地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达的干预作用

目的观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子κB活化受体配体基因表达水平的变化,并探讨地塞米松对骨代谢的影响.方法实验于2004-01/09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成.选择雄性6周龄SD大鼠4只,抽取大鼠股骨骨髓,使用密度梯度离心分离有核细胞,贴壁分离法获取骨髓基质细胞,以2×104/cm2的密度接种进行细胞传代与分组实验.实验分2组,对照组继续用原培养液培养;实验组在原培养液基础上加入地塞米松(浓度10-7mol/L)诱导培养.两组细胞继续培养1周后,抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析.比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平.骨保护素与核因子κB活化受体配体mRNA表达量用β-actin表达量来标准化.结果①骨保护素mRNA表达水平(骨保护素/β-actin)实验组显著低于对照组[1.21±0.12,2.05±0.11(t=10.320,P＜0.01)].②核因子κB活化受体配体mRNA表达水平(核因子κB活化受体配体/β-actin)实验组显著高于对照组[2.53±0.14,1.17±0.19(t=11.525,P＜0.01)].③核因子κB活化受体配体/骨保护素mRNA表达水平比值实验组显著高于对照组[2.21±0.17,0.62±0.08(t=16.925,P＜0.01)].结论加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少,从而减弱其对核因子κB活化受体配体-核因子κB活化受体信号轴的抑制作用,因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强,导致骨重建失衡.     

地塞米松对成骨细胞中mac25基因表达的调节

目的：探讨糖皮质激素地塞米松在骨代谢过程中对成骨细胞，mac25基因表达的产物胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1的调节作用。方法：实验于2004—01／09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成。选择新生24h的SD大鼠8只，雌雄各半，麻醉后切取颅盖骨．剥离骨膜后，用磷酸盐缓冲液漂洗后剪成1mm&;#215;1mm&;#215;1mm大小的骨块，体外培养成骨细胞，1周后传代接种于96孔培养板上。将培养的成骨细胞分为两组，实验组成骨细胞与地塞米松共同培养，地塞米松在培养液中的浓度为10^-7mol／L；对照组成骨细胞则应用Dulbecco’S的改良的Eagle’S培养基常规培养。培养2周后提取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析及琼脂糖凝胶电泳，比较两组成骨细胞中，mac 25mRNA的表达水平。结果：实验组成骨细胞中，mac 25mRNA的表达水平显著高于对照组[2.31&;#177;0．12，1．16&;#177;0．11，（t=2．671，P〈0.01）]。结论：糖皮质激素能在转录水平上增强成骨细胞中，mac 25/胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1的表达，骨微环境中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1水平的升高可阻断胰岛素样生长因子Ⅰ、胰岛素样生长因子Ⅱ与胰岛素的作用，这可能是糖皮质激素抑制骨形成的原因之一。     

地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子кB活化受体配体基因表达的干预作用

目的:观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子кB活化受体配体基因表达水平的变化,并探讨地塞米松对骨代谢的影响。方法:实验于2004-01/09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成。选择雄性6周龄SD大鼠4只,抽取大鼠股骨骨髓,使用密度梯度离心分离有核细胞,贴壁分离法获取骨髓基质细胞,以2×104/cm2的密度接种进行细胞传代与分组实验。实验分2组,对照组继续用原培养液培养;实验组在原培养液基础上加入地塞米松(浓度10-7mol/L)诱导培养。两组细胞继续培养1周后,抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析。比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平。骨保护素与核因子кB活化受体配体mRNA表达量用β-actin表达量来标准化。结果:①骨保护素mRNA表达水平(骨保护素/β-actin):实验组显著低于对照组犤1.21±0.12,2.05±0.11(t=10.320,P<0.01)犦。②核因子кB活化受体配体mRNA表达水平(核因子кB活化受体配体/β-actin):实验组显著高于对照组[2.53±0.14,1.17±0.19(t=11.525,P<0.01)]。③核因子кB活化受体配体/骨保护素mRNA表达水平比值:实验组显著高于对照组[2.21±0.17,0.62±0.08(t=16.925,P<0.01)]。结论:加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少,从而减弱其对核因子кB活化受体配体-核因子кB活化受体信号轴的抑制作用,因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强,导致骨重建失衡。     

地塞米松对成骨细胞中mac 25基因表达的调节

目的探讨糖皮质激素地塞米松在骨代谢过程中对成骨细胞mac 25基因表达的产物胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1的调节作用.方法实验于2004-01/09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成.选择新生24 h的SD大鼠8只,雌雄各半,麻醉后切取颅盖骨,剥离骨膜后,用磷酸盐缓冲液漂洗后剪成1 mm×1 mm×1 mm大小的骨块,体外培养成骨细胞,1周后传代接种于96孔培养板上.将培养的成骨细胞分为两组,实验组成骨细胞与地塞米松共同培养,地塞米松在培养液中的浓度为10-7 mol/L;对照组成骨细胞则应用Dulbecco's的改良的Eagle's培养基常规培养.培养2周后提取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析及琼脂糖凝胶电泳,比较两组成骨细胞中mac 25mRNA的表达水平.结果实验组成骨细胞中mac 25 mRNA的表达水平显著高于对照组[2.31±0.12,1.16±0.11,(t=2.671,P＜0.01)].结论糖皮质激素能在转录水平上增强成骨细胞中mac 25/胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1的表达,骨微环境中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1水平的升高可阻断胰岛素样生长因子Ⅰ、胰岛素样生长因子Ⅱ与胰岛素的作用,这可能是糖皮质激素抑制骨形成的原因之一.     

地塞米松对骨髓基质细胞中骨保护素与核因子kB活化受体配体基因表达的干预作用

目的：观察应用地塞米松后骨髓基质细胞中骨保护素与核因子kB活化受体配体基因表达水平的变化，并探讨地塞米松对骨代谢的影响.方法：实验于2004—01／09在仲恺农业技术学院生理生化教研室实验室完成。选择雄性6周龄SD大鼠4只．抽取大鼠股骨骨髓，使用密度梯度离心分离有核细胞，贴壁分离法获取骨髓基质细胞，以2&;#215;10^4／cm^2的密度接种进行细胞传代与分组实验。实验分2组，对照组继续用原培养液培养；实验组在原培养液基础上加入地塞米松（浓度10^-7mol／L）诱导培养。两组细胞继续培养1周后，抽取总RNA进行半定量反转录聚合酶链反应分析。比较两组骨髓基质细胞中骨保护素与核因子活化受体配体基因的表达水平。骨保护素与核因子kB活化体配体mRNA表达量用β—actin表达量来标准化。结果：①骨保护素mRNA表达水平（骨保护素／β—actin）：实验组显著低于对照组[1．21&;#177;0．12，2．05&;#177;0．11（t=10．320，P〈0．01）]。②核因子kB活化受体配体mRNA表达水平（核因子kB活化受体配体／β—actin）：实验组显著高于对照组[2．53&;#177;0．14，1．17&;#177;0．19（t=11．525，P〈0．01）]。③核因子kB活化受体配体／骨保护素mRNA表达水平比值：实验组显著高于对照组[2．21&;#177;0．17，0．62&;#177;0．08（t=16．925，P〈0．01）]。结论：加入地塞米松后骨髓基质细胞骨保护素分子合成减少，从而减弱其对核因子kB活化受体配体-核因子kB活化受体信号轴的抑制作用，因此破骨细胞分化及骨吸收作用相对增强，导致骨重建失衡。