全反式维甲酸诱导APL细胞分化过程中钙信号途径基因表达水平的变化

为研究钙信号途径在髓系分化中的作用,采用基因芯片技术检测了钙信号途径相关基因在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞性白血病(APL)细胞株NB4细胞分化过程中的表达情况,并运用实时定量RT-PCR验证基因芯片部分结果,同时检测这些基因在ATRA和8-CPT-cAMP单独和联合作用于NB4-R1细胞和ATRA诱导APL初诊患者原代细胞分化时的表达情况。结果发现:在ATRA诱导NB4细胞分化过程中,许多能直接调节胞内钙离子浓度的基因发生了变化,同时发现许多钙信号途径下游的效应分子的表达上调,并得到实时定量RT-PCR验证。这些基因在ATRA和8-CPT-cAMP单独作用于NB4-R1细胞时变化不大,而在ATRA和8-CPT-cAMP联合作用于NB4-R1细胞分化时与ATRA诱导NB4细胞分化时的表达变化相似。另外,以上基因在ATRA诱导APL初诊患者原代细胞分化的变化情况与诱导NB4细胞分化时相似。结论:钙信号途径可能参与了ATRA诱导的APL细胞分化。     

以基因芯片技术研究胸腺类癌引起异位ACTH综合征的基因表达

目的　研究引起异位ACTH综合征的胸腺类癌组织与正常胸腺组织的基因表达差异,探讨胸腺类癌引起异位ACTH综合征的发病机制。方法　利用基因芯片技术,通过不同荧光(Cy3和Cy5)标记的对照和胸腺类癌组织RNA样本与芯片杂交,观察两种组织间的基因差异表达。结果　研究发现,基因芯片的4 224个基因中403个基因在胸腺类癌组织中表达下调, 394个基因表达上调2倍以上(其中23个与细胞分裂有关), 51个基因上调5倍以上(其中与细胞分裂有关的基因1个,即PAK3)。结论　引起异位ACTH综合征的胸腺类癌组织与正常胸腺组织存在多个差异表达的基因,PAK3可能参与了该肿瘤的发生。     

通过整合分析解析AML1-ETO融合蛋白靶基因的方法

目的:通过整合不同来源的表达谱数据和转录因子结合位点分析方法,以解析受AML1-ETO融合蛋白调控的潜在靶基因。方法:整合含有异常转录因子的表达谱数据和RNA干扰该转录因子的表达谱数据,筛选出与该转录因子密切相关的差异表达基因,应用转录因子结合位点分析法解析和评价该转录因子的潜在靶基因。以富集和干扰AML1-ETO融合蛋白表达的表达谱数据作为实例,具体解析AML1-ETO融合蛋白调控的潜在靶基因,并通过染色体免疫共沉淀-实时定量PC(Rchromatin immunoprecipitation-real time quantitative-PCR,ChIP-qPCR)验证这种方法的可靠性。结果:获得与AML1-ETO融合蛋白密切相关的基因311条,其中72条包含有AML1-ETO结合位点(上调25条、下调47条)。上调和下调基因与背景基因组相比,差异均有统计学意义(P值均<0.005)。整合之后,2组表达谱中共同调变的基因中,潜在AML1-ETO融合蛋白调控的靶基因比例更高。随机选择潜在靶基因进行ChIP-qPCR验证,证实这些基因大多能被AML1-ETO融合蛋白结合。结论:通过整合分析筛选AML1-ETO融合蛋白调控潜在靶基因的方法是可行的,且可信度较高。     

联用维甲酸和三氧化二砷对APL细胞作用机制的初步研究

目的 探讨联用维甲酸(RA)和三氧化二砷(ATO)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞的作用机制.方法 单用或联用生理和药理浓度RA和ATO作用于NB4细胞(APL细胞株),于不同时相进行分化抗原CD11b以及凋亡早期指标膜联蛋白-Ⅴ(annexin-Ⅴ)的测定,同时绘制细胞生长曲线.结果 在细胞分化方面,ATO和生理浓度RA之间存在协同作用,促进NB4细胞的分化;然而ATO对药理浓度RA诱导的NB4细胞分化却具有抑制作用;在生长抑制和早期凋亡方面,在联用组未表现出明显的协同作用.结论 联用RA和ATO在临床治疗APL上的协同作用机制比较复杂,需要进一步研究.     

Fenretinide诱导白血病细胞凋亡的机理研究

Fenretinide（4-HPR）是人工合成的全反式维甲酸衍生物,能够通过诱导凋亡抑制多种肿瘤细胞生长和增殖,但是其机理尚不很清楚.本研究考察4-HPR对几种白血病细胞的影响,并用U937为对象研究其作用机制.在研究中进行了细胞生长和增殖实验,以膜联蛋白检测细胞凋亡,测定活性氧（ROS）和线粒体跨膜电位（△ψm）及用Western blot检测蛋白表达.研究结果表明,4-HPR能够剂量依赖性地抑制多种白血病细胞株的增殖,进一步发现4-HPR能够诱导U937细胞发生凋亡,并且此凋亡可以被维生素C所抑制.此凋亡过程伴有活性氧的升高,线粒体跨膜电位的下降,以及酶原型胱冬酶-8（caspase-8）,-3的蛋白水平表达下降.结论：4-HPR可能通过升高细胞内ROS的水平,造成线粒体膜损伤,引发由caspase家族成员介导的凋亡,提示4-HPR可能是一种线粒体靶向的药物.     

全反式维甲酸诱导急性早幼粒细胞白血病细胞分化中分化抑制因子1表达水平的变化

目的 探讨分化抑制因子1(ID1)在全反式维甲酸(ATRA)诱导急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞分化中的作用.方法 运用基因芯片、放线菌酮抑制试验、实时定量RT-PCR和Western blot.方法 检测ID1存ATRA诱导的APL细胞系及原代APL细胞分化过程中表达情况.结果 在ATRA污导的NB4细胞和APL初诊患者原代细胞分化过程巾ID1基因的表达上调,ATRA诱导NB4细胞2hID1表达达高峰,其相对表达水平与对照相比升高359.4±48.7倍;ATRA处理APL患者骨髓细胞ID1表达水平2 h达高峰,其中1例患者晕复3次检测的.结果 为对照的(311.1±48.7)倍.而且ID1基因的上调不需要其他蛋白的合成.而在ATRA处理ATRA耐药细胞系NB4-R2细胞未见ID1的表达发生明显变化.结论 ID1基因可能作为ATRA的靶基因参与了ATRA诱导的粒系分化.     

全反式维甲酸诱导NB4细胞分化过程中泛素-蛋白酶体系统的表达变化

目的筛选在全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞分化过程中,参与早幼粒细胞白血病-维甲酸α受体(PML-RARα)融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统相关基因。方法采用基因芯片技术检测泛素-蛋白酶体系统相关基因在ATRA诱导NB4细胞分化过程中的表达情况,并运用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot方法在基因和蛋白水平对基因芯片部分结果进行验证,同时对这些基因在ATRA诱导急性早幼粒细胞性白血病(APL)初诊患者原代细胞分化时的表达情况进行检测。结果在ATRA诱导NB4细胞向粒系分化的过程中,发现许多泛素-蛋白酶体系统相关的基因主要在ATRA作用12h后表达上调,其中PSMB8和PSMB9这两个基因的芯片结果通过实时荧光定量RT-PCR和Western Blot得到验证。同时在ATRA作用于APL初诊患者原代细胞后,这些基因的变化情况也与作用于NB4细胞相似。结论在ATRA诱导APL细胞分化过程中筛选出一些受ATRA调控的参与PML-RARα融合蛋白降解的泛素-蛋白酶体系统分子。