An Integrated Technique for Identification of Differential Genes Expressed in Patients with Cancer

Summary: To develop a method for identification of differential gene expression between different cell populations, several convenient techniques of molecular biology, including subtractive hybridization, suppression PCR, T/A cloning and sequencing, were used to identify genes expressed differentially in CD45^- and CD45^- cells isolated from U266 cell line of multiple myeloma. Our results showed that the levels of abundant genes scale down 20 times through subtractive hybridization.Plasmid DNA from CD45^- cell clones was hybridized with forward or backward cDNA probes synthesized from CD45^- and CD45 cells, respectively. A few of differentially expressed genes reconfirmed by RT-PCR were identified from 500 expressed clones of CD45^- cells. It is concluded that a strategy for gene expression identification developed from conventional molecular biological methods can be used in different laboratories.     

整合常规技术探索肿瘤差异表达基因

目的建立一种简单实用的、探索肿瘤差异表达基因的方法.方法从骨髓瘤细胞株U266中分离出CD45 和CD45－细胞,结合应用减法杂交、抑制性PCR、T/A克隆、测序等技术,寻找CD45 和CD45－细胞间的差异表达基因.结果减法杂交可缩减约20倍的高丰度表达基因,意即低丰度表达基因富聚约20倍. 用正向或负向减法探针,分别和来源于CD45 细胞克隆的质粒DNA杂交,筛选500个表达克隆,发现了几个差异表达基因,并经RT-PCR证实.结论采用常规分子生物学方法建立起来的综合技术,可以用来研究肿瘤性疾病的差异表达基因,且简单实用,能在普通分子生物学实验室开展.     

多发性骨髓瘤合并慢性中性粒细胞白血病一例并文献复习

目的 探讨多发性骨髓瘤（MM）合并慢性中性粒细胞白血病（CNL）的主要临床特点、诊断和治疗方法.方法 分析我科收治的1例MM合并CNL患者的临床表现及相关实验室检查,总结国内外报道的共29例患者的主要特征,并查阅相关文献,探讨本病的治疗方法.结果 MM合并CNL是一种罕见疾病,可能源于共同的造血干细胞异常,我们采用CTD方案化疗4个疗程,取得满意效果.结论 MM合并CNL罕见,其病因、发病机制及治疗方案需进一步探讨,CTD方案可能是有效的治疗本病的方法.     

香烟烟雾对雄性大鼠性功能影响的实验研究

目的:研究香烟烟雾对雄性大鼠性功能的影响。方法:30只SD雄性大鼠随机均分为两组,吸烟组制备大鼠吸烟模型,使用市售红金龙过滤咀香烟(每支焦油含量13mg),吸烟组每日使其被动吸烟4次,每次两支,每次30min持续60d;对照组正常饲养。实验结束前1周两组动物笼中分别放入5只雌性大鼠,采用24h监控录像监测观察骑跨动作1周,60d后处死取标本。测定大鼠血中睾酮水平及阴茎海绵体组织一氧化氮合酶(NOS)的活性,行阴茎海绵体组织的Masson染色图像分析。结果:吸烟组大鼠骑跨动作次数减少,血中睾酮水平明显降低(P<0.05),阴茎海绵体组织NOS活性及平滑肌面积显著降低(P<0.05),胶原纤维明显增加,海绵窦血管腔有明显变化。结论:吸烟组大鼠阴茎勃起功能受到明显影响,睾酮水平降低及阴茎海绵体组织NOS活性降低、阴茎海绵体平滑肌面积的减少可能是其重要的发病机制。     

柚皮素诱导的K562细胞凋亡机制中PI3K和Akt的表达

目的 研究柚皮素(naringenin)对人慢性髓系白血病K562细胞株凋亡作用与PI3K/Akt路径的关系.方法 MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同培养时间对K562细胞凋亡的影响;用免疫组织化学的方法检测柚皮素作用下K562细胞中的PI3K和Akt的表达.结果 柚皮素对K562细胞凋亡有明显诱导作用;PI3K和Akt的表达与柚皮素作用浓度和时间呈负相关关系.结论 柚皮素对K562细胞具有明显的诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过减少K562细胞表达PI3K和Akt来实现.     

rs798766 C＞T多态性与膀胱癌易感性的Meta分析

目的 对rs798766 C>T多态性与膀胱癌易感性的关联进行Meta分析.方法 在Pubmed与百度学术数据库中检索相关病例对照研究,根据纳入与排除标准进行筛选.提取研究基本情况,提取或计算T等位基因比值比ORCT+TT vs.CC及其95 %可信区间,进行Meta分析.结果 共纳入9项病例对照研究,涉及10 647名膀胱癌患者与53 588名健康对照.Meta分析有显著异质性(I2=75 %,P<0.1),合并结果为1.34[1.19,1.51].亚组分析结果显示,亚洲人与白人的合并结果无显著差异(χ2=0.65,P=0.42).漏斗图对称,无发表偏倚.结论 rs798766 C>T多态性增加膀胱癌易感性.     

左眼进行性视力障碍、贫血

1病史及住院经过患者男，39岁。1997年10月15日无明显诱因出现左眼视物模糊，呈进行性发展，伴有同侧头痛，间断左侧鼻腔出血，无恶心、呕吐和肢体活动障碍。1周后，左眼光感消失，遂就诊于眼科。体检：心肺正常，肝脾不肿大。左眼光感消失，瞳孔中度散大，直径5mm，直接对光反     

伴骨髓纤维化的MDS的独特临床病理现象

目的：进一步加深对于伴骨髓纤维化的骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ－ＭＦ）这一特殊亚型的认识。方法：从临床、病理形态角度总结１２ 例ＭＤＳ－ＭＦ患者的特征。结果：所有病例均具备全血细胞减少、病态造血、骨髓纤维组织增生及预后较差的特征。该型不同于无骨髓纤维化的ＭＤＳ和原发性骨髓纤维化（ＩＭＦ）,与前者的区别在于巨核细胞增多。对常规治疗反应不良,生存期明显缩短;与后者的区别在于无显著的肝脾肿大,骨髓较易抽取,有三系病态造血等。结论：ＭＤＳ－ＭＦ是一具有特色的亚型,有必要与ＩＭＦ和ＭＤＳ的其他亚型相区别。     

黄芩素通过PI3K/AKT通路增强三氧化二砷对肝癌细胞的促凋亡作用

目的:探讨黄芩素增强As2O3对肝癌细胞的促凋亡作用及其可能的作用机制。方法:采用MTT方法检测不同作用浓度及作用时间的黄芩素、As2O3单用和联用对肝癌高转移细胞HCCLM9、肝癌低转移细胞MHCC97L的增殖抑制率,并根据联合用药q值判断两药联用的性质;流式细胞术检测肝癌细胞的周期分布;Tunel技术检测肝癌细胞的凋亡情况;Real-Time PCR和Western blot检测肝癌细胞凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-6、caspase-9的mRNA和蛋白质水平以及PI3K、AKT和P-AKT蛋白的表达情况。结果:黄芩素、As2O3单药及联合后均能明显抑制HCCLM9和MHCC97L细胞增殖能力,但两药联合作用更强,且呈明显时间和剂量依赖性效应。两药单用及联合均能够明显导致肝癌细胞G0/G1期停滞,Tunel检测到细胞凋亡率升高,且两药联合作用强于单药。两种药物同时处理后肝癌细胞的caspase-3、caspase-6及caspase-9 的mRNA和蛋白水平表达显著升高而PI3K、p-AKT蛋白表达下降。结论:黄芩素增强As2O3对肝癌细胞的促凋亡的作用,同时引起PI3K、p-AKT表达的下调及caspase-3、caspase-6及caspase-9表达的上调。推测黄芩素可能是通过激活Caspase 凋亡信号,同时抑制PI3K/AKT通路增强As2O3对肝癌细胞促凋亡的作用。