慢性肾脏病患者游离脂肪酸与细胞因子及颈动脉病变的关系

Objective To investigate the serum level of free fatty acid (FFA) and explore its relationship with cytokines and atherosclerosis (AS) in chronic kidney disease (CKD).Methods The serum level of FFA was determined with enzymatic colorimetry.IL-1 β, IL-6 and TNFα were determined with ELISA.High-sensitivity C-reactive protein (hsCRP) was measured with immunoturbidimetry.Prevalence of atherosclerosis was detected with carotid ultrasonography.We evaluated the relationship between serum levels of FFA and IL-1β,IL-6, TNFα, hsCRP as well as the renal function in 130 adult patients with CKD, stratified according to the GFR ( based on the National Kidney Foundation/Kidney Dialysis Outcomes Quality Initiatives) and in 58 hemodialytic (HD) patients.The relationship between FFA level and cardiac geometry incidence in CKD patients was analyzed with logistic regression model.Results The serum level of FFA was significantly higher in CKD patients as compared with that in the healthy controls [(492.63 ± 143.59)vs (302.65 ± 142.18) μ mol/L, P ＜ 0.01], even in the early stage of CKD.The level of FFA increased with the progression of renal dysfunction.In the non-dialytic CKD group, the level of FFA was negatively related to GFR and positively related to the proteinuria (P ＜ 0.05), while in the HD group, it was positively correlated with dialysis duration ( P ＜ 0.05 ).The serum levels of FFA were higher in CKD patients with carotid artery atherosclerosis than those in patients without ( P ＜ 0.05 or ＜ 0.01 ).However, in both groups with impairment of renal function, the levels of FFA were positively correlated with hsCRP, IL-1 β, IL-6,TNFα and TG( all P ＜ 0.05 ).A positive correlation between the level of FFA and the clinical manifestations such as carotid intimal medial thickness (IMT) and AS was also found.A negative correlation was found between the level of FFA and the serum level of albumin and GFR( P ＜ 0.05).Conclusion Serum levels of FFA are significantly higher either in non-dialytic CKD or in HD patients and it is related with hsCRP, IL-1 β, IL-6, TNFα as well as carotid artery atherosclerosis, indicating that FFA is an independent risk factor of AS in CKD.     

左卡尼汀对慢性肾衰竭大鼠心脏的保护作用

目的 观察左卡尼汀对慢性肾衰竭大鼠心脏病理变化的影响,并探讨其心脏保护机制.方法 55只雄性SD大鼠按数字随机法分为假手术组(n=10)、模型组(n=15)、左卡尼汀小剂量组(n=10)、中剂量组(n=10)和大剂量组(n=10).除假手术组外,其余各组大鼠行5/6肾切除术.造模后1周,各左卡尼汀组大鼠每日灌胃给药,剂量分别为300、600、900mg/kg.假手术组和模型组则每日予生理盐水灌胃,总疗程17周.观察大鼠24h尿蛋白量、肾功能、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛( MDA)、白介素6(IL-6)、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)变化.实验结束时,测各组大鼠平均动脉压及心率,并通过心脏超声、全心/体质量比、光镜、透射电镜观察大鼠心脏病理变化.结果 (1)左卡尼汀小、中、大剂量组ATP(μmol/g体质量)(2.35±0.24,3.59±0.28,3.78±0.25)均显著高于模型组(1.61±0.12)(均P＜0.01).(2)心脏超声显示左卡尼汀大剂量组左心室后壁厚度(mm)小于模型组(3.74±0.23比4.18±0.48,P＜ 0.05).(3)左卡尼汀中、大剂量组全心/体质量比值(3.92±0.27,3.65±0.20)均显著低于模型组(3.99±0.27)(P＜ 0.01).(4)光镜下,HE染色显示模型组心肌细胞排列紊乱,心肌细胞肥大;Masson染色显示胶原组织明显增多,部分心肌组织被胶原组织取代,出现心肌间质纤维化.HE染色显示左卡尼汀中、大剂量组心肌细胞排列紊乱;Masson染色显示心肌组织周围胶原纤维增多,心肌间质纤维化,但病变程度和范围均明显减轻.左卡尼汀中、大剂量组心肌病理评分(7.14±1.07,6.13±0.99)均低于模型组(9.88±1.13)(P＜ 0.01).电镜下,模型组可见大片心肌纤维溶解,线粒体增多、肿胀、空泡化,膜断裂、基质加深,为典型的心肌肥厚表现.左卡尼汀治疗组呈剂量依赖性改善病理损害.(5)治疗17周时,左卡尼汀小、中、大剂量组IL-6 (ng/L)(261.86±13.18、240.12±18.70、233.34±36.88比596.64±81.41)和MDA (nmol/L)(15.23±2.01、12.41±0.60、10.97±1.90比21.84±2.71)显著低于模型组;SOD(U/ml)(51.20±6.11、58.51±5.52、60.63±6.94比32.01±5.69)则高于模型组,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).(6)各组大鼠心率差异无统计学意义;模型组和左卡尼汀各组收缩压、舒张压及平均动脉压比较,差异无统计学意义.结论 左卡尼汀可通过改善慢性肾衰竭大鼠的心肌能量代谢、微炎性反应及氧化应激,达到延缓慢性肾衰竭大鼠左心室肥厚、心肌间质纤维化的作用.     

曲美他嗪对慢性肾衰竭大鼠心肌能量代谢及超微结构的影响

目的 观察曲美他嗪(TZM)对慢性肾衰竭大鼠心肌能量代谢及病理结构的影响。 方法 40只雄性SD大鼠行5/6肾切除术,将成模大鼠随机分为手术对照组、曲美他嗪小剂量（3 mg/kg）组、中剂量（6 mg/kg）组和大剂量（9 mg/kg）组,并设假手术组（雄性SD大鼠10只）。各治疗组大鼠每日灌胃给药,假手术组和手术对照组则予生理盐水,持续17周。实验结束时,测量各组大鼠左心室/体质量、全心/体质量比值;监测平均动脉压及心率;观察心脏超声检查和病理形态学改变,并测定尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、三磷酸腺苷（ATP）、二磷酸腺苷（ADP）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子(TNF)α。 结果 （1）曲美他嗪中剂量组、大剂量组左室收缩末内径、左室舒张末期前壁厚度、左室收缩末期前壁厚度、左室舒张末期后壁厚度均显著低于手术对照组（均P < 0.05）。（2）曲美他嗪中剂量组、大剂量组左心室/体质量、全心/体质量均显著低于手术对照组（P < 0.05）。（3）光镜可见手术对照组心肌细胞排列紊乱、肥大,部分心肌纤维化;电镜可见手术对照组心肌组织大片心肌纤维溶解,线粒体增多、肿胀、空泡化,膜断裂。各治疗组心肌病理形态学改变均比手术对照组轻,且随曲美他嗪剂量增大有好转趋势。（4）各组大鼠心率差异无统计学意义,5/6肾切除各组收缩压、舒张压及平均动脉压均显著高于假手术组（P <0.01）,而5/6肾切除各组间收缩压、舒张压及平均动脉压差异均无统计学意义（P > 0.05）。（5）曲美他嗪3个剂量组ATP、ADP均显著高于手术对照组（均P < 0.05）,且大剂量组、中剂量组ATP、ADP均显著高于小剂量组（均P < 0.05）。（6）曲美他嗪大剂量组、中剂量组剂量IL-6、TNF-α、MDA均显著低于手术对照组（均P < 0.05）,而SOD均显著高于手术对照组（均P < 0.05）。 结论 曲美他嗪可以改善慢性肾衰竭大鼠心肌能量代谢、微炎性反应和氧化应激状态,从而防治慢性肾衰竭大鼠心肌细胞纤维化及左心室肥厚。     

肾小球疾病与肾间质损伤

不同病因导致的肾小球疾病多数存在肾小管上皮细胞损伤和间质纤维化,尤其是进展性肾小球疾病均以肾小管间质病变为最终归宿[1,2].     

局灶节段性肾小球硬化患者肾小管上皮细胞白细胞介素13受体表达与组织损伤的关系

目的:FSGS以足细胞损伤为突出特点,但肾小管上皮细胞损伤在这类患者很常见,而且蛋白尿的程度不足以解释其原因.由于足细胞和肾小管上皮细胞分享许多共同的分子,因此我们推测,这可能是导致FSGS状态下足细胞和肾小管上皮细胞同时损伤的分子基础.有关研究显示,IL-13可以通过作用于足细胞膜上的IL-13R,导致足细胞的损伤.本研究对FSGS患者肾小管上皮细胞IL-13R表达和分布情况进行观察,以期对上述问题加以探讨. 方法:选择肾活检明确诊断的特发性FSGS(n=41)患者,并排除继发性因素.对照选取伴大量蛋白尿的IgA肾病(IgAN,n=11)和膜性肾病(MN,n=10)患者.正常对照选择肾移植供体(n=5).FSGS患者小管间质病变分为:"正常"、急性病变、急性+慢性病变、慢性病变.IL-13R和RANTES染色采用间接免疫荧光法.IL-13R表达分布和强度采用评分方法.IL-13R与N-cadherin免疫荧光双标观察IL-13R在小管上皮细胞的分布. 结果:正常对照组近端肾小管上皮细胞表达IL-13R,但分布局限,而且强度弱.疾病对照组仅少数肾小管上皮细胞可见中等量IL-13R表达,但强度较弱.FSGS患者近端肾小管上皮细胞IL-13R表达总评分≥4的比例明显高于正常对照和疾病对照.小管间质‘正常'的患者IL-13R表达总评分均≥ 4,分布于小管的基底和侧面细胞膜.小管间质急性病变患者IL-13R表达总评分≥ 4比例为88.9%,分布于基底和侧面细胞膜.小管间质急性+慢性病变患者IL-13R表达总评分≥ 4比例为50.0%,分布于基底和侧面细胞膜,以基底面为主.小管间质慢性病变患者IL-13R表达很少,IL-13R表达总评分均≤2,主要分布于基底面细胞膜.FSGS患者IL-13R高表达的小管上皮细胞同时表达趋化因子RANTES,而且上皮细胞标志物N-cadherin表达减少. 结论:首次证实人肾活检组织近端小管上皮细胞表达IL-13R.FSGS患者近端小管上皮细胞IL-13R表达的范围和强度高于具有同等程度蛋白尿的IgAN和MN患者.FSGS患者小管IL-13R的表达范围和强度与肾小管病变性质相关.FSGS患者IL-13R的表达增强启动了小管上皮细胞的损伤过程.本研究表明,FSGS患者肾小管上皮细胞IL-13R高表达参与肾小管间质的损伤,而且有助于进一步探讨FSGS患者足细胞与肾小管上皮细胞损伤的共同分子基础.     

蔗糖铁治疗维持性血液透析患者不安腿综合征的临床观察

目的通过观察静脉注射蔗糖铁对维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者不安腿综合征(restless legs syndrome,RLS)评分的变化,探讨蔗糖铁治疗MHD患者RLS的临床疗效。方法①选择在上海市闸北区中心医院血液净化中心透析龄超过3个月的MHD患者40例,经问卷调查确诊有RLS,诊断采用RLS国际研究小组制定的标准并进行评分。②随机分为治疗组20例,对照组20例,治疗组静脉滴注蔗糖铁100mg/次,每周1次,连续用药10周,总量1000mg;对照组不用蔗糖铁以及其他铁剂。③分别观察两组患者在治疗前、治疗后4、8、10周的血红蛋白(Hb)、血清铁(Fe)、血清铁蛋白(SF)、总铁结合力、转铁蛋白饱和度(TSAT)水平的变化,同时观察患者RLS评分及药物不良反应等。结果①两组患者治疗前Hb、Fe、SF、总铁结合力、TSAT无统计学意义(P>0.05)。②治疗组随着治疗时间延长,Fe、SF、TSAT逐渐升高,治疗后4周较治疗前明显上升、且治疗后10周上升更为明显(P<0.05,P<0.01);而总铁结合力较治疗前逐渐降低、治疗后10周下降更为明显(P<0.05,P<0.01);分别与同期对照组比较,有统计学意义(P<0.05,P<0.01);对照组上述指标治疗前后无明显变化(均P>0.05)。③治疗前、治疗后4、8、10周的RLS评分,治疗组和对照组比较:治疗前为[(16.29±10.08]与(15.79±10.42)](P>0.05);第4周为[(14.02±9.18)与(16.03±10.42)](P<0.05);第8周为[(10.94±9.03)与(15.12±9.34)](P<0.01);第10周为[(10.02±8.14)与(14.97±10.13)](P<0.01);④治疗组未发生药物不良反应。结论不安腿综合征(RLS)是MHD患者常见的并发症之一,铁缺乏与RLS的发生发展有关。MHD患者常合并铁缺乏,在补铁治疗后,患者铁贮备明显升高、RLS评分亦明显下降,对治疗RLS取得一定的疗效。     

肾小管上皮细胞白细胞介素13和白细胞介素4受体的表达及其在肾小管损伤中的作用

目的:研究肾小管上皮细胞IL-4受体和IL-13受体的表达及IL-4和IL-13对肾小管上皮细胞形态和功能的影响,并探讨其作用机制. 方法:借助人近端肾小管上皮细胞系(HK2),采用RT-PCR,免疫荧光方法检测HK2上IL-4受体和IL-13受体的表达.免疫荧光方法观察不同浓度IL-4和IL-13干预HK2细胞12～48h后HK2损伤标志物RANTES的变化情况.Western blot方法检测IL-4和IL-13干预HK2细胞后,JAK-STAT 6信号通路的活化以及JAK-STAT 6信号通路特异性抑制剂来氟米特对IL-4和IL-13作用HK2细胞的影响. 结果:(1)RT-PCR和免疫荧光结果显示HK2有IL-4 II型受体和IL-13 I型受体mRNA和蛋白质表达.(2)IL-4和IL-13呈时间-剂量依赖性影响上皮细胞RANTES的表达.100 ng/ml IL-4、50 ng/ml IL-13作用48h对HK2的损伤作用最为明显.正常HK2细胞RANTES呈阴性,100 ng/ml IL-4和50 ng/ml IL-13干预48h后,阳性细胞显著增多.(3)Western blot方法结果显示JAK-STAT6磷酸化水平均在IL-4和IL-13 50 ng/ml作用10 min时开始升高,IL-4 100 ng/ml作用20 min达高峰,IL-13 50 ng/ml 20 min达高峰.JAK-STAT 6信号通路特异性抑制剂来氟米特可阻断JAK-STAT 6信号通路的活化,拮抗IL-4和IL-13诱导的HK2细胞RANTES表达. 结论:(1)本研究首次证实人近端肾小管上皮细胞存在IL-4和IL-13受体的表达.(2)IL-4和IL-13可通过人近端肾小管上皮细胞上的相应受体造成细胞损伤,表现为RANTES表达增加.(3)IL-4和IL-13的上述作用与细胞内JAK-STAT 6信号通路活化密切相关.     

慢性肾脏病患者游离脂肪酸与细胞因子及颈动脉病变的关系

Objective To investigate the serum level of free fatty acid (FFA) and explore its relationship with cytokines and atherosclerosis (AS) in chronic kidney disease (CKD).Methods The serum level of FFA was determined with enzymatic colorimetry.IL-1 β, IL-6 and TNFα were determined with ELISA.High-sensitivity C-reactive protein (hsCRP) was measured with immunoturbidimetry.Prevalence of atherosclerosis was detected with carotid ultrasonography.We evaluated the relationship between serum levels of FFA and IL-1β,IL-6, TNFα, hsCRP as well as the renal function in 130 adult patients with CKD, stratified according to the GFR ( based on the National Kidney Foundation/Kidney Dialysis Outcomes Quality Initiatives) and in 58 hemodialytic (HD) patients.The relationship between FFA level and cardiac geometry incidence in CKD patients was analyzed with logistic regression model.Results The serum level of FFA was significantly higher in CKD patients as compared with that in the healthy controls [(492.63 ± 143.59)vs (302.65 ± 142.18) μ mol/L, P ＜ 0.01], even in the early stage of CKD.The level of FFA increased with the progression of renal dysfunction.In the non-dialytic CKD group, the level of FFA was negatively related to GFR and positively related to the proteinuria (P ＜ 0.05), while in the HD group, it was positively correlated with dialysis duration ( P ＜ 0.05 ).The serum levels of FFA were higher in CKD patients with carotid artery atherosclerosis than those in patients without ( P ＜ 0.05 or ＜ 0.01 ).However, in both groups with impairment of renal function, the levels of FFA were positively correlated with hsCRP, IL-1 β, IL-6,TNFα and TG( all P ＜ 0.05 ).A positive correlation between the level of FFA and the clinical manifestations such as carotid intimal medial thickness (IMT) and AS was also found.A negative correlation was found between the level of FFA and the serum level of albumin and GFR( P ＜ 0.05).Conclusion Serum levels of FFA are significantly higher either in non-dialytic CKD or in HD patients and it is related with hsCRP, IL-1 β, IL-6, TNFα as well as carotid artery atherosclerosis, indicating that FFA is an independent risk factor of AS in CKD.     

有机溶剂肾损害的动物实验研究

目的:利用大鼠吸入有机溶剂的模型考察有机溶剂对肾脏的损害及其特点。方法:采用SD大鼠,放入IVC密闭笼内,吸入混合有机溶剂(汽油、二甲苯和甲醛按2∶2∶1的比例混合)12周,总浓度为12000PPM,每日吸入两次。结果:(1)在吸入有机溶剂5～6周后部分大鼠开始出现蛋白尿,此后缓慢增加,观察至12周时雄性组和雌性组的蛋白尿阳性率分别为43.8%(7/16)和25%(4/16),尿蛋白含量分别为(23.8±2.4)mg/gSCr和(21.2±3.1)mg/gSCr。(2)实验大鼠尿NAG酶在吸入有机溶剂4周时即明显升高,第6周时雄性组和雌性组的尿NAG分别为(36.3±4.5)U/gSCr和(25.2±3.8)U/gSCr,肾组织TUNEL染色可观察到肾小管上皮细胞的凋亡。(3)光镜下观察可见皮质区近端小管上皮细胞刷状缘脱落、扁平,部分小管上皮细胞崩解、脱落至管腔中。部分肾小球可见肾小管返流和轻度的壁层上皮细胞增生。超微结构观察可见多处近端小管上皮细胞刷状缘及胞质脱落,上皮细胞崩解。线粒体变性消失,内膜与外膜剥离。足细胞节段足突融合,个别见足突剥离,胞质可见细小微绒毛化。系膜区、内皮下、上皮侧及基膜均未见电子致密物沉积。(4)免疫荧光染色显示,有机溶剂吸入12周后少数肾小球的Nephrin和Podocin呈节段不连续的颗粒样分布。部分足细胞中Desmin的表达显著增加,表明有机溶剂对足细胞的骨架结构存在损伤作用。结论:大鼠吸入有机溶剂后可出现蛋白尿、显著的肾小管上皮细胞损伤和肾小球足细胞的节段损伤,初步证实有机溶剂导致大鼠的肾损害。有机溶剂对肾小管上皮细胞的损伤明显早于足细胞,对肾小管上皮细胞损伤的程序明显比足细胞严重。     

慢性肾脏病患者血清β2微球蛋白与颈动脉粥样硬化的关系

目的 研究慢性肾脏病（CKD）患者血清β2微球蛋白（β2MG）水平的变化及与颈动脉粥样硬化的关系.方法 对168例CKD患者（非透析治疗120例,血液透析48例）的临床及实验室资料作回顾性研究,采用电化学发光免疫法（ECLIA）检测血清β2MG水平,应用颈动脉超声检查颈动脉病变的程度,分析β2MG水平与颈动脉粥样硬化的关系.结果 CKD患者无论透析与否,β2MG水平均较健康对照组显著升高[（18.6±2.91）比（2.18±0.49） μg/mL,P＜0.01],在非透析CKD患者中,随着肾小球滤过率（GFR）的逐渐下降,血β2MG水平也逐渐升高,各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）,且CKD5D期β2MG水平较CKD5期更高（P＜0.05）;CKD患者颈动脉内膜中层厚度（IMT）[（0.71±0.18）比（0.67±0.21）mm,P＜0.01]及斑块形成（28.7％比12.0％,P＜0.01）、颈动脉硬化的患病率（32.9％比12.0％,P＜0.01）较健康对照组均显著升高,CKD5D期上述指标较CKD5期均更高（均P＜0.05）;直线相关分析显示,血β2MG水平与hsCRP、TG、Lp （a）、血磷、iPTH、24h尿蛋白定量、透析龄及IMT、斑块形成、颈动脉硬化的患病率呈正相关（P ＜0.05或P＜0.01）,而与GFR、血白蛋白（SA1b）、血红蛋白（Hb）、血钙呈负相关（P ＜0.05或P＜0.01）;多因素逐步回归分析显示,β2MG、hsCRP和年龄是CKD患者颈动脉病变的独立危险因素. 结论 各期CKD患者β2MG水平均显著升高,且与hsCRP及颈动脉病变相关,血β2MG升高可能是CKD患者并发动脉粥样硬化的危险因素之一.