2个新的ABO血型等位基因的发现和序列分析

目的 探讨4例ABO血型正反定型不符标本的遗传背景。方法 采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行亚型鉴定;采用PCR方法扩增ABO基因的7个外显子;采用测序方法对7个外显子进行直接测序。结果 血型血清学试验证实4例标本为ABO亚型,分别为:Bx(1例);ABx(1例);Ax(2例)。基因直接测序发现Bx和ABx在ABO~*B.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在B等位基因第7外显子发生了449位核苷酸AG的突变;2例Ax在ABO~*A1.01基础上1～6外显子未发生改变,仅在A等位基因第7外显子发生了467位核苷酸CT的突变和798位插入了一个碱基T,以上的基因位点改变均导致了ABO血型的血清学表型变化,表现为ABO亚型。结论 研究揭示了4例ABO亚型的分子遗传背景。发现2个新的ABO血型等位基因,即:c.449AG单基因位点突变,c.467CT的突变和c.798insT单碱基插入。     

肺炎链球菌dnaJ基因缺陷菌株的构建及毒力变化的初步研究

目的 构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)dnaJ基因缺陷菌株,并对其毒力作初步研究.方法采用长臂同源多聚酶链式反应( long flanking homology polymerase chain reaction,LFH-PCR)技术将dnaJ基因替换为红霉素耐药基因(erm...     

INS 基因遗传多态性与2型糖尿病发病风险及血清 IAA-Ab 水平相关性研究?

目的：探讨 INS基因启动子区单核苷酸多态性与2型糖尿病发病风险和血清IAA-Ab水平的相关性。方法利用Sequenom MassArray SNP 分型检测技术,对该院497例2型糖尿病患者(病例组)和500例健康体检人员(对照组)INS 的3个启动子区单核苷酸多态性位点(rs689、rs71464177和 rs3842738)进行基因分型并分析两组间分布情况;检测糖尿病患者 IAA-Ab 水平。用χ2检验统计分析病例组和对照组,病例中 IAA-Ab 阳性组和阴性组的 SNP 位点基因型频率分布,采用非条件 Logistic 回归分析,校正性别、年龄影响,计算比数比(OR)和95%置信区间(CI ),评价多态性位点与2型糖尿病易感性和血清 IAA-Ab 水平的相关性。结果rs689AA、TT、AT 基因型在病例组的分布频率分别为58.75%、28.77%和12.47%,在对照组的分布频率分别为50.40%、35.60%和14.00%,两组间差异有统计学意义(χ2=3.923,P <0.05);且相对于 AA 基因型,TT 基因型者患糖尿病的危险性减少,风险度 OR 值为0.35(95% CI ：0.18~1.06)。AA、TT、AT 各基因型在 IAA-Ab 阳性患者的分布频率与 IAA-Ab 阴性患者比较差异有统计学意义(P <0.05)。结论中国人群 INS 基因 rs689位点多态性与中国人群2型糖尿病发病风险相关,并且可能与 IAA-Ab 水平相关。     

肺炎链球菌溶血素诱导THP-1细胞凋亡涉及MAPK1/3信号途径

目的 探讨肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)对人急性单核细胞白血病单核细胞株THP-1细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用及机制.方法 MTT法检测Ply对THP-1细胞的增殖抑制.瑞氏染色观察Ply对人THP-1细胞形态的影响.AnnexinV-FITC/PI双标法检测细胞凋亡.琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞DN...     

肺炎链球菌假想蛋白SPD0414亚细胞定位及对细菌黏附侵袭的影响

目的 为研究肺炎链球菌假想蛋白SPD0414在肺炎链球菌(S.pn)的亚细胞定位,并初步研究其在S.pn黏附和定植中的作用.方法 通过分别在SPD0414的N端和C端融合绿色荧光蛋白(GFP),共聚焦荧光显微镜观察定位情况.用203野生菌和203△spd0414缺陷菌对鼻咽癌细胞CNE和肺腺癌细胞A549细胞的黏附侵...     

肺炎链球菌溶血素的体外表达及活性鉴定

目的 体外扩增肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)的溶血素(pneumolysin,ply)基因,在大肠杆菌中高效表达,并验证其生物活性.方法 分离培养D39型肺炎链球菌并提取其基因组DNA,采用PCR技术体外扩增ply基因,体外重组将ply序列克隆到原核表达载体pET28(a)内,测序鉴定后将重组子转化到E.coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导大量表达融合6个组氨酸标签的Ply重组蛋白,经Ni-NTA树脂纯化后,获得的重组蛋白经SDS-PAGE鉴定后检测其溶血活性和细胞毒性.结果 克隆的ply序列与GenBank中的数据相符,并实现了Ply蛋白的可溶表达.所获重组蛋白纯度达到95%.溶血实验显示 Ply对人红细胞具有极高的溶血活性,与对照组相比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量依赖.细胞毒实验显示Ply对脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)细胞具有明显抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),并呈剂量与时间依赖性,IC50(24h)为1.525 μg/ml.结论 经测序鉴定ply基因正确扩增,并成功表达、纯化出具有高溶血活性和细胞毒性的Ply蛋白.     

不同分析系统电解质检测结果比对分析

目的：分析德国罗氏公司Cobas8000型全自动生化分析仪（简称Cobas8000分析仪）和日本奥林巴斯公司AU640型全自动生化分析仪（简称AU640分析仪）K＋、Na＋、Cl－检测结果的可比性。方法参照美国临床实验室标准化委员会 EP9‐A2文件,采用两套分析系统对新鲜血清标本K＋、Na＋、Cl－进行检测,评价AU640分析仪检测结果的精密度,计算两套分析系统检测结果的相关系数。结果 AU640分析仪K＋、Na＋、Cl－检测结果精密度较高,批内、批间变异系数均小于2％;两套分析系统K＋、Na＋、Cl－检测结果的相关系数均大于0．975。结论 Cobas8000分析仪和AU640分析仪K＋、Na＋、Cl－检测结果一致性较高,具有良好的可比性,均能为临床提供准确、可靠的检测结果。     

SARS-CoV-2、HCoV-OC43和HCoV-HKU1棘突蛋白抗原表位分析

目的探讨严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)、人冠状病毒(HCoV)-OC43和HCoV-HKU1棘突(S)蛋白抗原表位的特征。方法从美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库中下载SARS-CoV-2、HCoV-OC43、HCoV-HKU1的S蛋白序列和空间结构,进行多序列比对,采用Protean软件、IEDB软件和SYFPEITHI软件进行抗原表位预测。结果从NCBI数据库中收录的65条完整的SARS-CoV-2S蛋白序列中选取9条S蛋白无氨基酸重复的序列,以QHZ87592.1为标准序列,其他8条S蛋白序列共出现8个位点的突变和1个位点的缺失,但均未分布在受体结合域(RBD)区域。SARS-CoV-2与HCoV-OC43、HCoV-HKU1的S蛋白RBD区域有明显差异。3种冠状病毒S蛋白S2亚基的氨基酸序列相似性较高。S蛋白的B细胞抗原表位主要集中在S1亚基,3种冠状病毒之间无相似性。HCoV-HKU1、HCoV-OC43的S蛋白S2亚基T细胞表位与SARS-CoV-2比较,均有一定的相似性,最高相似度为70.0%。结论 S2亚基的T细胞抗原表位可能是3种冠状病毒的共同抗原,HCoV-OC43和HCoV-HKU1致敏的记忆T淋巴细胞可能对SARS-CoV-2感染有交叉性的细胞免疫功能。     

血型血清学ABO亚型95例的分子机制研究

目的研究95例中国人群血型血清学ABO亚型个体的分子机制。方法 2013年11月—2017年10月采用血型血清学方法对ABO正反定型不符标本进行检测;采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)及第6、7外显子基因测序方法进行基因分型,其中部分标本采用了第1—7外显子的测序。结果对血型血清学方法确认的95例(73例先证者,22例家系成员)ABO亚型标本。经PCR-SSP和基因测序检测,73例ABO亚型先证者中检出A亚型基因的个体13例(17.8%),检出B亚型基因的个体17例(23.3%),检出B(A)型基因的个体22例(30.1%),共52例(71.2%,52/73);22例家系成员中检出ABO亚型基因者18例。先证者中未检出ABO亚型基因者21例(28.8%,21/73),且21例中5例(6.8%,5/73)检出O基因但表达弱A或弱B抗原;22例家系成员中4例未检出ABO亚型基因,共25例(25/95)。结论 ABO亚型的基因型与表型不完全符合,且同1个血型血清学表型对应不同的基因型,同1个基因型又表现为不同的血型血清学结果。