基因工程技术在生物制药领域的应用和发展

本文简述了近年来基因工程在生物制药技术的发展和应用。其中主要从基因操作中大分子的分离、PCR技术、基因芯片、外源基因的表达这4个方面叙述基因工程相关技术的应用和发展,以及基因工程药物的产业化现状与发展趋势。     

原核表达重组人白介素-3及其对脐带血造血干细胞体外增殖的影响

目的研究原核表达重组人白介素-3(rhIL-3)及其对脐带血造血干细胞体外增殖的影响。方法构建pET-43.1-rhIL-3表达载体,克隆至BL21菌株,并进行中试发酵生产,所得包涵体经透析复性后,采用阳离子交换柱纯化,纯化产物送N-端测序。Ficoll密度梯度离心结合免疫磁珠法富集人脐带血中CD34+细胞,以不同浓度rhIL-3及干细胞因子(SCF)、Fms样酪氨酸激酶受体-3配体(FL)和促血小板生成素(TPO)因子组合培养1周,测定细胞总数,计算CD34+细胞增殖倍数。结果在SCF和FL存在下,rhIL-3可明显促进造血干祖细胞增殖,但较无rhIL-3时CD34+细胞占细胞总数的比例有所下降。与SCF、FL共同作用时的最佳浓度在15 ng/mL左右,与SCF、FL、TPO共同作用时的最佳浓度在50 ng/mL左右。结论高效表达及纯化的rhIL-3与SCF、FL和TPO细胞因子组合对脐带血造血干细胞具有良好的增殖作用。     

血栓性血小板减少性紫癜18例临床诊疗分析

目的:观察与分析18例血栓性血小板减少性紫癜患者诊疗情况,以期降低误诊率、做到早期诊治.方法:对18例血栓性血小板减少性紫癜患者基础资料进行回顾性观察且对其临床表现、实验室检查和治疗方法及其效果等记录,对所得数据进行统计学处理与分析.结果:血栓性血小板减少性紫癜临床表现为发热、昏迷、言语障碍、精神恍惚、头痛、嗜睡、谵妄、淡漠等且患者出现血小板数量下降、贫血、血清间接胆红素和尿素氮及肌酐等指标升高现象;经过综合性治疗后,本次治疗临床痊愈率达94.44%.结论:加强对血栓性血小板减少性紫癜的临床诊疗观察与分析能够有效降低误诊率、做到早期诊断、早期治疗,从而促进患者较快恢复.     

川丹消斑汤联合西药治疗代谢综合征颈动脉粥样硬化疗效观察

目的:观察自拟川丹消斑汤联合西药治疗代谢综合征(metabolic syndrome,MS)颈动脉粥样硬化(carotid atherosclerosis,CAS)的临床疗效。方法:将200例MS合并CAS的患者随机分为观察组和对照组各100例,治疗6个月后,观察临床疗效、血液流变学、颈动脉内-中膜厚度、颈动脉斑块厚度积分、心脑血管重要事件的发生及再住院率。结果:血液流变学、颈动脉内-中膜厚度、颈动脉斑块厚度积分观察组治疗前后各指标改善明显(P<0.05);而对照组除血脂外,其他指标治疗前后差异无统计学意义(P>0.05);治疗后观察组总有效率为91%,明显高于对照组的60%,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:川丹消斑汤联用西药治疗代谢综合征所致颈动脉粥样硬化疗效好,且无明显不良反应。     

大肠杆菌表达的新一代重组人内皮抑素复性条件的优化

目的优化新一代重组人内皮抑素(rhED)的复性方案并检测其抗血管生成活性。方法用6 mol/L盐酸胍溶解rhED包涵体后,用稀释法与透析法相结合的方法进行复性,优化最适复性条件。复性结束后用阳离子交换层析纯化。并用rhED特异性单抗和鸡胚绒毛尿囊膜实验检测复性后蛋白的活性。结果通过优化复性条件,rhED的复性率可达到46%。复性、纯化后的rhED能与rhED特异性单抗反应,并在鸡胚绒毛尿囊膜实验中显示出抑制血管生长的活性。结论提高rhED复性率的复性条件可极大地促进新一代rhED的临床前及临床研究。     

强心汤联合西药治疗老年慢性心力衰竭疗效观察

目的观察自拟强心汤联合西药治疗老年慢性心力衰竭(CHF)的临床疗效。方法将100例老年CHF患者随机分为对照组和治疗组各50例,对照组在原发病治疗基础上加用抗心衰西药,治疗组在对照组治疗基础上加服强心汤,每日1剂,30天后判定疗效。结果治疗组总有效率为94.0%,对照组为78.0%,具有显著性差异(P<0.05)。两组治疗后6分钟步行距离(6MWT)、静息心率(RHR)、左心室射血分数(LVEF)均有改善,且治疗组改善优于对照组(P<0.05),有显著性差异。结论强心汤联合西药治疗老年CHF疗效显著。     

结核性脑膜炎108例临床分析

结核性脑膜炎是结核分枝杆菌引起的脑膜和脊膜的非化脓性炎症性疾病,脑实质也常常受累。近年来,由于结核耐药性增多及AIDS等机会感染增多,结核性脑膜炎的发病率和病死率有明显上升趋势。由于结核性脑膜炎临床表现较为复杂,症状体征、脑脊液改变的不典型,早期诊断较困难,易造成误诊,     

重组人体干细胞因子的表达、复性、纯化及其对脐带血干细胞体外扩增作用研究

目的对重组人体干细胞因子（rhSCF）蛋白在脐带血干细胞体外扩增中的作用进行研究。方法通过大肠杆菌表达系统,经IPTG诱导表达获取SCF包涵体,经透析复性、纯化后获得蛋白。从脐带血中提取单核细胞（MNC）,分选其中具有CD34＋抗原表位的细胞,使用一定浓度的血小板生成素（TPO）、FLT-3配体（FL）及rhSCF组合对脐带血干细胞进行7 d体外扩增以研究rhSCF的作用。结果成功使用IPTG在大肠杆菌BL21诱导表达rhSCF,包涵体经复性及CM-Sepharose纯化获得高纯度的rhSCF。干细胞体外扩增实验表明rhSCF、FL及TPO联用,具有协同刺激CD34＋细胞体外扩增的作用。结论成功建立rhSCF原核表达、复性和纯化体系,为造血干细胞体外扩增体系的优化研究奠定了基础,同时为干细胞因子的临床应用提供了有价值的参考。     

自拟调脉汤联合西药治疗老年病态窦房结综合征疗效观察

目的观察自拟调脉汤联用西药治疗老年病态窦房结综合征的临床疗效。方法将100例老年病态窦房结综合征患者随机分为对照组50例和治疗组50例,对照组在原发病治疗基础上口服山莨菪碱10 mg、沙丁胺醇2.4mg,每日3次;治疗组在对照组基础上加服自拟调脉汤,每日1剂,1疗程为15日,2个疗程后判定疗效。结果总有效率治疗组为88.0%,对照组为60.0%。治疗组总有效率明显高于对照组(P<0.01)。两组患者治疗后心率、心电图指标均有改善,但治疗组改善疗效均明显优于对照组(P<0.01)。结论自拟调脉汤联用西药治疗老年病态窦房结综合征疗效显著,安全性好。     

依达拉奉联合疏血通注射液治疗急性脑干梗死29例临床观察

目的观察依达拉奉联合疏血通注射液治疗急性脑干梗死患者的临床疗效。方法将急性脑干梗死患者58例随机分为两组。对照组患者29例给予常规基础性治疗;观察组患者29例在常规治疗的基础上加用依达拉奉、疏血通静滴,疗程14 d。分别在治疗前、治疗14 d后评估两组患者神经功能缺损程度和临床疗效。结果与治疗前相比,两组患者神经功能缺损评分均有所降低,观察组患者降低更明显,与对照组患者比较差异有统计学意义(P0.05);观察组治疗总有效率及临床疗效显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论依达拉奉联合疏血通注射液治疗急性脑干梗死患者疗效显著,优于常规治疗。