利用双SLD光源提高OCT纵向分辨率的理论研究

提高光学相干层析成像(Optical Coherence Tomography: OCT)系统纵向分辨率的关键是选取合适的光源, 本文将双SLD光源代替传统OCT系统中的单个SLD光源,通过理论分析和计算机仿真,表明双SLD光源能有效提高OCT系统纵向分辨率.     

基于PCR指纹技术鹿鞭鉴定方法的建立及检测试剂盒的研制

目的 建立鹿鞭及其伪品指纹鉴定方法,开发鹿鞭DNA检测试剂盒.方法 采用改良的SDS方法从鹿鞭及牛鞭基因组中提取DNA.以鹿鞭线粒体细胞色素b作为靶基因,设计鹿鞭特异性引物,利用现代DNA指纹技术,研制了鹿鞭DNA提取和检测试剂,建立鹿鞭指纹鉴定方法,开发出鹿鞭DNA检测试剂盒.结果利用PCR指纹技术提取的鹿鞭基因组DNA为21000 bp,纯度为1.80±0.10之间;应用特异性引物可准确鉴别鹿鞭及牛鞭样品,鹿鞭特异性扩增产物DNA分子片段为307 bp,而牛鞭及阴性对照无扩增条带;自主研发鹿鞭DNA检测试剂盒经反复冻融依然有效,多次进行特异性、稳定性和重现性试验,结果完全一致.结论 鹿鞭DNA检测试剂盒可作为鹿鞭鉴定的有效方法,该方法客观、准确、方便,可有效区分鹿鞭及其伪品.     

肿瘤归巢肽-近红外荧光蛋白融合蛋白的制备及其荧光特性

目的 构建肿瘤归巢肽（THPs）-近红外荧光蛋白（NIRFP）miRFP670- LyP1融合蛋白的原核表达载体,纯化融合蛋白,研究融合蛋白的近红外荧光特性。 方法 采用限制性核酸内切酶EcoRⅠ和Not Ⅰ对pmiRFP670-N1质粒和pET-28a质粒进行双酶切,构建pET-miRFP670原核表达载体,通过点突变引入LyP-1的DNA序列,构建重组表达载体pET-miRFP670-LyP1;将测序正确的重组表达载体转化至大肠杆菌BL21细胞中,SDS-PAGE电泳法检测不同温度（16 ℃和37 ℃）、不同异丙基硫代半乳糖苷浓度（0.1、0.5和1.0 mmol·L^－1）诱导下融合蛋白原核表达量;采用Ni-NTA树脂亲和纯化融合蛋白,检测miRFP670-LyP1蛋白原核表达量;采用荧光显微镜观察乳腺癌4T1细胞中miRFP670-LyP1融合蛋白的细胞内吞形态表现。 结果 检测到长度约为5 343和973 bp的DNA条带,与pET-28a载体及miRFP670基因片段大小相符。DNA测序,LyP1序列成功插入至pET-miRFP670表达载体中。在16 ℃时miRFP670-LyP1融合蛋白的可溶性蛋白表达量较37 ℃时更高。采用Ni-NTA树脂纯化得到了高纯度的miRFP670-LyP1融合蛋白。荧光成像,miRFP670-LyP1融合蛋白可被乳腺癌4T1细胞高效内吞。 结论 成功构建了pET-miRFP670-LyP1原核表达载体,融合蛋白在低温（16 ℃）较常温（37 ℃）诱导的可溶性蛋白表达量更高,亲和层析得到了高纯度的融合蛋白,融合蛋白被乳腺癌4T1细胞高效内吞并显示出近红外荧光。     

2016-2020年安徽省医疗事故技术鉴定情况分析

为提高医疗质量,有效防范医疗纠纷,对2016-2020年5年间578例医疗事故技术鉴定的案例资料进行分析,找出医疗事故易发科室和重点环节,分析事故原因,寻找相关对策。为各级医疗机构减少防范医疗纠纷提供参考。     

载奥沙利铂类弹性蛋白多肽水凝胶的制备及其对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用

目的 制备担载奥沙利铂（OXA）的类弹性蛋白多肽（ELPs）水凝胶,研究其体外药物释放情况及对小鼠结肠癌CT26细胞的杀伤作用。 方法 利用大肠杆菌（E.coli）系统表达ELPs原核蛋白,利用可逆相变循环法（ITC）进行蛋白纯化,将ELPs蛋白溶液与交联剂四羟甲基氯化磷（THPC）混匀制备水凝胶,扫描电子显微镜（SEM）观察水凝胶的超微结构,CCK-8法检测不同浓度ELPs水凝胶处理后CT26细胞和小鼠成纤维NIH3T3细胞存活率,活/死细胞染色法观察30和40 g?L^－1 ELPs水凝胶作用48 h后CT26细胞存活情况。制备载OXA的ELPs水凝胶,检测其在不同pH值（6.5和7.4）缓冲液中的药物释放情况,CCK-8法检测加入载不同浓度（0.25、1.00、4.00、16.00和64.00 mg?L^－1）OXA的ELPs水凝胶浸泡液后各组CT26细胞存活率和处理不同时间各组CT26细胞存活率。 结果 凝胶电泳分析,E.coli诱导后在预计相对分子质量38 000附近出现明显加粗的蛋白条带,ITC纯化后泳道中无明显杂蛋白存在。ELPs蛋白溶液中加入THPC后由透明液体状态转变为不透明的白色水凝胶,SEM观察显示出排列整齐的孔隙和三维结构;CCK-8法检测,经不同浓度ELPs蛋白处理后CT26细胞和NIH3T3细胞存活率仍接近100%;活/死细胞染色,ELPs水凝胶处理后的CT26细胞在荧光显微镜下呈现明亮的绿色荧光。载OXA的ELPs水凝胶能在体外持续释放OXA,在pH值6.5条件下OXA的释放速度较pH值7.4条件下稍快;CCK-8法检测,载不同浓度OXA的ELPs水凝胶浸泡液呈剂量依赖性抑制CT26细胞增殖,且随孵育时间的延长CT26细胞存活率逐渐降低。 结论 载OXA的ELPs水凝胶具有持续释放OXA的特性,能够高效且持续地杀伤小鼠结肠癌CT26细胞,可作为一种安全有效的药物递送载体用于抗肿瘤研究。     

红细胞单采术治疗煤矿地区继发性红细胞增多症临床观察

目的：观察红细胞单采术治疗继发性红细胞增多症患者的临床效果。方法：选取2019年9月—2020年9月接诊的继发性红细胞增多症患者130例,使用血细胞分离机进行红细胞单采术治疗,观察治疗前后患者的血细胞比容、血红蛋白、白细胞、血小板变化;观察治疗后血红蛋白再次大于180 g/L的时间,预测需再次单采的间隔时间。结果：患者治疗前后血红蛋白、血细胞比容明显下降(P<0.05),明显改善了患者头晕、头痛、耳鸣等红细胞增多症状。白细胞、血小板治疗前后比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血红蛋白再次大于180 g/L的时间间隔为(192.45±54.84) d。结论：红细胞单采术适用于继发性红细胞增多症的患者。     

免疫检查点TIGIT慢病毒表达载体的构建和稳定表达TIGIT细胞系的建立

目的：构建T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域-绿色荧光蛋白（TIGITGFP）慢病毒表达载体,建立稳定表达TIGIT-GFP的细胞系,探讨TIGIT-GFP融合蛋白在稳定表达细胞系中的表达情况。方法：将TIGIT质粒和慢病毒载体pLenti-GFP分别采用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,凝胶回收后连接构建重组质粒pLenti-TIGIT-GFP。将测序正确的重组质粒转染人胚胎肾HEK293T细胞作为实验组,转染TIGIT质粒的HEK293T细胞作为对照组,转染48 h后荧光显微镜下观察细胞膜上GFP表达情况。将实验组细胞继续培养,采用嘌呤霉素筛选2周后,挑取单克隆扩大培养,荧光显微镜观察细胞膜上GFP表达情况,Western blotting法检测在转染的人胚胎肾HEK293T细胞中TIGIT-GFP蛋白表达情况。结果：酶切鉴定,TIGIT基因成功插入pLenti-GFP表达载体,DNA测序未检测到突变发生。实验组细胞膜上检测到GFP表达。Western blotting法检测,实验组细胞裂解液中检测到TIGIT-GFP特异性条带。结论：成功构建pLenti-TIG...     

乳腺癌细胞来源的细胞膜纳米囊泡制备及靶向特性

  目的  制备乳腺癌细胞来源的细胞膜纳米囊泡（NVs），探讨其基本特性、肿瘤细胞内吞，在荷瘤小鼠模型中的体内分布，探究其肿瘤靶向特性。  方法  体外培养乳腺癌4T1细胞，通过超速离心法提取细胞膜，利用脂质体挤出仪制备细胞膜纳米囊泡。应用动态光散射方法检测囊泡粒径分布，利用透射电子显微镜研究囊泡的形貌特征。通过检测囊泡在磷酸盐缓冲液中的粒径变化分析囊泡的稳定性。应用CCK8法检测不同质量浓度（5、10、20、50和100 mg·L?1）囊泡处理后树突细胞的存活率。荧光显微镜成像检测囊泡在乳腺癌细胞中的内吞。建立皮下乳腺癌荷瘤小鼠模型，将Cy5.5标记的囊泡经尾静脉注射后通过小动物活体成像系统分析其体内分布。  结果  制备了乳腺癌细胞4T1来源的囊泡，平均粒径为123.2 nm，在透射电镜下呈现为空心的圆球形结构。囊泡在磷酸盐缓冲液中孵育7 d后粒径无明显变化。CCK8结果显示不同囊泡浓度处理后树突细胞存活率均大于90%，荧光显微镜成像显示囊泡能被乳腺癌细胞摄取到细胞内，体内成像结果显示乳腺癌细胞来源的囊泡具有较正常细胞囊泡更高的肿瘤组织蓄积。  结论  成功制备出4T1细胞来源的NVs，该NVs能被乳腺癌细胞摄取，并展现良好的肿瘤靶向作用。