Caco-2建立肠黏膜屏障模型及其在通透性研究中的应用

目的：利用 Caco-2细胞建立体外肠黏膜屏障模型,系统评价并初步探讨其在炎症损伤后黏膜通透性改变中的应用。方法体外培养 Caco-2细胞,接种于 Transwell 板上,每日观察细胞形态;自培养第5天起,隔日测细胞膜的跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TEER);对于 TEER 值达标准的孔测定荧光黄透过率,进行透射电镜的完整性验证。应用培养21 d 的 Caco-2细胞屏障,加入不同浓度(0、50、100、200 nmol /L)的血小板活化因子(platelet-activating factor,PAF)孵育24 h,光镜、电镜观察形态学改变,检测 TEER 和荧光黄透过率,应用间接免疫荧光和 Western blot 观察 ZO-1蛋白的分布及表达。结果Caco-2细胞单层 TEER 从第5～15天逐渐增加,在第15天已经达到600Ω?cm2,平台期保持至第21天;在此期间,细胞形成紧密单层,电镜下细胞呈高分化,细胞间形成紧密连接,绒毛整齐,极性形成;荧光黄透过量极低,体外肠上皮细胞屏障形成。加入 PAF 后,以100 nmol /L 对黏膜屏障通透性影响最大：电镜下见紧密连接结构破坏、断裂,细胞表面微绒毛脱落、稀疏;免疫荧光可见紧密连接的标志蛋白 ZO-1荧光信号减弱,ZO-1环断裂,胞浆内可见阳性染色,提示其向膜下转移。此时,TEER 值下降,荧光黄透过量明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P ＜0.01),与形态学改变规律一致;ZO-1蛋白表达亦降至最低,与对照组相比差异有统计学意义(P ＜0.01)。结论经形态学及细胞通透性验证,培养2～3周的 Caco-2细胞可形成肠屏障模型,用于体外肠黏膜屏障的研究;PAF 影响紧密连接相关蛋白的表达,破坏紧密连接结构,从而影响肠黏膜屏障通透性。     

Toll样受体2对肠上皮细胞屏障通透性的保护作用及机制

目的 肠上皮细胞屏障的损伤与多种胃肠道疾病的发生密切相关,有效维持屏障功能是治疗这些疾病的关键.本研究试图通过体外实验探讨Toll样受体2(toll-like receptor,TLR2)对肠上皮细胞屏障通透性的保护作用及其机制.方法 正常组将未转染Caco-2细胞,TLR2基因沉默Caco-2细胞,TLR2基因过表达Caco-2细胞培养21d形成单层,检测跨膜电阻(transepithelial electrical resistance,TEER)值,其反应上皮细胞屏障的通透性.炎症组3类细胞分别于培养第19d给予10 ng/ml IL-1β刺激48 h,于第21d检测TEER值.抑制剂组3类细胞分别在IL-1β前再给予PI3K/Akt通路抑制剂处理1h,于第21 d检测TEER值.结果 TLR2基因沉默能够显著减低Caco-2细胞单层的TEER值(P＜0.01),而TLR2基因过表达能够升高TEER值,但不具有统计学意义.TLR2能够防止IL-1β造成的TEER值下降(P＜0.01),此作用在给予PI3K/Akt通路抑制剂后消失.结论 TLR2对肠上皮细胞屏障通透性具有调节作用,并且能够防止炎症造成的通透性增高,这种保护作用由PI3K/Akt通路参与介导.     

血小板活化因子引起肠上皮细胞屏障非凋亡依赖性的通透性增高

 目的 研究血小板活化因子对肠上皮细胞屏障通透性的影响,并探讨其作用位点。方法 体外培养Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型。不同浓度PAF(0, 50, 100, 200nM)作用24h,应用TEER和荧光黄透过量检测肠上皮细胞屏障通透性;应用Annexin V和Hoechst染色,用荧光显微镜和流式细胞仪检测肠上皮细胞凋亡情况;透射电镜下观察紧密连接。结果 Caco-2细胞培养21天左右可形成类似人肠黏膜上皮细胞屏障结构,给予50nM PAF即可引起TEER的下降和荧光黄透过率的增加,PAF100nM组肠上皮屏障通透性增加达到高峰,与对照组相比,差异显著(P<0.01)。实验并未发现PAF引起明显的细胞凋亡增加,但透射电镜下出现了紧密连接的断裂和细胞超微结构的破坏。结论 PAF可直接引起肠上皮细胞屏障通透性增加,该作用是凋亡非依赖性的,作用位点在旁细胞途径。     

急性有机磷中毒患儿治疗中发生反跳现象分析

有机磷急性中毒是城乡儿童常见的急症之一。中毒患儿经过合理的抢救治疗,多数可迅速缓解,但部分患儿可在症状明显缓解后的恢复期,病情突然急剧恶化,重新出现有机磷农药中毒症状,甚至较治疗前明显加重,临床上将该现象称为“反跳”。它为有机磷农药中毒的主要致死原因之一。...     

炎症性肠病的生物学治疗进展及在儿童中的应用现状

炎症性肠病(IBD)是一类病因尚不十分明确的慢性非特异性肠道炎症性疾病,发病率在成人及儿童均有逐年增高的趋势,传统治疗效果欠佳.近年来,随着抗TNF-α单克隆抗体等生物制剂的问世,给IBD患者也带来更多新的有效的治疗选择.但随之也引发了对生物制剂近、远期不良反应,适应证选择,医疗成本等的争论.现就IBD的生物学治疗进展及在儿童中的应用现状作一介绍,并探讨以生物治疗为中心的“下阶梯”治疗模式.     

53例初诊儿童炎症性肠病临床分析

目的探讨儿童炎症性肠病(IBD)初诊临床特点,提高对儿童IBD的认识。方法回顾性分析2005年1月至2015年10月于中国医科大学附属盛京医院儿科初诊,并确诊为IBD的53例患儿的临床资料,包括临床表现、实验室检查、影像学、内窥镜和病理组织学结果,以及治疗方案。结果 IBD患儿的临床表现主要以腹痛、腹泻、便血、发热为主。其中,溃疡性结肠炎(UC)患儿较克罗恩病(CD)患儿更易出现腹泻及便血症状(P<0.05),而CD患儿腹痛症状更为明显(P<0.05),同时更易出现肠外表现,34.0%患儿出现生长发育和营养障碍,84.9%患儿存在不同程度的精神状态改变。实验室检查结果以炎症性指标(如白细胞、C-反应蛋白、血沉)升高为主,UC和CD患儿的血清白蛋白比较,差异有统计学意义(P<0.05)。UC和CD患儿,内镜及病理表现明显不同,MRE同时观察到肠壁强化和瘘管及肿块的形成。51例单纯药物治疗,2例联合手术治疗。其中,13例患儿应用了英夫利昔单抗(IFX)治疗,诱导缓解迅速,身高、体质量有所增长。结论对临床出现腹痛、腹泻、便血、发热以及营养状态不佳的患儿,要警惕IBD的发生;需结合生化、影像学、内镜、病理进行综合诊断;MRE无创、无辐射,值得推广;中重度患者,IFX可以迅速缓解病情,促进生长发育。     

Notch信号通路对甲型H1N1流感病毒感染者特异性CD8+T细胞的调控作用

目的 检测Notch受体和配体在甲型H1N1流感患者中的表达,观察Notch信号通路对甲型H1N1流感病毒特异性CD8+T细胞的调控作用.方法 本研究入组轻症甲型H1N1流感患者27例、重症甲型H1N1流感患者11例和健康对照者18例.实时定量PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)中Notch受体和配体mRNA的相对...     

以脑炎为首发疾病的小儿肺炎支原体感染14例分析

目的：探讨小儿肺炎支原体感染引起脑炎的临床特点及诊疗。方法：对14例以脑炎为首发疾病的小儿肺炎支原体感染进行回顾性分析。结果：临床诊断的14例患儿给予足疗程红霉素及对症治疗后,10例治愈,3例好转,1例死亡。结论：肺炎支原体感染首发症状多样,因此,在肺炎支原体感染流行高峰期间,如遇脑炎患儿,应查肺炎支原体抗体,以期早期诊断和治疗。     

宫内窒息后新生鼠胃粘膜表皮生长因子及其受体的研究(英文)

目的　新生儿窒息可引起糜烂、溃疡和出血等胃肠粘膜损伤。既往成年动物研究发现表皮生长因子 (EGF)及其受体 (EGFR)在急性胃肠粘膜损伤后的修复过程中发挥重要作用。该文旨在探讨EGF和EGFR在宫内窒息新生鼠胃粘膜的表达及其在胃粘膜损伤后修复过程中的作用。方法　用孕足 2 1d大鼠制作成宫内窒息模型 ,将剖宫产后存活的窒息组和对照组新生鼠在出生 0、2 4、4 8和 72h断头处死 ,留取胃标本。应用免疫组化方法和反转录 -多聚酶链反应动态监测新生鼠胃粘膜EGF、EGFR和EGFRmRNA的表达 ,同时观察胃组织形态学改变。结果　 (1 )窒息组新生鼠出现胃粘膜损伤 ,于生后 4 8h损伤最重 ,之后开始恢复。 (2 )对照组新生鼠胃粘膜有较弱的EGF和EGFR表达 ,各时间点差异无显著性 (P >0 .0 5 )。 (3)窒息组新生鼠胃粘膜EGF和EGFR的表达随生存时间增加而增强 ,在 4 8h达高峰之后开始下降 ,生后 2 4 ,4 8,72h胃粘膜EGF表达与对照组同时相比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 1或 0 .0 5 )。 (4 )窒息组新生鼠胃粘膜EGFRmRNA的表达于 2 4h达高峰 ,较对照组同时间点相比增加 ,差异非常显著性 (P <0 .0 1 ) ,之后开始减少。结论　EGF和EGFR可能在窒息后新生鼠胃粘膜损伤后的修复过程中发挥重要作用