血小板生成素(TP0)及其受体(C-Mpl)的新作用

早在1958年,Kelemen等人就发现在血小板减少症病人或动物的血浆中,存在一种物质,可以促进巨核细胞的成熟及血小板的生成,称之为血小板生成素(Thrombopoietin,TPO)。但是直到1994年,5个研究小组采用反相或常规生物技术,从不同样本中几乎同时纯化得到TPO,才使得TPO在各个领域的研究迅速发展。TPO,又称为巨核细胞生长发育因子(megakaryocyte growth development factor,MG-DF),是调节巨核细胞增殖、分化、成熟和介导血小板生成的最主要调节因素,也是一个早期造血促进因子,它的生物学效应由其受体C-Mp1介导。人TPO的合成部位主要在肝…     

Fn、TPO基因修饰对人骨髓间充质干细胞的影响

目的 观察纤维连接蛋白(Fn)、血小板生成素(TPO)融合基因修饰对人骨髓间充质干细胞(MSC)的影响.方法 构建携带Fn-TPO融合基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓MSC进行基因修饰;观察Fn-TPO基因在骨髓MSC中的表达,以及基因修饰后骨髓MSC的体外增殖、黏附造血细胞和分泌TPO的能力;并将脐血CD34+细胞接种到基因修饰后骨髓MSC形成的滋养层,培养7d观察修饰后骨髓MSC对造血细胞体外扩增和集落形成能力的影响.结果 成功构建携带Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓MSC进行体外基因修饰;Fn、TPO基因在骨髓MSC内能够正常转录;基因修饰后的骨髓MSC体外增殖能力[(6.92±0.77)×104/ml]与对照组[(7.18±0.89)×104/ml]比较差异无统计学意义(P＞0.05);基因修饰组和对照组黏附造血细胞能力分别为0.188±0.018和0.167±0.017(P＜0.01),分泌TPO能力分别为(7.46±0.59)ng/ml和(5.58±0.37)ng/ml(P＜0.01),细胞分泌TPO的能力不受培养时间的影响,但受细胞生长状态影响;2×104脐血CD34+造血干/祖细胞经基因修饰后骨髓MSC联合必要细胞因子体外扩增7 d,有核细胞数、CD34+细胞比例、BFU-E、CFU-GM及CFU-GEMM分别为(29.9±2.7)×104、(33.3±2.8)%、109.3±4.1/1×104CD34+细胞、163.7±7.1/1×104CD34+细胞、13.3±1.5/1×104CD34+细胞,较对照组明显增加(P＜0.01).结论 Fn-TPO基因修饰能够增强骨髓MSC黏附造血细胞、分泌TPO及支持脐血CD34+细胞扩增的能力.     

血小板生成素(TPO)及其受体(C-Mpl)的新作用

早在1958年,Kelemen等人就发现在血小板减少症病人或动物的血浆中,存在一种物质,可以促进巨核细胞的成熟及血小板的生成,称之为血小板生成素(Thrombopoietin,TPO).但是直到1994年,5个研究小组采用反相或常规生物技术,从不同样本中几乎同时纯化得到TPO,才使得TPO在各个领域的研究迅速发展.TPO,又称为巨核细胞生长发育因子(megakaryocyte growth development factor,MGDF),是调节巨核细胞增殖、分化、成熟和介导血小板生成的最主要调节因素,也是一个早期造血促进因子,它的生物学效应由其受体C-Mp1介导.     

FN-TPO基因修饰的骨髓间充质干细胞支持脐血造血干细胞植入的实验研究

目的观察纤维连接蛋白-血小板生成素(FN-TPO)基因修饰的人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)支持脐血造血干细胞植入的能力。方法将20只严重联合免疫缺陷(SCID)小鼠经亚致死剂量射线辐射后随机分为实验组(n=5):FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs联合脐血单个核细胞(CB-MNC)组共移植;对照组:包括单纯CB-MNC移植组(n=5)、CB-MNC联合未修饰骨髓MSCs共移植组(n=5)和仅输入不含血清的IMDM培养基的空白对照组。细胞移植后,持续观察各组小鼠4周,记录一般情况及生存率;通过检测不同时间点(辐射前,辐射后细胞移植前,细胞移植后2 d及1、2、3、4周)的小鼠外周血常规来反映小鼠造血系统恢复情况;4周后以流式细胞术和PCR等检测移植后小鼠体内的人源细胞的整合情况。结果辐射前、辐射后细胞移植前、移植后2 d及移植2周后各组动物外周血白细胞、红细胞、血红蛋白和血小板数均无明显差别;细胞移植1周,实验组小鼠外周血WBC、RBC、Hb和Plt分别为(0.83±0.15)×109/L、(9.84±0.36)×1012/L、147.50±4.80 g/L和(198.75±71.14)×109/L,均较对照组为高,差别均有统计学意义(P<0.05),且实验组小鼠外周血常规变化比较平稳。移植4周各组动物生存率,基因修饰和未修饰MSCs联合CB-MNC共移植组较单纯CB-MNC移植组明显为高(80%VS40%);存活下来的细胞移植小鼠骨髓和外周血中均检测到人源性CD45+细胞,实验组小鼠骨髓和外周血中人CD45+细胞比例(%)分别为:8.15±1.72和2.28±0.57,与单纯CB-MNC移植组的3.93±1.28和0.82±0.06相比差别均具有统计学意义(P<0.05);PCR检测移植后4周存活小鼠体内人beta-actin基因表达情况显示:小鼠外周血、骨髓及心、肝、脾、脑、肺等重要脏器基因组DNA中有人beta-actin基因存在。结论FN-TPO基因修饰的骨髓MSCs能够更有效的支持脐血造血干细胞植入。     

Clinical efficacy of combined therapy in children with stage 4 neuroblastoma北大核心CSCD

目的 观察4期神经母细胞瘤联合治疗的早期疗效,探讨提高生存率及改善生活质量的治疗方案。 方法 对2016年1月至2021年6月在香港大学深圳医院确诊的14例4期神经母细胞瘤患儿的临床资料、治疗及随访情况进行回顾性分析。 结果 14例患儿中位发病年龄为3岁7.5个月。骨髓检查阳性9例,N-Myc基因扩增4例,神经元特异性烯醇化酶增高13例,尿香草扁桃酸增高7例。病理结果：分化型6例,未分化型1例,混合型1例,分化差型6例。N7方案化疗10例（含2例N7方案+三氧化二砷化疗患儿）,Rapid COJEC方案化疗4例。手术13例;自体造血干细胞移植14例;放疗10例。Ch14.18/CHO免疫治疗8例,其中1例因在治疗过程中出现过敏性休克而停止免疫治疗;其余7例完成治疗,期间未观察到严重不良反应。完成免疫治疗患儿中1例复发后进行3次Lu177 Dotatate治疗,目前仍在化疗中。14例患儿中位随访时间为45个月。2年内复发4例,2年内总生存率100%;3年内复发4例,3年内无病存活7例。 结论 儿童4期神经母细胞瘤建议选择多学科联合方案治疗,使4期神经母细胞瘤患儿获得更好的生存及预后。     

逆转录病毒载体介导Fn-TPO基因修饰人骨髓间充质干细胞

目的 应用逆转录病毒载体介导纤维连接蛋白-血小板生成素(Fn-TPO)基因修饰人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),观察Fn-TPO基因修饰对于骨髓MSCs的影响.方法 构建携带Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体,并以其对骨髓MSCs进行体外基因修饰;台盼蓝拒染法计数活细胞数检测基因修饰后骨髓MSCs的体外增殖能力,RT-PCR检测Fn-TPO基因在骨髓MSCs中的表达情况,MTT法检测基因修饰后骨髓MSCs黏附造血细胞的能力,ELISA检测基因修饰后骨髓MSCs分泌至细胞培养液中的TPO浓度.结果 成功构建携Fn-TPO基因的重组逆转录病毒载体且以该逆转录病毒载体对骨髓MSCs进行体外基因修饰;Fn-TPO基因在骨髓MSCs内能够正常转录;基因修饰后的骨髓MSCs体外增殖能力无明显改变(P＞0.05);黏附造血细胞能力增强(P=0.01),分泌TPO的能力增强且不随培养时间延长而显著减弱(P＜0.01),但受细胞生长状态影响.结论 成功应用携带Fn-TPO基因的逆转录病毒载体对人骨髓MSCs进行基因修饰,使基因修饰后骨髓MSCs黏附造血细胞分泌TPO能力增强.     

基因修饰的骨髓基质细胞的研究现状

骨髓基质细胞是骨髓造血微环境的主要成分,为造血干细胞维持其自我更新及多向分化提供了适宜的调控微环境。以骨髓基质细胞为靶细胞的基因治疗,为遗传病、血液病、肿瘤等患者的治疗带来了新的希望。本文就近年来基因修饰骨髓基质细胞的可行性及其研究现状作一综述。     

基因修饰的骨髓基质细胞的研究现状

骨髓基质细胞是骨髓造血微环境的主要成分，为造血干细胞维持其自我更新及多向分化提供了适宜的调控微环境。以骨髓基质细胞为靶细胞的基因治疗，为遗传病、血液病、肿瘤等患者的治疗带来了新的希望。本文就近年来基因修饰骨髓基质细胞的可行性及其研究现状作一综述。