人脐血前红系祖细胞(BFU-E)体外培养的动态观察

<正> 脐血含各系造血干/祖细胞和多种造血集落刺激因子,是继骨髓、外周血、胎肝之后第4个新开发的、可移植的造血干细胞来源;还可静脉输注,用于一切放化疗后血细胞减少的病人、刺激造血功能,从而扩大了血源供应。笔者通过对37份人脐血和11份正常骨髓的BFU-E体外培养观察,再次证明脐血含有丰富的造血干细胞,并对脐血红系定向祖细胞的2个亚群(CFU-E、BFU-E)进行了动态观察,结果报告如下。     

流行性乙型脑炎病毒E蛋白基因在大肠杆菌中的克隆与表达

目的;获得JEV E蛋白基因,构建重组表达载体并在E.coli中高效表达.方法:参照GeneBank中的日本乙型脑炎病毒SA14-14株序列设计一对特异性引物,采用RT-PCR法扩增E基因全长,克隆至PUCm-T载体,经测序证实后克隆至原核表达载体pET32a中,转化入BL21(DE3),IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析.结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了JEV E蛋白基因全长1500bp,成功构建了重组质粒pET-32a/JEV E,SDS-PAGE分析显示目的蛋白主要以包涵体的形式在大肠杆菌中获得表达,表达量占总菌体蛋白的35%.结论:在大肠杆菌中成功表达了JEV E蛋白,为ELISA早期诊断试剂盒的研制和E蛋白基因结构与功能的分析奠定了基础.     

八肽胆囊收缩素刺激神经元所致信号转导中磷蛋白的动力学变化研究

目的 研究八肽胆囊收缩素（Octa—cholecystokinin，CCK8）刺激小鼠神经元所致信号转导中磷酸化蛋白的时间动力学特征。方法 培养乳小鼠神经元，随机分为CCK8刺激组和对照组，^32P-NaH2PO4标记后分别给予CCK8（10^-7mol／L）和等量无磷培养基，作用不同时间后液氮终止反应，经双向电泳、放射自显影，获得磷酸化蛋白质的电泳图谱。利用PDQuest 2D分析软件并结合Swiss—Prot蛋白质数据库对磷酸化蛋白质斑点进行分析并绘制出一些重要的磷酸化蛋白质磷酸化改变的时间动力学曲线。结果 CCK8作用不同时间后。神经元蛋白质磷酸化水平出现明显改变，通过对双向电泳图谱中100多个蛋白质斑点的定性分析，初步确定了小鼠神经元CCK8信号转导相关磷酸化蛋白包括多种蛋白激酶、磷蛋白磷酸酶、胞内信号分子、多种受体、转录因子及核蛋白等。对其中11种重要的信号分子动力学分析结果显示：曲线多数呈峰型，且蛋白质分子磷酸化达到峰值时间和高磷酸化状态持续时间各不相同，而PKAα表现为较持续的激活状态。MK07、GBOα仅则呈现双峰型。结论 CCK8在神经元的信号转导具有整合与复杂自适应控制的特征。     

分化抑制因子Id1基因在白血病细胞中的表达及意义

目的:研究分化抑制因子-1(inhibitors of differentiation,Id1)在白血病白细胞中的表达,探讨其与急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病发病的相关性,为白血病的诊断、治疗提供参考.方法:应用KT-PCR.方法,检测Id1在健康志愿者、急性非淋巴细胞白血病、慢性粒细胞白血病白细胞中的表达情况.结果:与健康自愿者相比,Id1基因在急性非淋巴细胞和慢性粒细胞白血病患者外周血白细胞中的表达均降低,有统计学意义(P<0.05),而后两者比较无统计学意义.结论:Id1在白血病细胞中的表达明显降低,与白血病的发病有一定相关性.     

体外培养的高血压病动脉平滑肌细胞端粒酶活性检测及其在发病学上的意义

目的:探讨体外培养的高血压病动脉平滑肌细胞端粒酶活性与高血压的发病关系。方法:采用PCR-ELISA法检测10例高血压病患者和8例血压正常者体外培养的肠系膜动脉平滑肌细胞(SMC)端粒酶活性。结果:10例高血压端粒酶阳性表达9例,阳性率90％。对照组血压正常病人8例,端粒酶阳性表达2例,阳性率25％。差异有显著性(P<0.05)。结论:体外培养的高血压病动脉平滑肌细胞有端粒酶活性的表达,端粒酶活性可能与高血压发病有关。     

槲皮素对LPS延迟中性粒细胞自发性凋亡效应的抑制作用

目的：研究槲皮素对接受细菌脂多糖(LPS)刺激的中性粒细胞(PMN)自发性凋亡的影响，探讨槲皮素的抗炎作用机制。方法：以人外周血PMN为研究对象，选择光镜和流式细胞术检测细胞凋亡情况，对裂解的片段化DNA进行定量(二苯胺测定法)和定性(琼脂糖凝胶电泳)分析。结果：槲皮素(1～100μmol／L)对PMN的自发性凋亡率并无影响，但却能部分恢复由LFS所延迟的PMN自发性凋亡进程。当槲皮素的浓度为40μmol／L时，其恢复作用达到最大。结论：槲皮素对LPS延迟PMN自发性凋亡的效应产生了抑制作用，减轻了因预激因子活化PMN而加重的炎症反应，部分揭示了槲皮素的抗炎作用机制。     

槲皮素抑制人膀胱癌细胞BIU-87生长并诱导其凋亡的研究

槲皮素(quercetin,Que)是一种天然的黄酮类化合物,广泛存在于植物界,大约68%的植物中都含有槲皮素.研究发现槲皮素具有扩张冠脉、清除自由基、抗炎、调节免疫及抗肿瘤的作用[1].本实验旨在研究槲皮素抑制人膀胱癌细胞BIU-87细胞增殖的作用,并探讨其可能的作用机制.     

Mcl-1和Puma在宫颈癌组织中表达的初步研究

目的探讨新的凋亡抑制基因Mcl-1在宫颈癌组织中的表达及其与Puma表达的相关性。方法应用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶连接法,检测Mcl-1和Puma基因在10例正常宫颈组织及46例宫颈癌组织中的表达。结果 Mcl-1在10例正常宫颈组织中表达较低。46例宫颈癌组织中,40例Mcl-1表达强阳性,占80.7%。Puma的表达仅13例,占32.5%。基因表达阳性率与宫颈癌的病理分级和临床分期有关,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 Puma和Mc-1参与了宫颈癌的发生、发展,并且两者在癌组织中的表达可能存在某些相关。     

培养心肌细胞间连接形成的电镜观察

借助改良的透射电镜技术成功地显示了培养新生大鼠的心肌细胞及其连接的超傲结构特征。培养7-8天时心肌细胞含散在的粗、细肌丝或平行排列和分支的肌原纤维,其间线粒体和糟原颗粒十分丰富。心肌细胞间连接表现为简单性连接,中间连接和闰盘等形式,其形成机理可能与细胞生长发育时所处的周围环境条件不同有关。