疫发病机制研究进展

小儿微小病变肾病综合征（Minimal Chang Nephrotic Syndrome, MCN）是一组由足突细胞病变引起的肾小球通透性增加,导致血浆内大量蛋白质从尿中丢失的临床综合征, 是儿童单纯型肾病综合征（Simple Nephrotic Syndrome,SNS）中最常见的类型,也是儿童原发性肾病综合征（Primary Nephrotic Syndrome,PNS）最主要病理类型,主要表现为明显水肿、大量蛋白尿、低蛋白血症和高胆固醇血症[1],其发病机制尚不明了.目前认为细胞免疫反应为MCN发病的中心环节,特别是足突细胞,故在此探讨MCN免疫发病机制.     

脂肪间充质干细胞的体外诱导和成血管作用

Objective To study in vitro induction of adipose-derived mesenchymal stem cells (ADMSCs) into endothelial cells and blood vessel formation on three-dimensional (3D) media． Methods The 3rd passage ADMSCs were induced in vitro into endothelial cells on conditional medium and grew on Matrigel medium． The cell surface antigens CD31 and CD44 were detected with flow cytometric analysis before and after induction． HE staining, FⅧ-RAg immunohistochemical staining, inverted microscope and transmission electron microscope were used for morphological study.Results The expression of CD44 was positive and CD31 negative in ADMSCs in flow cytometric analysis.After induction,CD31 became positive while CD44 was negative． Paving-stone-like cell appearance was seen under inverted microscope 14 days after induction.The cells were FⅧ-RAg positively stained with immunohistological method,and Weibel-Palade body was observed under transmission electron microscope.On Matrigel media,the induced cells migrated in lumping with pseudopodia protrusion after 24 hours,and formed grid structure on the 7th day.Long vasculature was observed on the 13th day,and the vessels branched on the 20th to 30th day.The vessels stained positive for FⅧ-Rag． Conclusions ADMSCs have the potential to give rise to endothelial cells with in vitro induction and to form vessel structure in 3D media.ADMSCs have potential role in vascularized tissue engineering grafting．     

嗜酸性膀胱炎二例报告

例1,患儿,男,10个月,因尿频7 d于2004年7月18日入院.病前2d曾因发热在当地医院治疗,因出现尿潴留症状,经导尿后排出约200 ml略显混浊之尿液,之后开始出现尿频症状,每天约10多次.B超及CT检查提示膀胱内肿瘤样占位性病变,转入本院诊治.既往无明显过敏史.入院体检无特殊阳性体征.血常规示嗜酸性粒细胞增高,血小板增高,其余正常;尿常规示血尿、脓尿;大便常规正常.尿培养:无菌生长.     

多孔丝素复合脂肪间充质干细胞支架修复兔尿道缺损能促进血管的形成

背景：应用脂肪间充质干细胞复合丝素支架修复尿道缺损,国内外尚无公开报道。 目的：观察脂肪间充质干细胞复合多孔丝素支架在修复兔尿道缺损中促进血管形成的作用。 方法：取兔附睾处脂肪垫组织,分离培养脂肪间充质干细胞。将大白兔按随机数字表法设尿道缺损对照组、多孔丝素膜修复组、脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜修复组。 结果与结论：第3代脂肪间充质干细胞CD44、Vimentin均呈阳性表达。造模后2,4,6周苏木精-伊红染色结果显示,脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组和多孔丝素膜组较尿道缺损对照组、脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组较多孔丝素膜组血管形成多。造模后4周,应用FⅧ-RAg免疫组织化学染色法计数微血管密度,脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组和多孔丝素膜组高于尿道缺损对照组(P < 0.05),脂肪间充质干细胞复合多孔丝素膜组高于多孔丝素膜组(P < 0.05)。提示脂肪间充质干细胞型丝素支架在尿道缺损的修复中能显著促进血管的形成、生长。