多价精子抗原表位肽的设计与免疫效应研究

目的 开发可供两性使用的多价合成嵌合肽疫苗。方法 选择小鼠精子／睾丸特异性抗原SP17、Cyritestin中特异性氨基酸序列与牛核糖核酸酶非限制性T细胞表位作为骨架，按一定连接方式设计、合成新抗原35肽，并与弗氏佐剂混悬后免疫雌性BALB／C小鼠。结果 在430A固相自动肽合成仪上成功地合成35肽，并经HPLC纯化、质谱鉴定证实其纯度达95％以上；免疫后小鼠血清特异性IgG抗体滴度最高达1：6000，阴道粘膜冲洗液中特异性IgA抗体滴度最高达1：300；小鼠脾脏淋巴细胞增殖率达50％左右，淋巴细胞分泌的INF－γ和IL－4分别为60、108μg/ml；实验组BALB／c雌鼠妊娠率平均降至60％，每胎产仔数平均降低58％－71％。结论 含有两种特异性精子抗原中特异性氨基酸序列的新抗原可激发小鼠产生较理想的特异性体液免疫和粘膜免疫，并使小鼠受孕率下降，为研制适宜于两性的多价抗生育疫苗提供了实验基础。     

应用低压逆相脂质体包裹技术提高小分子Mart-127-35的免疫原性

为提高恶性黑色素瘤抗原Ｍａｒｔ ｌ2 7-3 5肽的免疫原性 ,有效地在体诱发保护性免疫应答 ,本研究采用负压逆相蒸发技术 (ＲＥＶ) ,制备脂质体 ,包裹Ｍａｒｔ 12 7 3 5肽 ,免疫小鼠 ,并与常规应用完全弗氏佐剂 (ＣＦＡ)相比较 ,观察 2种方法对提高该小肽免疫原性的影响。1　材料与方法1.1　脂质体包裹Ｍａｒｔ 1肽的制备与鉴定　根据参考文献 [1]的方法 ,略做改动。所得产物对ＰＢＳ(4℃ )透析过夜 ,去除游离肽和痕量有机溶剂。终产物用 0 .4 μｍ滤膜过滤。取部分用磷钨酸负染 ,在透射电镜下放大 4～ 5万倍观察形态 ,余分装保存于 - 70℃冰…     

含CpG寡聚脱氧核苷酸对肿瘤抗原肽P815AB的免疫佐剂效应研究

目的 以肿瘤抗原Ｐ８１５ＡＢ抗原肽为模式抗原,研究ＣｐＧ寡聚脱氧核苷酸（ＣｐＧ ＯＤＮ）对该肿瘤抗原表位肽的免疫佐剂效应。方法 用［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法研究ＣｐＧ ＯＤＮ体外刺激小鼠脾细胞增殖效应,用ＥＬＩＳＰＯＴ和［＾３Ｈ］－ＴｄＲ释放法检测不同构成形式的疫苗在体诱发特异性ＣＴＬ应答的效应。结果 ＯＤＮ１８２６在体外可刺激小鼠脾细胞显著增殖,经４次免疫,在“肽＋ＯＤＮ１８２６＋ＩＦＡ”组中,４     

肿瘤抗原MAGE-3预测CTL表位的合成与鉴定

目的 合成并鉴定已预测出的４个ＭＡＧＥ－３ ＨＬＡ－Ａ２限制性ＣＴＬ表位多肽,为后续研究奠定基础。方法 采用固相合成法合成多肽,经ＲＰ－ＨＰＬＣ纯化、纯度分析,用质谱进行定性鉴定。结果 ４个合成肽的纯度都在９５％以上,经质谱分析,各肽的分子量测定值与理论值相符,结论 所得多肽为高纯度的目标肽,为后续研究提供了可靠的保证。     

MAGE-12蛋白在肺癌中的表达及其意义

目的：探讨肺癌组织中MAGE-12的蛋白表达、定位及其与临床病理分型之伺的关系。方法：采用免疫组化方法检测17例肺癌标本中MAGE-12蛋白表达及细胞内定位。结果：17例中11例蛋白水平表达，表达率为64．7％，其中15例肺鳞癌中10例表达MAGE-12蛋白，2例肺腺癌中1例表达。11例蛋白水平表达的样本及1例已知阳性表达MAGE-12的LB373-MEL细胞株均定位于细胞质，反应呈棕黄色。结论：MAGE-12蛋白在肺癌有较高的表达率，基于MAGE-12基因及其蛋白作为新的疫苗可能是一个有前途的治疗肺癌的免疫治疗方法。     

抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位的初步鉴定

目的：鉴定乳腺癌分化肿瘤抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位。方法：采用量化基序法初步预测NYBR-1的HLA-A2限制性CTL表位；分子动力学方法进一步筛选量化基序法中评分最高的3个表位肽；HLA-A2亲合力鉴定预测的结果。结果：分子动力学和HLA-A2亲合力实验均证明，在量化基序法预测的3个候选CTL表位中，NY-BR-11043-1051与HLA-A2亲合力最佳。结论：NY-BR-11043-1051可能为乳腺癌分化抗原NY-BR-1的HLA-A2限制性CTL表位。     

肿瘤治疗性疫苗研究进展

肿瘤治疗性疫苗与其它治疗肿瘤的方法不同，它通过激活机体自身的免疫系统来达到治疗肿瘤的目的，从而具有高度特异性。近年来，肿瘤的治疗性疫苗，尤其是肿瘤细胞疫苗、基因工程疫苗、多肽疫苗和基因疫苗的研究，都取得了可喜的进展。其激活机体的特异性CTLs、产生抗肿瘤的保护性免疫应答的作用在动物实验中已得到肯定；多种疫苗已进入临床试验阶段，是一种有着广阔应用前景的肿瘤免疫治疗方法。     

小鼠肥大细胞瘤基因疫苗的免疫治疗作用研究

目的：探讨α－病毒RNA复制酶对基因疫苗的免疫学效应的加强作用，寻找更好的基因疫苗形式。方法：将小鼠肥大细胞瘤P815的肿瘤特异抗原PIA基因克隆到含SFV的RNA复制酶的真核表达载体pSMART2a中，以此作为肿瘤基因疫苗，观察该疫苗对P815种植瘤的防治作用、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况。结果：该重组基因疫苗在体外有很好的表达，注射后CTL的最大杀伤率为60%，而普通载体疫苗形式pCI-neo/PIA则只有40%的杀伤活性；在观察期限内，前者的动物成瘤率和动物生存率分别为20%和40%。后者则分别为60%和20％。两种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生。结论：α－病毒RNA复制酶对基因疫苗的免疫学效应有加强作用。     

肿瘤抗原MAGE-2 HLA-A2限制性新CTL表位的鉴定

目的：寻求新的HLA-A2限制性肿瘤抗原MAGE-2 CTL表位。方法：经超基序与量公基序相结合预测的肿瘤抗原MA-GE-2的4个表位作为研究对象，标准的^51Cr实验与肽结合实验相结合进行验证。结果：预测表位肽MAGE-2220-228，MAGE-2271-279经体外刺激PBMC后可有效的诱导CTL效应产生，当效/靶为100：1时溶破靶细胞效率分别为74.4％，68.2％。HLA-A2分子亲和力分析，荧光系数分别为0.61、0.24阳性肽荧光系数为0.79。结论：多肽MAGE-2 220-228可作为新的HLA-A2限制性CTL表位。     

多表位组合肽诱导HLA-A2+人PBMC产生抗原特异性CD8+ T细胞应答的研究

目的 探讨基于HBV抗原优势表位的治疗性多肽抗原组分、结构与体外诱导CD8^ T细胞应答之间的关系。方法 用计算机辅助分子设计技术，设计基于HBV抗原免疫优势性CTL表位、B细胞表位和破伤风类毒素通用Th细胞表位的3种治疗性多肽候选疫苗分子，经Merrifield固相多肽合成技术合成，并经HPLC纯化、鉴定。以HLA-A2^ 健康人和慢性乙型肝炎患者的PBMC为实验对象，进行体外诱导CD8^ T细胞应答的免疫学功能研究。结果所设计治疗性多肽分子可在体外诱导较强的抗原特异性CD8^ CTL应答；“-AAA-”铰链区设计和“Th B”细胞表位的引入可增强CTL表位肽的免疫原性。结论 提示在治疗性表位多肽疫苗的分子设计中，短而高柔性的“铰链区”设计和“Th B”细胞表位的引入可显著提高小分子表位肽的免疫原性。