耐喹诺酮类福氏志贺菌基因突变分析

目的研究福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因突变与其喹诺酮类药物耐药的关系.方法对临床收集的1株喹诺酮类药物敏感福氏志贺菌、2株喹诺酮类药物耐药程度不同的福氏志贺菌,对上述2个靶基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增及核酸序列分析.结果首次发现临床分离喹诺酮类耐药福氏志贺菌parC基因突变,导致121,129,131,134,141,L51位5个位点氨基酸编码改变;耐药程度较高的菌株共发现gyrA、parC基因上6个突变位点,耐药程度较低的菌株发现gyrA基因1个突变位点.结论福氏志贺菌DNA旋转酶gyrA基因和拓扑异构酶ⅣparC基因突变均与其喹诺酮类药物耐药有关,靶基因突变位点数量可能与喹诺酮类药物耐药程度有关,临床耐药株靶基因突变存在多态性.     

氯沙坦抑制糖基化终末产物刺激培养的人内皮细胞外基质基因的表达

目的 探讨氯沙坦防治糖尿病血管病变的作用机理。方法 用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Northern印迹杂交方法测定了0.1～10 μmol·L^-1浓度的氯沙坦对经体外制备的糖基化终末代谢产物（AGEs）处理培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）转化生长因子（TGF）-β₁和纤连蛋白（FN）基因表达的影响。结果 由AGEs处理的HUVECs TGF-β₁和FN mRNA表达较正常对照组明显增高；与AGEs组相比，TGF-β₁和FN mRNA的表达在氯沙坦1.0 μmol·L^-1时分别降低了29%和23%，10 μmol·L^-1时降低了56%和62%。结论 氯沙坦通过抑制AGEs刺激的内皮细胞TGF-β₁和FN mRNA表达，从而抑制细胞外基质的生成，防止血管重构可能是其防治糖尿病血管并发病的机理之一。     

快速蛋白液相色谱系统纯化肺癌组织热休克蛋白70及其鉴定

目的:从肺癌组织中纯化并鉴定热休克蛋白70(HSP70),为研究其免疫原性和作为肿瘤疫苗奠定基础.方法:用组织蛋白裂解液从肺癌组织中提取总蛋白,应用ConA-sepharose亲和层析和快速蛋白液相色谱系统(FRLC)连续分离、梯度洗脱获得蛋白,应用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western-blot进行蛋白相对分子质量及免疫原性鉴定.结果与结论:所获蛋白的相对分子质量为70 000,经Western-blot鉴定为HSP70.     

幽门螺杆菌Omp22-HpaA融合基因工程菌蛋白的表达

目的:优化幽门螺杆菌Omp22-HpaA基因工程菌pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1的表达条件,并对其表达产物进行纯化和鉴定.方法:在不同诱导时机、不同诱导剂(IPTG)浓度和不同诱导时间条件下诱导pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1的表达,测定目的蛋白的表达量.在优化条件下诱导工程菌表达,并应用SDS-PAGE方法对表达产物进行分析,采用Amyloss树脂预装柱对可溶性Omp22-HpaA蛋白进行分离、纯化,对纯化后的蛋白行Western blot分析.结果:工程菌培养2 h时加入IPTG(终浓度为0.4 mmol/L)诱导7 h,目的蛋白Omp22-HpaA表达量达到菌体总蛋白的20%以上.经纯化得到了较高纯度(＞90%)的目的蛋白,并具有良好的免疫原性.结论:建立了从pMAL-c2X-Omp22-HpaA-TB1可溶性表达产物中纯化较高纯度Omp22-HpaA融合蛋白的方法.     

山萸肉醇提液对大鼠的急性毒性、蓄积毒性及致畸胎作用观察

目的:观察山萸肉醇提液对大鼠的急性毒性、蓄积毒性和致畸作用,为进一步开发利用山萸肉提供毒理学资料.方法:采用食品安全性毒理学评价程序与方法规定的急性毒性试验、致畸胎试验以及蓄积毒性试验方法,对山萸肉醇提液进行检测.结果:山萸肉醇提液的LD50＞10 g/kg,蓄积系数＞5;山萸肉醇提液对实验小鼠无致畸胎作用.结论:山萸肉醇提液无急性毒性和蓄积毒性,对脊椎动物胚胎无致畸作用.     

急性白血病患者骨髓Livin、Smac mRNA的表达

目的：研究急性白血病（AL）患者凋亡蛋白抑制因子Livin及其促凋亡因子Smac基因的表达及临床意义。方法：选取52例AL患者（初治组。化疗1疗程后，52例AL患者中有28例达完全缓解（缓解组），其中6例于观察期间复发（复发组））和10名健康人（正常对照组）。取骨髓液并分离单个核细胞，提取细胞总RNA，并以白血病HL-60细胞株为阳性对照，采用RT—PCR方法检测Livin、SmacmRNA表达情况。分析Livin和SmacmRNA表达的相关性和2者的表达与AL缓解率的关系。结果：初治组中Livin、SmacmRNA的阳性表达率（40．3％、59．6％）较正常对照组（0％、10．0％）明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。缓解组中LivinmRNA的阳性表达率（0％）与复发组的阳性率（50．0％）相比，差异有统计学意义（，=9．769，P〈0．05）。缓解组中SmacmRNA阳性表达率（14．2％）与复发组的阳性率（60．7％）相比差异有统计学意义（X2=4．905，P〈0．05）。AL患者Livin、SmacmRNA的表达具有关联性（r=0．267，X2=4．020，P=0．045）。在初治组中，Livin、SmacmRNA表达阳性患者的完全缓解率均低于表达阴性的患者。44例可进行疗效评估的患者中，LivinmRNA表达阳性者与表达阴性者完全缓解率相比差异有统计学意义（X2=4．762，P=0．029）。SmacmRNA表达阴性者与表达阳性者完全缓解率相比差异有统计学意义（X2=5．135，P=0．023）。结论：Livin、SmacmRNA过度表达和急性白血病的发病呈正相关；Livin、Smac高表达的患者完全缓解率低，预后不良。     

幽门螺杆菌cagA基因对胃癌细胞影响

目的观察幽门螺杆菌（Hp）野生株与cagA基因同源缺失突变株对人胃癌细胞株BGC823的细胞增殖和凋亡的影响,探讨与Hp毒力基因cagA相关的细胞水平的毒性效应。方法将幽门螺杆菌野生株与cagA基因缺失突变株与BGC823细胞共培养,分别在6,12,24和48 h观察细胞形态学变化,采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果野生株和突变株Hp攻击BGC823细胞6 h,即可引起细胞的形态学变化,48 h时均可观察到细胞形态呈分散及蜂鸟样改变（细胞拉伸）。MTT法检测显示,野生株对BGC823细胞增殖具有抑制作用,而缺失cagA基因的突变株可刺激细胞增殖,且在24,48 h的2个时间点上均高于对照组和野生株组（P〈0.05）。流式细胞分析显示,在攻击BGC823细胞48 h后,野生株和突变株均可引起细胞凋亡,凋亡率高于对照组（P〈0.05）,2个实验组的凋亡率差异无统计学意义。结论Hp作用后细胞呈分散和蜂鸟样改变（伸长）并不是cagA基因特有的细胞学效应;cagA基因是Hp抑制细胞增值所必需的元素;cagA基因的有无对Hp致凋亡效应的影响不大,在Hp致细胞凋亡的效应中作用可能有限。     

蟒河污染对人群微核发生率的影响

目的 探讨黄河支流蟒河污染对沿岸人群微核发生的影响。方法 采用“改良人体外周血淋巴细胞微核检测方法”，对污染区和对照区居民地外周血淋巴细胞微核检查。结果 污染区居民外周血淋巴细胞微核率（４．６５％）、微核细胞率（４．１８％）明显高于对照区（２．２１％，２．０３％）。结论 蟒河污染对沿岸居民遗传物质造成了一定的损伤。     

性激素水平对染氟大鼠生精细胞凋亡的调节作用

目的探讨性激素水平对染氟大鼠生精细胞凋亡的调节作用。方法通过腹腔注射氟化钠(NaF)溶液的方法建立大鼠氟中毒模型,采用放射免疫的方法检测血清睾酮和雌二醇水平,采用末端标记法(TUNEL)检测凋亡的生精细胞。结果①NaF10、20mg·kg-1·(2d)-1染毒28d时,睾酮水平为(10.39±0.54)、(8.34±1.29)nmol/L,较对照组降低(P<0.05或0.01);染毒38d时,睾酮水平为(9.82±0.66)、(6.33±0.68)nmol/L,较对照组降低(P<0.01)。②NaF10、20mg·kg-1·(2d)-1染毒28d时,雌二醇水平为(44.24±11.32)、(36.27±3.00)pmol/L,较对照组降低(P<0.01);染毒38d时,雌二醇水平为(42.90±9.81)、(26.02±16.14)pmol/L,较对照组降低(P<0.01)。③与对照组相比,各染氟组生精细胞凋亡率均升高(P<0.01)。④生精细胞凋亡率与血清睾酮水平呈负相关(r值为-0.901～-0.886),与血清雌二醇水平呈负相关(r值为-0.989～-0.936)。结论氟在一定剂量和作用时间内可致大鼠血清性激素水平紊乱,是导致生精细胞凋亡的重要原因之一。     

幽门螺杆菌1pp20基因在大肠杆菌TB1中诱导表达方法的研究

目的 :研究影响幽门螺杆菌lpp2 0基因在大肠杆菌TB1中表达的因素 ,探索高效表达的条件 ,为幽门螺杆菌疫苗抗原的纯化和生产奠定基础。方法 :用PCR方法从幽门螺杆菌的染色体DNA上扩增出lpp2 0基因片段 ,将目的基因插入的表达载体pMAL c2X中 ,用重组质粒转化大肠杆菌 (E .coliTB1)。采用不同的诱导时间、IPTG浓度和诱导温度进行诱导表达 ,应用SDS PAGE方法对表达产物进行分析。结果 :在诱导 1～ 4h之间 ,融合蛋白的表达量变化较为显著 ,而 4～ 8h之间则无显著变化 ;IPTG终浓度低于 0 .2mmol/L或高于3 .2mmol/L均能显著减少融合蛋白的表达量 (P <0 .0 5 ) ,而IPTG终浓度在 0 .4～ 2 .4mmol/L之间时 ,对融合蛋白的表达量并无显著影响 ;诱导温度在 3 0℃～ 40℃之间变化对融合蛋白的表达量无显著影响 ,超出此范围可使表达量显著减少 (P <0 .0 5 ) ;在优化诱导条件后 ,融合蛋白的表达量可达全菌总蛋白的 3 4%。结论 :通过调整诱导时间、IPTG浓度和诱导温度 ,lpp2 0基因与载体pMAL c2X的重组质粒在E .coliTB1中能够高效表达。