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目的 建立一种能在临床上快速、准确地检测大鼠疑似泰勒氏病毒（Theiler''s-like virus of rats,TLV）的方法,采用TaqMan探针荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）技术,特异性针对TLV病毒核酸进行检测。方法 通过基因合成序列作为质粒标准品的模板,同时选择特异性的序列在3622~3729 nt处,设计一对引物和TaqMan性探针,优化反应体系及条件,进行qPCR扩增,从而建立TLV TaqMan探针qPCR方法,并对其灵敏度、稳定性和特异性进行评价。结果 建立的TLV qPCR检测方法,标准曲线线性关系良好,R2值可达到0.99,灵敏性最低能够检测到10个拷贝数/μL,对比普通PCR方法,高出其100倍;对其他常见大鼠病毒均无非特异反应;重复性良好,批内和批间变异系数均小于1%。结论 利用TaqMan探针建立快速检测TLV的荧光定量PCR方法,该方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好等特点。 相似文献
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目的探讨乳腺癌组织及癌旁组织人类表皮生长因子受体2(HER2)基因CpG岛甲基化率和HER2mRNA表达的差异。方法收集经病理确诊的50份乳腺癌组织和对应的癌旁组织样本,采用焦磷酸测序法、实时聚合酶链反应(PCR)和免疫组化法分别检测HER2启动子CpG岛甲基化率、HER2 mRNA表达和HER2蛋白表达。结果 HER2阳性乳腺癌组织HER2 mRNA相对表达量高于HER2阴性癌组织(P0.05),但HER2启动子CpG岛甲基化率差异无统计学意义(P0.05)。HER2阴性乳腺癌组织HER2基因启动子CpG岛甲基化率显著高于对应的癌旁组织(P0.05),而HER2 mRNA表达则低于对应的癌旁组织(P0.05)。HER2阳性的乳腺癌组织与其对应的癌旁组织之间以及HER2阳性与阴性癌旁组织之间,HER2基因启动子CpG岛甲基化率和HER2 mRNA相对表达量差异均无统计学意义(P0.05)。结论在HER2阴性的乳腺癌癌旁组织中,HER2基因启动子CpG岛的低甲基化可能是HER2 mRNA高表达的机制之一。 相似文献
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目的·通过定量检测痰标本中mecA和Sa442基因,分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的感染状态以及临床意义.方法·痰标本经裂解获取DNA,定量PCR(quantitative PCR,qPCR)绝对定量检测mecA和Sa44... 相似文献
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目的探讨ANXA6基因在人乳腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征的相关性。方法选择2006年11月—2010年12月收治并病理确诊的55例乳腺癌患者组织标本进行石蜡包埋,采用免疫组织化学方法检测55例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织中ANXA6基因的表达,以RT-PCR技术和Western印迹法验证ANXA6在乳腺癌组织及癌旁组织中的表达,分析ANXA6基因表达与患者临床特征的关系。结果55例患者癌与癌旁组织中ANXA6基因的阳性表达分别为96.3%（53/55）和52.7%（29/55）,差异具有统计学意义（P<0.05）;癌组织中ANXA6与自噬相关蛋白LC3B、P62、TFEB表达均高于癌旁组织（P<0.05）。ANXA6基因在癌组织中的表达阳性率与肿瘤大小、临床病理分期、PR表达有关（P<0.05）;而与有无淋巴结转移、5年生存率、年龄、组织学分级、ER表达、HER-2表达均无关（P>0.05）。ANXA6基因在癌组织中表达阳性率与LC3B表达、TFEB表达相关（P<0.05）,与P62表达无关（P>0.05）。癌组织中ANXA6基因表达上调率与肿瘤大小、有无淋巴结转移、临床病理分期、5年生存率、年龄、组织学分级、PR表达、HER-2表达,TFEB表达有关（P<0.05）,与ER表达、LC3B及P62表达无关（P>0.05）。结论ANXA6基因在乳腺癌组织中高表达,其在癌组织中表达阳性率与肿瘤大小、临床病理分期、PR表达、LC3B表达、TFEB表达有关,其在癌组织中表达上调率与肿瘤大小、有无淋巴结转移、临床病理分期、5年生存率、年龄、组织学分级、PR表达、HER-2表达,TFEB表达有关,对于乳腺癌可能具有一定的辅助诊断价值。 相似文献
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