唾液NAG酶周期性变化及其应用研究

本研究对123例月经周期正常妇女的N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(简称NAG酶)进行162个周期的观察,使用对硝基苯—N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷作底物与唾液中的NAG酶进行酶促反应。在一定条件下NAG酶作用于底物产生N-乙酰-β-D氨基葡萄糖和对硝基酚,再加一定量的碱溶液终止其酶反应,使对硝基酚呈黄色,然后进行比色,并以尿样LH(单克隆抗体酶免疫法)作为对照观察周期性变化。结果表明:在排卵前和排卵期NAG酶活性上升,通常在下次月经前13～17天之间。准确率90％与尿样LH对照符合率95％。     

O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

目的本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法。方法以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条。在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据。结果用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3．5×10^4CFU／mL。用自制试纸条和标准法同时检测77份样品（均为水产品）,两种方法的总符合率为85．7％。结论O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展,具有广阔的应用前景。     

霍乱弧菌环介导等温扩增LAMP技术检测

目的 应用环介导等温扩增技术(LAMP)进行霍乱弧菌的快速检测.方法 针对霍乱弧菌的管家基因(mdh)设计4条特异性引物(2条内引物和2条外引物),建立快速检测食品中霍乱弧菌的环介导等温扩增方法;应用该方法对17种细菌共42株菌进行LAMP扩增,并进行确证,全面评估该方法的灵敏度、特异性、准确性等.结果 该方法检测21株霍乱弧菌均得到阳性扩增结果,其余21株非霍乱弧菌均未扩增出条带,扩增反应最佳反应时间为60min,反应温度为65℃.霍乱弧菌基因组DNA和纯培养物的检测灵敏度分别约为40 fg和50 cfu/mL.对模拟食品样品进行直接检测,检测限为70 cfu/g.结论 该方法具有特异性强、灵敏度高,操作简便快速、不需要复杂仪器设备,适用于食品的快速检测.     

检出山梨醇阳性肠出血性大肠杆菌O157:H7一例及特征分析

目的:肠出血性大肠杆菌O157:H7(entro-hemorrhaguc E.Coli O157:H7 or EHEC O157:H7)是具有强致病力的条件致病菌,该菌可通过污染的食物、水、以及直接接触感染的人或动物而感染。加强对该菌的检验,对预防与控制由该菌所致的感染流行十分重要。方法:本文参照中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 0973-2000方法进行检验。结果:从进口冻猪肚中检出一例EHEC O157:H7,并用PCR方法检测VERO毒素呈阳性。结论:该菌株的生化特征与相关文献报道的EHEC O157:H7生化特征不同的是山梨醇阳性,棉籽糖阴性,检验过程中应慎重鉴别。     

E.coli O157：H7 LAMP检测方法的建立

目的建立检测E.coli O157：H7环介导的等温扩增方法（LAMP）。方法选取E.coli O157：H7的rfbE基因设计LAMP引物,优化建立LAMP检测体系。并用该体系和国标法对76份人工污染样品进行了检测。结果所建立的E.coli O157：H7 LAMP体系具有良好的特异性,用该体系对9属13种41株菌进行检测,结果只有E.coli O157：H7的扩增产物电泳结果为阶梯状条带,非E.coli O157：H7均未产生扩增产物,灵敏性为2.7×101CFU/mL。样品及培养基对反应体系没有影响或影响很小。对76份样品进行了检测,E.coli O157：H7 LAMP检测方法与国标法的总符合率为96.1%,2h内即可完成检测。结论本研究建立的E.coli O157：H7的LAMP法不但解决了分子生物学检测对实验室仪器设备的高要求问题,而且检测方法简便、快捷,非常便于基层实验室和现场检测使用。     

生果、蔬中大肠杆菌O157∶H7荧光定量PCR检测方法的评估及改进

目的:评估污染风险较高的6种生果、蔬中E.coli.O157:H7的PCR检测情况,以及初步探讨其机理和改善措施。方法:采用添加标准菌株,比较荧光定量PCR检测方法和传统分离培养法的检出情况,然后在PCR反应体系中分别添加PVPP、脱脂奶粉、BSA等物质,比较检出灵敏度的改善情况。结果:除绿豆芽和青椒外,PCR检测方法和传统分离培养法均能在1 cfu/10g、10 cfu/10g、100 cfu/10g的接种浓度上检出阳性,对于绿豆芽和青椒,荧光定量PCR检测方法在1 cfu/10g接种浓度上未检出,分离培养法在10 cfu/10g、100 cfu/10g两个接种浓度上均未检出。添加脱脂奶粉和BSA后,绿豆芽和青椒样品在1 cfu/10g的接种浓度上检出阳性,且在该浓度上其他样品的检出频率均有一定提高。PVPP对PCR体系改善不明显。结论:在生果、蔬中E.coli.O157∶H7检测中,荧光定量PCR检测方法比传统分离培养法灵敏度更高。脱脂奶粉和BSA可以用于改善生果、蔬中E.coli.O157:H7的荧光定量PCR检测体系,提高检出率和检测灵敏度。     

O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制

目的本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法。方法以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条。在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据。结果用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3.5×104CFU/mL。用自制试纸条和标准法同时检测77份样品(均为水产品),两种方法的总符合率为85.7%。结论O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展,具有广阔的应用前景。     

人羊膜中NAG酶的分离提取及酶活性测定研究

本项研究就人手膜中NAG酶的分离、提纯和酶活性的测定,建立了一种简易、快速和有效的方法、可获得电泳纯的NAG酶、结合前人报导的NAG酶活性异常升高与临床几种病理学变化密切相关。本文作者通过对123例的初步观察,发现唾液中NAG酶活性升高与正常妇女月经周期中LH峰值变化及排卵有一种规律性关系存在。     

快速检测副溶血弧菌及其毒力株方法的建立

目的利用实时PCR技术，建立检测副溶血弧菌及其毒力株的方法。方法根据副溶血弧菌的跨膜转录激活蛋白toxR基因序列设计引物和改良分子信标（ROX标记），建立检测所有副溶血弧菌菌株的方法。通过与文献报道的检测直接耐热溶血素（TDH）基因的实时PCR体系合并，建立了同时检测副溶血弧菌及其毒力株的双重实时PCR方法。结果通过对9个属的101株菌株进行试验，所有的52株副溶血弧菌均产生ROX阳性信号（toxR’），其余菌株均检测为阴性，其中46．2％（24／52）的副溶血弧菌产生HEX阳性信号（tdh^＋）。检测toxR基因的实时PCR体系DNA灵敏度为10～100fg／PCR体系，菌液灵敏度为59．2～592CFU/ml或2．96～29．6CFU／PCR体系。另外成功构建了双重实时PCR体系，能同时对副溶血弧菌的toxR和tdh基因进行检测。结论建立的双重实时PCR体系能同时检测副溶血弧菌及其毒力株，从而为食品的安全检疫提供有效手段。     

应用VITEK 32检验奶粉中阪崎肠杆菌的探讨

目的阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii）是乳制品中新发现的引起广泛关注的一种致病菌，加强对该菌的检验，对预防与控制由该菌所致的感染流行十分重要。方法采用中华人民共和国出入境检验检疫行业标准：SN／T1632．1—2005《奶粉中阪崎肠杆菌检验方法》第1部分：奶粉中阪崎肠杆菌的分离与计数方法，应用VITEK32（全自动微生物鉴定和药敏分析仪）进行检验。结果从原产法国的婴幼儿营养配方奶粉中检出阪崎肠杆菌。结论检出菌株与质控菌株的生化特征基本一致，该方法可使样品中极少量的阪崎肠杆菌被检测和定量。