PCR产物直接测序快速识别病原菌

[目的]结合PCR和DNA测序技术,建立一种适用于传染性疾病预防控制的快速准确地识别病原细菌的分子检测方法.[方法]以布鲁氏菌为例,利用PCR分别从纯培养物、模拟标本中扩增布鲁氏菌16S和31kd基因,并对扩增产物测序,与数据库进行比对,根据比对结果确定扩增产物是否来源于布氏菌.[结果]从纯培养物和模拟标本成功扩增特异产物,测定序列与数据库比对,能很快准确确定病原的种类,优于单纯的PCR扩增.[结论]结合PCR扩增和产物测序的分子检测方法切实可行,为疾病预防控制体系中病原菌的快速识别提供了一个快速、高效和准确的方法.     

布鲁氏菌自杀载体的改建及其在突变株构建中的应用

目的:改建布鲁氏菌自杀载体.方法:用NdeⅠ将pKOBEG-SacB质粒中的反向筛选基因SacB切下来,与同样酶切处理的pUC19质粒连接,得到pUC19-SacB,经测序和蔗糖筛选实验证实.结果:成功将SacB从pKOBEG-SacB中切下来并插入到pUC19质粒中,构建得到了pUC19- SacB.测序和蔗糖筛选实验证实.插入的sacB基因具有较好的反筛功能.我们利用该质粒,成功的构建了布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统的突变株,改建的载体能高效的应用于布鲁氏菌染色体的精确修饰.结论:构建了一个新的自杀质粒pUC19-SacB,该质粒能用于布鲁氏菌无痕缺失突变株的构建.     

125株耐碳青霉烯类抗菌药物鲍氏不动杆菌多位点序列分型

目的了解医院耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌的遗传特征。方法选取耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌分离株,进行多位点序列分型(MLST)。结果选取的125株耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌,7个看家基因中6个等位基因数为1,gpi的等位基因数为3,可变位点数为3;125株菌MLST分析,3个ST型,其中ST 75型有82株,ST92型有20株,ST138型有23株,ST75、ST92与ST138属于同一克隆群。结论医院耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌相对进化较慢,对多种抗菌药物耐药,应严格消毒措施及无菌操作,减少由耐碳青霉烯类鲍氏不动杆菌引起的医院感染;减少抗菌药物的使用,减缓泛耐药菌的产生。     

多重PCR特异检测布鲁氏菌方法的建立

目的建立一种快速检测布鲁氏菌的多重PCR方法,为临床快速检测、准确诊断布鲁氏菌提供依据。方法针对布鲁氏菌外膜蛋白31 kD、22 kD和2a基因,各设计一对引物,扩增片断大小分别为427 bp3、17 bp和830 bp。利用纯培养物和模拟标本,分析这3对引物的特异性和敏感性。结果3对引物均能特异扩增布鲁氏菌的DNA,31 kD、22 kD和2a,扩增纯培养物的敏感性分别为2.8×103、4.6×103和2.1×104cfu,将3对引物组合在一起建立了多重PCR方法,能从模拟的细胞和血液标本中扩增出特异的产物,对模拟的细胞感染标本的敏感性为1×105cfu,对模拟的血标本的敏感性为1.2×106cfu。结论针对外膜蛋白基因,建立了能特异地检测标本中布鲁氏菌的多重PCR检测方法。     

福氏志贺菌Ⅲ型分泌系统效应子IpaH4．5功能的初步研究

目的：IpaH家族是福氏志贺菌Ⅲ型分泌系统（T3SS）效应子的成员,但功能不清,特别是对IpaH4．5的研究未见报道。本研究拟探讨IpaH4．5的功能。方法：克隆了福氏志贺菌2a 301株的IpaH4．5基因,构建了带Flag和GFP标签的IpaH4．5真核表达载体。通过Western印迹和共聚焦确定IpaH4．5在真核细胞293T中的表达和定位,通过报道基因的方法观察IpaH4．5对宿主细胞NF—κB途径的影响。结果：Western印迹证实IpaH4．5在真核细胞中有表达,激光共聚焦确定IpaH4．5在真核细胞中定位于细胞膜和细胞核,通过报道基因观察到它可以抑制宿主细胞的NF—κB途径。结论：发现IpaH4．5可以抑制NF—κB途径,为进一步研究IpaH4．5的功能奠定了基础。     

一种过氧乙酸与过氧化氢混合消毒液对细菌芽孢与病毒杀灭效果比较

摘要 目的 比较过氧乙酸与过氧化氢混合消毒液对枯草杆菌黑色变种芽孢与脊髓灰质炎病毒杀灭效果。〖STHZ〗〖HT5”H〗方法 〖ST〗〖HT5SS〗采用悬液定量杀灭试验方法，对一种过氧乙酸与过氧化氢混合消毒液杀灭细菌芽孢和病毒的效果进行了比较观察。〖STHZ〗〖HT5”H〗结果 〖ST〗〖HT5SS〗用过氧乙酸浓度为1 300 mg/L、过氧化氢浓度为6 009 mg/L的消毒液作用2.5 min，可完全杀灭悬液内枯草杆菌黑色变种芽孢。用过氧乙酸浓度为1 800 mg/L、过氧化氢浓度为8 320 mg/L的消毒液作用5.0 min，对悬液内脊髓灰质炎病毒的灭活对数值为1.66；作用7.5 min，可以达到灭活病毒效果合格。〖STHZ〗〖HT5”H〗结论 〖ST〗〖HT5SS〗所用消毒液灭活脊髓灰质炎病毒的剂量明显高于杀灭枯草杆菌黑色变种芽孢。     

北京部分地区肠道病原菌的分布及耐药状况

目的监测北京部分地区肠道致病菌的组成及耐药状况,为本地区的流行病学研究及临床合理用药提供依据。方法480份粪便标本按常规培养,筛选出致病菌后经生化及血清学进一步鉴定到种、群或血清型,并进行药敏试验。结果肠道病原菌感染,以男性为主,儿童和青年发病为多,6~8月为腹泻发病高峰。病原以致泻性大肠杆菌居首位,其次是志贺菌。本次检测出肠道致病菌对氨苄西林(67.8%)、甲氧苄氨嘧啶(67.8%)等均有严重的抗药性;对哌拉西林(42.5%)、氨苄西林-舒巴坦(33.0%)、呋喃妥因(30.5%)等也均产生了不同程度的抗药性:只有对美洛培南(0%)、磷霉素(1.1%)、头孢塞肟-克拉维酸(3.4%)、头孢他啶(4.6%)、氨曲南(5.2%)均比较敏感。结论北京地区感染性腹泻的病原种类繁多,有性别、年龄、季节的分布特点,耐药性不同,应重视监测。