C3d及荷C3d免疫复合物的测定与意义

用抗人Ｃ３和抗人ＩｇＧγ球蛋白组分作固相反应物，建立了检测补体活化片段Ｃ３ｄ及荷Ｃ３ｄ－ＩＣ的ＥＬＩＳＡ法，并对临床各类疾病患者血清Ｃ３ｄ和Ｃ３ｄ－ＩＣ的水平进行了测定，结果表明：慢性肾炎，ＳＬＥ，慢性乙肝及肺炎患者血清Ｃ３ｄ总体水平均较对照组显著增高，分别有５８．５％～７２．２％的病人Ｃ３ｄ含量高于正常上限（Ｐ〈０．０１），且该类病人亦有较高的Ｃ３ｄ－ＩＣ阳性检出率（肺炎患者例外）本项研究中，Ｃ     

端粒重复序列扩增-银染色法用于端粒酶活性测定的研究

目的建立端粒重复序列扩增（TRAP）- 银染色技术,探讨端粒酶活性检测在肿瘤诊断中的意义。方法用裂解液提取组织细胞中的端粒酶模板,在特异引物作用下进行PCR 扩增,所得产物用氯仿∶异戊醇（24∶1）处理浓缩,作聚丙稀酰胺凝胶垂直板电泳,经硝酸银染色分析端粒酶活性。结果TRAP-银染色法能准确特异地检测小鼠骨髓瘤细胞（SP 2/0）的端粒酶活性,灵敏度可达 1×10     

45例SLE患者抗CyP与ENA多肽抗体谱测定结果分析

0　引　　言系统性红斑狼疮 ( SLE)是一种全身性的自身免疫病 ,其血清学异常常表现为产生一系列特异的自身抗体 ,如抗 Sm、抗 ds- DNA、抗 U1- RNP等 ,其中可提取的核抗原 ( ENA)多肽抗体谱的出现在 SLE的发病机制中具有重要作用。近年来 ,国外有学者发现 SLE患者存在有较高水平的亲环素 ( Cy P)自身抗体 ,并与疾病的活动性密切相关 [1]。为探讨 Cy P自身抗体与 ENA多肽抗体间的关系 ,作者以 SLE患者为研究对象 ,对二者进行了测定和比较 ,现报告如下。1　材料与方法1 .1　主要试剂　重组人 Cy PA( rh Cy PA)抗原、辣根过氧化…     

亲环素及其自身抗体与SLE活动性的相关性探讨

目的：探讨血浆与淋巴细胞内亲环素（ＣｙＰ）水平及抗亲环素自身抗体与全身性红斑狼疮（ＳＬＥ）活动性的关系。方法：用重组人亲环素（ｒｈＣｙＰ）制备单克隆和多克隆抗体,建立双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法,测定血浆和细胞内ＣｙＰ水平,用ｒｈＣｙＰ包被反应板微孔,建立间接ＥＬＩＳＡ法检测抗ＣｙＰ自身抗体,对活动性和非活动性ＳＬＥ患者进行了观察。结果：ＳＬＥ患者含量分别为（３２３±４２０）μｇ／Ｌ和（２６４０±６５０）μｇ／ｇ蛋白,均显著高于正常对照组的（１６５±８０）μｇ／Ｌ和（２２９０±３８０）μｇ／ｇ蛋白;其中活动性ＳＬＥ患者又显著高于非活动性ＳＬＥ（Ｐ＜０．０５）。ＳＬＥ抗ＣｙＰ自身抗体阳性率（４８％）显著高于正常人（２．５％）,抗ＣｙＰ阳性与皮肤粘膜损害、关节痛、发热、白细胞减少、抗Ｓｍ抗体阳性密切相关。结论：血浆和淋巴细胞内ＣｙＰ升高和抗ＣｙＰ自身抗体阳性可反映ＳＬＥ活动性。     

抗人分化抑制因子3蛋白单克隆抗体的制备和鉴定

目的 分化抑制因子3(inhibitor of differentiation 3,Id3)是重要的细胞生长调控分子,在细胞增殖、分化等过程中发挥重要作用.文中探讨在大肠杆菌中表达及纯化重组人Id3蛋白,制备抗人Id3单克隆抗体(McAb),以进一步研究Id3的生物学功能及其临床应用.方法 将重组表达载体Id3/pET32a转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转化菌表达Id3重组融合蛋白(Trx-His-hId3),通过镍亲和层析柱纯化Trx-His-hId3.以纯化的Id3重组蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备Id3 McAb,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)及Western blot进行抗体鉴定.结果 经免疫小鼠、脾细胞分离、细胞融合及克隆筛选等步骤,筛选出2株分泌抗人Id3 McAb的杂交瘤细胞株,分别命名为McAb 6G7和6G9,免疫球蛋白亚类鉴定均为IgG1亚类.Western blot分析表明,McAb 6G7和6G9能与重组人Id3蛋白特异性结合.间接ELISA法检测2株细胞冻融前后所产生上清中的抗体效价均分别为1∶ 1000、1∶ 5000.结论 成功制备了抗人Id3 McAb,为研究该蛋白的功能提供了有利工具.     

应用单克隆抗体对甲胎蛋白及其酶解片断抗原决定簇的研究(摘要)

<正> 本文报道了应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了11种单克隆抗体。应用这些单克隆抗体固相夹心免疫放射测定法鉴别出甲眙蛋白(AFP)分子上4个不同的抗原决定簇。将AFP以牛胃蛋白酶进行水解。以聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,获得一分子量为25 000D的片断。用抗血清放射免疫竞争法测出此片断免疫活性为完     

固相功能化免疫分子层的制备与形貌表征

抗原与抗体的特异结合 ,主要是基于抗原和抗体分子结构及立体构型的互补 ,以及由多种因素造成二者分子间引力参与下发生的可逆性免疫反应。现行的固相免疫测定中 ,都是依据上述原理而设计 ,其与传统的“液相”血清学试验本质区别是有一个预先将抗原或抗体固相到载体表面的步骤 ,抗原 抗体结合反应由液态环境转移到了固相载体表面进行。因此 ,首先将特定的抗原或抗体吸附于固相上 ,是进行此类分析的前提 ,且后续测定结果的好坏 ,与免疫分子固相化状况密切相关。近年来 ,一些研究者为改善固相免疫分析结果 ,对各种抗原或抗体的固相化进行了较…     

质谱技术对类风湿关节炎患者滑膜免疫复合物差异蛋白质的分析

目的利用质谱技术对类风湿关节炎(RA)患者关节滑膜中的免疫复合物进行全面的抗原谱分析。方法选取本院3例RA患者和3例骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者的关节滑膜,通过蛋白质提取、免疫沉淀、胶内酶解和液相色谱串联质谱系统,对滑膜免疫复合物进行抗原谱分析。用FOT值(fraction of total)评价蛋白质的丰度,通过FOT值的比较筛选出上调蛋白和下调蛋白。用David和String软件对差异蛋白质进行功能富集、相互作用网络和信号通路分析。结果在RA和OA患者的关节滑膜组织免疫复合物中分别鉴定出511和526种蛋白质。通过维恩图比较,仅在RA组出现的蛋白质有170种。RA组有45种蛋白质发生上调,85种蛋白质发生下调。结论热休克蛋白HSP90AA1、HSP70、人类白细胞抗原(HLA)-G、硫氧还蛋白、膜联蛋白A2和玻连蛋白可能通过不同的机制参与RA的发病过程,具有RA新的生物标志物的潜在应用价值。     

婴幼儿感染金黄色葡萄球菌耐药性与耐药基因研究

目的 调查婴幼儿感染标本分离的金黄色葡萄球菌耐药性与耐药基因携带状况。方法 收集南京市儿童医院2013年10-12月婴幼儿感染标本分离出的金黄色葡萄球菌20株,首先采用K-B法和E-test法做抗菌药物敏感性试验,再用聚合酶链反应(PCR)的方法分析β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ、mecA)及大环内酯类药物耐药基因(ermA、ermB、ermC、mphC、msrA)。结果 20株金黄色葡萄球菌对头孢西丁、青霉素、红霉素、克林霉素的耐药率,分别为50.0%、100.0%、40.0%、40.0%;耐药基因共检出mecA基因11株占55.0%、ermB基因1株占5.0%、ermC基因7株占35.0%;该组菌中17号株对头孢西丁敏感,检出mecA基因,其他菌株头孢西丁药敏结果耐药株均能检出mecA基因,头孢西丁敏感株均未检出mecA基因。结论 mecA、ermB、ermC基因是该组菌对β-内酰胺类和大环内酯类药物耐药的重要原因,对婴幼儿感染标本分离的金黄色葡萄球菌进行β-内酰胺类药物耐药基因(blaZ、mecA)及大环内酯类药物耐药基因(ermA、ermB、ermC、mphC、msrA)检测研究尚为国内首次。     

类风湿关节炎免疫学发病机制研究的最新进展

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性多关节炎为特征的慢性、进行性、侵袭性风湿免疫病。RA不仅自身免疫系统功能紊乱,也涉及心、肺、肾、神经和血管等多个系统,不同程度地影响着患者的健康和生活质量。该文探讨了RA免疫学发病机制研究的最新进展,以加深人们对疾病的认识,为RA的基础研究和临床治疗提供讨论的依据与新的方向。