RNA干扰同源盒A10表达对K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过构建靶向同源盒A10(HOXA10)的真核表达载体,探讨利用RNA干扰沉默HOXA10基因对人慢性髓系白血病细胞株K562增殖和凋亡的影响.方法 根据筛选的针对HOXA10的特异性有效小干扰RNA(siRNA)序列设计合成短发夹RNA(shRNA)寡核苷酸链,构建pGPHI-GFP-Neo-HOXA10真核表达载体并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞.实验分为细胞对照组(仅加等量细胞及培养基),阴性对照组(脂质体转染阴性对照质粒)、实验组(脂质体转染pGPHI-GFP-Neo-HOXA10).转染载体24 h后利用RT-PCR检测各组HOXA10 mRNA表达;转染载体24、48、72 h后应用MTT法检测各组细胞增殖并计算细胞抑制率;转染载体48 h后应用流式细胞术检测各组细胞凋亡.结果 成功构建pGPHI-GFP-Neo-HOXA10载体并转染K562细胞.与细胞对照组和阴性对照组比较,实验组转染载体能有效降低HOXA10 mRNA的表达水平[(38.86±4.49)％比(88.52±9.24)％、(86.75±7.38)％,P＜0.05],而阴性对照组与细胞对照组比较差异则无统计学意义(P＞0.05).与阴性对照组比较,实验组载体作用于K562细胞24、48、72 h后,细胞增殖能力均明显下降,细胞抑制率明显升高[(39.92±0.74)％比(7.98±5.52)％;(55.62±1.18)％比(8.27±3.45)％;(66.30±1.26)％比(8.63±3.58)％;均P＜0.05].实验组细胞凋亡率较细胞对照组、阴性对照组也显著升高[(22.29±1.67)％比(9.82±0.69)％、(10.14±0.96)％,P＜0.05],而阴性对照组与细胞对照组比较差异则没有统计学意义(P＞0.05).结论 构建的真核表达载体pGPHI-GFP-Neo-HOXA10可有效沉默K562细胞中HOXA10基因的表达,能明显抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

Hoxa10真核表达载体增强K562细胞对柔红霉素敏感度的研究

目的构建高效干扰Hoxa10基因表达的shRNA真核载体,探讨其对人慢性髓系白血病细胞株K562对化疗药物柔红霉素（daunorubicin,DNR）敏感度的影响。方法设计合成针对Hoxa10的特异性shRNA寡核苷酸链,构建真核表达载体pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10并测序,应用阳离子脂质体转染K562细胞。实验分三组：正常对照组、阴性对照组、实验组（分别为正常K562细胞、阴性对照质粒转染K562细胞、pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10转染K562细胞）,三组细胞均加入不同浓度的DNR。RT-PCR检测Hoxa10 mRNA的表达,应用MTT检测各组细胞对DNR的敏感度,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建pGPHI/GFP/Neo-Hoxa10载体并转染K562细胞,该载体能有效降低Hoxa10mRNA表达水平ODR=（38.864±4.488）%;MTT结果显示Hoxa10重组载体可显著降低K562细胞对DNR的IC50（P<0.05),对DNR的敏感度能提高约3.58倍。流式细胞术结果显示,该载体下调Hoxa10的表达后,细胞的凋亡率显著增加,可达（16.207±4.891）%（P<0.05),且联合DNR后细胞凋亡率明显提高,凋亡率达（76.887±0.967）%（P<0.05)。结论本实验构建的靶向Hoxa10的真核表达载体对K562细胞中Hoxa10的表达有明显抑制作用,并能明显增强其对DNR的化疗敏感度。     

青岛地区2012~2014年百日咳综合征发病趋势与临床治疗分析

目的分析2012~2014年青岛市百日咳综合征发病趋势及治疗体会。方法对2012-01~2014-12青岛市妇女儿童医院呼吸科住院病房收治的82例百日咳综合征患儿的病例资料进行回顾性分析。结果 (1)2012年组、2013年组、2014年组三组患儿发病均有明显的年龄特点及季节性,发病年龄在2个月~1岁10个月之间,其中以6个月为主。男37例(45.12%),女45例(54.88%)。春夏季70例(85.37%),秋冬季12例(14.63%)。城市29例(35.37%),农村53例(64.63%)。(2)2014年组患儿病原学检出更多元化,混合感染增多,病原学检出肺炎支原体11例,腺病毒5例,鲍曼不动杆菌1例,阴沟肠杆菌3例等,未检出病原6例。单一病原感染40例,2种病原感染7例,3种病原感染3例。三组患儿均未检出百日咳杆菌。(3)2014年组患儿影像学表现更复杂,支气管肺炎、间质改变、肺不张、胃食管反流增多。(4)2014年组较2012年组及2013年组合并球结膜出血、喘息患者增多,治疗困难增大,抗生素联合应用增多,平均住院日增加,差异有统计学意义(P0.05)。结论百日咳综合征发病具有明显季节性,以春夏为多,发病趋势逐年上升,病原学复杂,合并症复杂,治疗难度增大,抗生素联合应用增多,平均住院日增加。百日咳综合征与百日咳临床特点相似,亟需高灵敏度和高特异度的百日咳杆菌实验室诊断方法应用于临床,针对病因正确评估规范处理是治疗成功的关键。     

HOXA7基因与白血病

HOXA7作为HOX基因家族的一员,是造血细胞增殖分化的主控基因,其在白血病中的表达及功能受多种上游因子的调控及协同作用分子、其他HOX基因的影响,并且作用于下游靶基因,导致白血病的发生、发展.HOXA7可影响白血病的临床表现,且其过表达与白血病疗效差及预后不佳密切相关.     

靶向同源盒A10特异性干扰性小RNA序列的筛选及功能鉴定

 【摘要】　目的　筛选有效干扰同源盒（HOX）A10基因表达的特异性干扰性小RNA（siRNA）序列并鉴定其功能,为利用RNA干扰技术靶向HOXA10防治肿瘤提供实验依据。方法　设计合成3对针对HOXA10基因不同位点的siRNA序列,应用阳离子脂质体介导转染人肺腺癌A549细胞,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测HOXA10 mRNA表达,以HOXA10与β-actin灰度比值（ODR）表示相对表达水平。筛选出抑制HOXA10效果最佳的siRNA序列,应用四甲基偶氮唑盐（MTT）和流式细胞术分别检测该siRNA干扰HOXA10后对A549细胞增殖和凋亡的影响。结果　3对siRNA均能抑制HOXA10的表达,其中siRNA1抑制HOXA10 mRNA的表达最为明显,ODR为（20.190±1.698）%;siRNA1对A549细胞的增殖抑制率可达（69.793±2.092）%;siRNA转染后细胞凋亡率显著提高,siRNA1诱导A549凋亡作用最为明显,凋亡率为（29.593±2.670）%。结论　筛选出的siRNA1序列可有效沉默HOXA10基因的表达,并能有效抑制A549细胞增殖、促进其凋亡。     

原发性血小板增多症发病机制研究进展

原发性血小板增多症(ET)是一种以巨核细胞系增生为主的多能造血干细胞克隆性疾病.儿童与成人疾病特征类似,主要表现为血小板持续性增多,伴有出血、血栓形成,肝脾轻至中度肿大.研究表明ET的发病与多种基因、微小RNA、免疫分子的表达异常或失调及一些染色体异常等相关.该文综述了ET发病机制在分子生物学、免疫学、细胞遗传学等领域...     

同源盒基因家族在神经系统中的研究进展

同源盒基因家族编码一类转录调节因子,能特异地结合并调控靶基因,控制胚胎发育及细胞增殖分化.该家族中的多个亚家族与神经系统的早期分化发育密切相关,它们的异常表达参与了神经系统疾病的发生发展.研究同源盒基因家族与神经系统的关系,有利于预防神经系统异常分化发育和疾病的发生,为探索治疗相关疾病提供新途径.     

HOXA10基因在儿童急性白血病中的表达及意义

目的探讨急性白血病患儿同源盒(HOX)A10基因的表达及其临床意义。方法选择50例初治急性白血病患儿,其中急性髓系白血病(AML)25例、急性淋巴细胞白血病(ALL)25例,以及13例对照儿童,分离其骨髓单个核细胞,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨髓单个核细胞HOXA10 mRNA;检测急性白血病患儿外周血白细胞计数(WBC),分析不同类型急性白血病患儿HOXA10基因表达之间的关系。结果对照儿童HOXA10基因的阳性表达率为23.08%,ALL患儿为40%,AML患儿为100%;平均表达灰度比值(ODR)分别为对照儿童0.022±0.001,AML患儿0.373±0.113,ALL患儿0.151±0.006,三组间阳性表达率及表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),其中尤以AML患儿最高。HOXA10基因在各型AML中均有表达,其表达水平依次为M1和(或)M2型、M3型、M4和(或)M5型,差异有统计学意义(P<0.01)。WBC≥30×109/L的急性白血病患儿的HOXA10基因阳性表达率显著增高;高危组急性白血病患儿的HOXA10基因的阳性表达率也明显高于中危组和低危组。结论 HOXA10基因的高表达与儿童急性白血病,尤其是与AML明显相关,并且随着AML白血病细胞分化成熟表达逐渐下降;HOXA10基因的阳性表达率与儿童急性白血病危险程度呈正相关,有望成为儿童急性白血病诊断、治疗及判断预后的一个靶点。     

隧道式经外周静脉穿刺中心静脉导管相关感染致隧道穿孔成功保留导管1例报告

经 外 周 静 脉 穿 刺 中 心 静 脉 导 管(peripherally inserted central catheter,PICC)是癌症患者常用的一种中长期静脉输液治疗方式,在临床中应用广泛 [1].隧道式PICC是对传统PICC置管技术的进一步改良,通过建立皮下隧道,实现静脉穿刺点和导管体外出口分离,既扩大...