经络艾灸防治乳腺癌根治术后患侧上肢水肿的效果评价

目的观察循经艾灸预防乳腺癌患者根治术后上肢水肿的效果。方法采用便利抽样法选取乳腺外科乳腺癌根治术的患者150例,随机分为对照组和观察组,每组75例。对照组行常规护理,观察组在对照组基础上在手术侧上肢循经艾灸。于术前1 d、术后第14天和术后1个月,测量两组患者患侧上肢水肿程度。结果观察组术后患侧上肢水肿发生率低于对照组(P<0.05)。结论术后循经艾灸可有效预防乳腺癌根治术后患侧上肢水肿,提高患者舒适度。     

表达载体介导的反义RNA抑制人巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的：研究表达载体介导的反义RNA对人巨噬细胞移动抑制因子(MIF)表达的抑制作用。 方法:用亚克隆技术构建可转录MIF反义RNA的真核表达载体pcDNA3-antiMIF。用lipofectamine2000分别将pcDNA3、pcDNA3-antiMIF转染可表达MIF的HEK293(293-MIF)细胞，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA表达水平。将pcDNA3-antiMIF转化人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)，建立可表达MIF反义RNA的HUVECs(HUVECs-antiMIF)细胞。将MIF的真核表达载体pSecTag-MIF转染HUVECs-antiMIF，用Real-time定量PCR鉴定MIF mRNA的表达水平。 结果:正确构建了MIF反义RNA的表达载体pcDNA3-antiMIF。MIF 反义RNA对293-MIF细胞中MIF表达的抑制水平达32%（P<0.05）。建立稳定表达MIF反义RNA的HUVECs-antiMIF细胞株。HUVECs-antiMIF中MIF的表达受到抑制，表达水平降低40%（P<0.05）。 结论:表达载体介导的反义RNA能有效地抑制MIF的表达，建立了稳定表达MIF反义RNA的HUVECs。     

微小RNA-23b-3p通过靶向TGFBR3促进人心房肌成纤维细胞纤维化相关基因表达

目的:探究微小RNA-23b-3p(mi R-23b-3p)对人心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用及其可能作用靶基因。方法:分离并体外培养房颤患者心耳中原代心房肌成纤维细胞,并用细胞免疫荧光染色实验鉴定;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-23b-3p与潜在靶基因转化生长因子β受体3(TGFBR3) 3'端非翻译区(3'-UTR)的结合作用; CCK-8、Ed U染色及Transwell实验检测细胞活力、增殖及迁移能力,RT-qPCR和Western blot法检测TGFBR3及纤维化相关基因的m RNA和蛋白表达。结果:在人心房肌成纤维细胞中过表达mi R-23b-3p不影响细胞的活力、增殖及迁移能力,但可显著增强细胞中纤维化相关基因COL1A1、COL3A1和ACTA2的表达(P 0. 05或P 0. 01)。双萤光素酶报告基因实验显示mi R-23b-3p与TGFBR3 3'-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实mi R-23b-3p可在转录水平抑制TGFBR3表达。过表达mi R-23b-3p和沉默TGFBR3均能显著促进人心房肌成纤维细胞中Smad3激活和纤维化相关基因表达(P 0. 05或P 0. 01)。结论:TGFBR3是mi R-23b-3p的作用靶基因,并介导mi R-23b-3p促进心房肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。     

隔姜灸对乳腺癌改良根治术后血液高凝状态的干预效果

目的探讨隔姜灸治疗乳腺癌改良根治术后血液高凝状态的疗效。方法将106例行乳腺癌改良根治术患者随机分为对照组(n=54)和观察组(n=52)。对照组术后采取常规护理,观察组在对照组的基础上从术后1～7 d在患者双侧血海穴、三阴交穴、足三里穴及太冲穴进行隔姜灸干预,比较两组患者术前1 d及术后7 d凝血功能相关指标。结果与对照组比较,观察组患者术后7 d凝血酶原时间、活化部分凝血活酶时间显著延长,纤维蛋白原及D-二聚体含量显著降低(均P0.05);两组均未发现出血征象。结论隔姜灸可安全有效地改善乳腺癌改良根治术后患者血液高凝状态。     

妊娠糖尿病患者孕早期血清脂联素与妊娠结局相关性的临床研究

目的:多项研究提示血清脂联素水平降低可预示妊娠糖尿病的发生,但是孕早期脂联素水平的改变与妊娠结局的相关性仍不清楚.本实验拟采用巢式病例对照研究方法探讨孕早期脂联素水平的改变与妊娠结局的相关性.方法:本研究拟通过巢式病例对照研究,观察2007年10月至2008年6月期间在广东省人民医院产检分娩的孕妇843例,-80℃保存孕早期(16～20周)血清,并追踪随访至分娩.发现单胎妊娠的妊娠糖尿病患者73例(GDM组),随机抽取年龄匹配的正常单胎妊娠妇女73例为对照组(NGDM组).采用全自动生化分析仪测定空腹血糖(FBG)水平,放免法测定空腹胰岛素(FINS)水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),采用酶联免疫方法测定脂联素水平.结果:GDM组孕早期血清脂联素水平明显低于NGDM组[(54.23±2.96)nmol/Lvs(68.24±4.54)nmol/L],P＜0.05).GDM组孕早期血清脂联素水平与HOMA1-IR呈负相关(r=-0.364,P＜0.01),但与产筛血糖和OGTT血糖水平均未发现相关性,合并巨大胎,早产的孕妇孕早期血清脂联素水平无差异.结论:妊娠糖尿病患者孕早期血清脂联素水平降低,孕早期血清脂联素水平与胰岛素抵抗有关,但未发现与血糖水平和妊娠不良结局的相关性.     

人血管内皮生长因子(VEGF165)在大肠杆菌中的表达及鉴定

[目的]克隆人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达、纯化重组VEGF165(rVEGF165)蛋白.[方法]用PCR技术,从人心脏cDNA文库中扩增VEGF165cDNA,并定向克隆入原核表达载体pET-28a中.用IPTG诱导VEGF165在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.用HisTrap亲合层析柱纯化重组rVEGF165,Western-blot鉴定.根据人VEGF165的促血管内皮细胞增殖的特性,用MTT法检测重组VEGF165的生物学活性.[结果]从人心脏cDNA文库中扩增出VEGF165cDNA片段.克隆的VEGF165cDNA长576bp,编码191个氨基酸残基,序列与文献报道一致.SDS-PAGE电泳显示,经IPTG诱导,高效表达出25ku的rVEGF165,主要存在于包涵体中,约占菌体总蛋白的20%.MTT检测显示,复性后的rVEGF165能呈剂量依赖性地促进脐静脉血管内皮细胞增殖.[结论]克隆、测定了人VEGF165基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出rVEGF165.     

编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备

[目的]制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和Gβγ活性抑制剂βARKct的重组腺病毒载体.[方法]构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-βARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-βARKct.用LipoFectamine 2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-βARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-βARKct.用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-βARKct.用rAd-GFP-βARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对β肌球蛋白重链(βMHC)基因表达的影响.[结果]将pAdTrack-CMV-βARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆.重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有βARKct编码基因.透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106 pfu/mL.rAd-GFP-βARKct表达的βARKct可抑制乳鼠心肌细胞βMHC的高表达.[结论]成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达βARKct的重组腺病毒rAd-gfp-βARKct.     

MEF2C介导microRNA-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用

目的:研究微小RNA-214(mi R-214)对心肌细胞肥大的调控作用及其可能的作用靶基因。方法:建立血管紧张素Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)诱导的C57BL/6乳小鼠心室肌细胞肥大模型;双萤光素酶报告基因实验检测mi R-214与潜在靶基因MEF2C 3’端非翻译区(3’UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和Western blot法分别检测MEF2C及肥厚标志物的m RNA和蛋白表达水平。结果:心肌肥厚标志物ANP、ACTA1和β-MHC,以及mi R-214的表达在Ang-II诱导肥大的小鼠心肌细胞中显著增强;双萤光素酶报告基因实验提示mi R-214与MEF2C 3’UTR相互作用,证实mi R-214可在转录水平抑制MEF2C的表达,MEF2C蛋白水平在肥大的心肌细胞中显著上调;过表达mi R-214及沉默MEF2C均能一致性地抑制Ang-Ⅱ诱导的心肌细胞中肥大标志物的表达。结论:MEF2C是mi R-214的靶基因,并介导了mi R-214发挥抑制心肌细胞肥大的作用。     

HL-1心肌细胞中桥粒蛋白基因表达下调对Nav1.5功能的影响

目的采用基因沉默技术抑制HL-1细胞的桥粒蛋白（DSP）基因表达以明确DSP与Nav1.5的结构和功能关系。方法用基
因沉默技术抑制DSP基因的表达,然后采用Western blotting检测HL-1细胞DSP和Nav1.5蛋白的表达,用双免疫荧光方法检测
DSP与Nav1.5蛋白的表达与定位情况,并用全细胞膜片钳技术检测细胞钠通道的电生理特征。结果与空白组和对照组相比,
siRNA-DSP组的DSP和Nav1.5 蛋白表达量降低。免疫荧光检测发现空白组和对照组DSP与Nav1.5蛋白存在共定位情况,而
siRNA-DSP组DSP和Cx43蛋白共定位则遭到破坏,并且膜片钳检测发现siRNA-DSP组峰值电流从（156.3±6.2）pA/pF 减少至
（41.8±3.1）pA/pF（P<0.05）,电压依赖的失活曲线V0.5从-42 mV左移至-61 mV（P<0.05）和从失活恢复时间延长。结论DSP表
达抑制不仅使DSP与Nav1.5的共定位特征遭到破坏,而且还改变了Nav1.5电生理特征。
     

隔姜百笑灸对乳腺癌根治术后患者术侧上肢功能恢复的影响

目的 探讨隔姜百笑灸对乳腺癌根治术后患者术侧上肢功能恢复的影响.方法 采取便利抽样法选择2015年10月—2016年12月在我院乳腺二病区实行乳腺癌根治术的101例患者,按入院的先后顺序分为对照组(n=52)和观察组(n=49).对照组行全程功能锻炼,观察组在全程功能锻炼的基础上行隔姜百笑灸治疗.于术前1 d及术后第14天,对2组患者术侧肩关节活动度及术侧握力进行测量和比较.结果 观察组术后第14天肩关节活动度及握力的恢复情况优于对照组(P<0.05).结论 隔姜百笑灸联合全程功能锻炼可有效地促进乳腺癌根治术后患者肩关节活动度及握力的恢复.