人红细胞乳酸脱氢酶的提纯及其性质研究

目的 研制乳酸脱氢酶的标准品，从人红细胞中提取了乳酸脱氢酶（LD）并对其特性进行了研究。方法 用经过改进的方法，包括完全溶解红细胞，羟磷灰石处理，硫酸铵沉淀，CM-Sephadex、C50、SephadexG100和5’-AMP-Sepharose亲和层析。结果 该提制品LD比活性达163.0KU/g蛋白，几乎不含其它杂酶（测不到ALT、AST、CK、GGT、ChE、ALP、Amy活性），聚丙烯酰胺凝胶电泳（自然凝胶系统——酶染色显示LD1、LD2区带，蛋白质染色显示与酶相应的区带。37℃条件下，正向反应中，对底物L-乳酸和NAD的米氏常数（Km)分别为1 。040和0.192mmol/LO；逆向反应中，对底物丙酮酸和NADH的Km分别为0.119和0.039mmol/L。结论 提纯的LD其催化性质和人混合血清KLD非常相似。本研究为今后进一步研制LD测定用参考品建立了基础。     

镇江市2009-2010年手足口病流行病学特征分析

目的分析镇江市2009-2010年手足口病的流行病学特征。方法采用描述性流行病学方法对手足口病病例进行流行病学特征分析。结果镇江市2009-2010年报告儿童手足口病全年散发,发病主要有两个高峰期,一个主要的高峰期集中在4-6月份,另一个较小的高峰期出现在11-12月。镇江市发病人群以1~3周岁儿童为主,且男孩发病率略高于女孩,乡村地区发病率高于城镇。结论镇江市手足口病的流行具有明显的地区、季节和人群特征,在流行季节应针对乡村地区的婴幼儿采取重点防控措施。     

镇江市男男性行为人群前瞻性队列研究分析

目的了解镇江市男男性行为者(men who have sex with men,MSM)HIV、梅毒螺旋体血清抗体阳转和队列保持的情况及其影响因素。方法采用前瞻性队列研究,对符合纳入标准的调查对象进行间隔6个月的随访调查,收集社会人口学和行为学信息,并采集血样进行HIV和梅毒螺旋体血清抗体检测。结果共调查MSM456名,HIV和梅毒螺旋体血清抗体阳性率分别为7.7%(95%CI:5.40%～10.51%)和10.5%(95%CI:7.86%～13.71%)。基线建立HIV血清抗体阴性队列421人,6个月随访时队列保持率为27.1%(114/421),HIV和梅毒螺旋体血清抗体阳转率分别为8.24(95%CI:7.58～8.90)/100人年和12.64(95%CI:11.76～13.51)/100人年。比较失访组和在访组基线社会人口学及行为学特征,结果发现两组在婚姻状况、户籍所在地、文化程度、最近6个月寻找性伴场所和与商业性伴发生无保护的肛交等方面差异有统计学意义。结论镇江市MSM的HIV和梅毒螺旋体血清抗体阳转率处于较高水平,针对该人群进行有效的干预已迫在眉睫。     

伤寒沙门菌fljB∶∶lacZ变异株的制备

目的:为研究伤寒沙门菌z66鞭毛抗原编码基因fljB的表达调节机制,建立该fljB基因的β-半乳糖苷酶基因(lacZ)插入变异株。方法:采用自杀质粒介导的同源重组方法进行制备。设计加接KpnⅠ和SalⅠ的特异性引物,用PCR扩增获得fljB基因的上、下游同源性DNA片段,并与用KpnⅠ和SalⅠ酶切pSV-β-半乳糖苷酶载体(pSV-β-galactosidase vector)的片段定向连接,将连接片段克隆至自杀质粒pGMB151,再通过电击法将重组质粒转入伤寒沙门菌,在含X-Gal的蔗糖平板上筛选获得同源重组的变异株。结果:经筛选获得阳性克隆,经PCR及序列分析证实,fljB基因中的763 bp被3550 bp的lacZ片段替代。结论:成功构建伤寒沙门菌flj∶∶lacZ突变株,为进一步研究fljB基因表达调节机制奠定了基础。     

镇江市1999年～2003年市售纯净水卫生质量分析

近年来，随着纯净水的普及，生产厂家大量增加。为保证消费者的身体健康，对镇江市1999年～2003年度市售纯净水的卫生质量进行了调查，旨在发现问题，加以改进，提高纯净水的卫生质量。现将监测结果报告如下。     

Fis对伤寒沙门菌基因表达的系统调节作用

目的：探讨伤寒沙门菌调节因子fis对基因表达的系统调节作用。方法：用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌fis基因缺陷变异株,用脉冲场凝胶电泳分析fis缺陷变异株的基因组结构。利用伤寒沙门菌全基因组DNA芯片分析技术,比较伤寒沙门菌野生株和fis基因缺陷变异株的基因表达谱差异。用重组载体pBADfis回补fis缺陷变异株,选择部分差异表达基因进行qRT—PCR验证,用半固体平板培养观察野生株、fis缺陷变异株和回补株的动力。结果：fis基因缺陷变异株含有二相鞭毛素编码基因的线性质粒缺失,且动力消失;基因表达谱比较分析结果表明,伤寒沙门菌fis基因缺陷变异株在对数生长期94个基因出现表达差异;qRT—PCR分析所选基因表达的结果与芯片分析结果相符;fis缺陷变异株在回补fis基因后,动力及差异表达基因都获得明显恢复。结论：Fis在伤寒沙门菌中对动力、侵袭及多种代谢相关基因的表达发挥重要调节作用。     

镇江市2009-2013年流行性感冒流行特征分析

目的分析江苏省镇江市2009-2013年流行性感冒(流感)流行特征。方法从中国流感监测信息系统中收集2009-2013年镇江市流感样病例监测资料、流感病毒分离与鉴定结果进行分析。结果 2009-2013年,镇江市共监测流感样病例(ILI)48 738例,其中流感样病例就诊百分比(ILI%)1.81%,0岁~、5岁~、15岁~、25岁~、60岁年龄组分别占ILI总数的9 084例(18.64%)、7 976例(16.36%)、11 185例(22.95%)、17 398例(35.70%)、3 095例(6.35%)。期间共检测标本10 811份,检出阳性标本1 588份,阳性率14.69%,其中季A(H1N1)9例(0.57%)、季A(H3N2)634例(39.93%)、新甲H1N1 499例(31.42%)、H7N9 1例(0.06%)、B型445例(28.02%)。流感样病例数与同期流感样病例就诊比例呈正相关变化(r=0.965,P0.05);流感阳性率与流感样病例数呈正相关变化(r=0.622,P0.05);流感阳性率与流感样病例就诊比例呈正相关变化(r=0.671,P0.05)。不同年龄组间阳性率差异有统计学意义(χ2=64.30,P0.05);不同季节间阳性率差异有统计学意义(χ2=302.92,P0.05)。多重对应分析显示新甲H1N1、15岁~、2009年、秋季之间有联系,B型、2010年、春季有联系,季A(H3N2)、0岁~之间有联系,H7N9和春季间有联系。结论提高哨点医院流感样病例报告质量,积极开展流感监测网络实验室流感病毒分离工作,加强对各型流感病毒的监测,以预防、控制流感的流行。     

干扰EV71病毒2Apro基因的siRNA具有潜在的抗病毒作用

目的: 探讨以肠病毒71(entrovirus 71, EV71) 2A蛋白酶(2Apro)基因为靶序列合成的siRNA是否具有潜在的抗病毒作用。方法: 用Lipofectamine 2000脂质体分别将40、60、80 nmol/L FITC标记的BLOCK iT Fluorescent Oligo转染RD细胞,通过流式细胞仪和倒置荧光显微镜检测siRNA的转染效率。将化学合成的3个siRNA 2Apro (siRNA 69、294、319)和阴性对照的乱序si RNA(siRNA SCS)转染RD细胞,siRNA 2Apro为实验组,siRNA SCS为阴性对照组,另设模拟转染组,仅用脂质体处理;用EV71分别感染各组RD细胞,观察细胞形态学改变,荧光定量PCR和蛋白质印迹检测病毒RNA和VP1蛋白。结果： 当siRNA浓度为60 nmol/L时转染效率最高,达87%。细胞形态学结果显示,与对照组比较,实验组细胞只发生了轻微的病变。荧光定量PCR和蛋白质印迹结果显示,siRNA 2Apro组的病毒RNA和VP1蛋白明显低于对照组(P<0.01)。结论： 以EV71 2Apro基因为靶序列化学合成的siRNA能有效地抑制病毒的复制。     

检测EV71和EV-U的TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR的建立

目的 建立一种针对手足口病病原体的快速准确检测方法。 方法 利用TaqMan-LNA探针建立多重荧光定量RT-PCR方法,同时检测肠道病毒71型(EV71)和肠道病毒通用型(EV-U),用含有目的序列RNA的标准品制备标准曲线,对病毒进行准确定量,同时对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。结果 用TaqMan-LNA探针多重荧光RT-PCR法检测CoxA16、CoxB2、EV71病毒和其他人类病毒RNA,证实其特异性为100%;对EV71和EV-U的检测灵敏度均达到10^{2拷贝/μl;将EV71和EV-U的RNA标准品进行重复性实验,其批内、批间变异系数分别为0.97%～2.02%和0.89%～2.13%。 结论 本方法灵敏度较高,特异性强,重复性好,适用于手足口病的临床检测。}