血必净联合抗生素对脓毒症大鼠降钙素原、白介素-6mRNA表达水平的影响

血必净注射液是由我国中西医结合急救医学奠基人王今达教授以古方血府逐瘀汤为基础,根据菌、毒、炎并治理论研制而成的新型复方制剂[1-2],方以红花、赤芍、川芎、丹参、当归等中药组成,临床主要用于治疗全身炎症反应综合征、脓毒症和多器官功能综合征等.本研究采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症大鼠模型,观察脓毒症大鼠血中降钙素原（PCT）、白介素-6（IL-6）的mRNA的表达情况,并使用中药注射剂血必净对其进行干预,观察血必净注射液对其血PCT、IL-6的mRNA表达的影响,以及血必净与抗生素联合应用的优势,探讨血必净抗炎作用的可能机制.     

一罕见成骨不全Ⅳ型的基因诊断

目的对一疑似成骨不全Ⅳ型或其他类型的患儿实施基因诊断,以揭示患儿发病及频繁骨折的内在原因,为今后实施对症治疗和产前基因诊断创造必要的前提条件。方法对经症状、体征观察和X线检查初诊为成骨不全Ⅳ型或其他类型的患儿,在抽取外周血制备DNA模板后,采用PCR、DNA直接测序法,对患儿的COL1A1基因进行突变检测,然后对所发现的突变进行分析和鉴定。结果在COL1A1基因的编码区内发现一典型的错义突变(c.823G>C1/p.G275R),经查HGMD数据库证实为成骨不全Ⅳ型的致病性突变。结论先证者为一罕见的成骨不全Ⅳ型患儿,所发现的p.G275R突变为中国人群首次报道的病理性突变。     

骨髓相关蛋白对急性冠状动脉综合征的早期诊断价值

目的探讨骨髓相关蛋白对急性冠状动脉综合征的早期诊断价值。方法选取因胸痛发作3 h内就诊患者81例,行冠状动脉造影,根据临床最终诊断,将患者分为急性冠状动脉综合征组和非缺血性胸痛组。分别在胸痛0～3 h、3～6 h、6～12 h采血检测骨髓相关蛋白,比较不同时段、不同取样途径骨髓相关蛋白变化规律。结果胸痛0～3 h、3～6 h和6～12 h骨髓相关蛋白两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。冠状动脉血和同期外周静脉血骨髓相关蛋白比较差异有统计学意义(P<0.05)。绘制0～6 h骨髓相关蛋白受试者作业特征曲线,最适cut-off值为8.5 mg/L,受试者作业特征曲线下面积为0.898(95%CI 0.815～0.981),灵敏度为60.7%,特异度为95.0%。结论骨髓相关蛋白对急性冠状动脉综合征诊断具有较高的灵敏度,可作为诊断急性冠状动脉综合征的早期生化标志物。     

中国人黏多糖贮积症ⅣA型家系GALNS基因新突变的鉴定

目的 研究黏多糖贮积症ⅣA型(mucopolysaccharidosis type ⅣA,MPS ⅣA)患者发病的分子遗传学机制,揭示其基因型与表现型的相互关系,为产前基因诊断等创造必要的前提条件.方法 采用尿糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAGs)定性检测法对疑似MPS ⅣA型的先证者进行初诊,然后采用PCR及扩增产物直接测序法对先证者及其家庭成员进行突变检测.在检出GALNS基因c.1567T＞G新突变后,先后建立XspⅠ酶切鉴定法和扩增阻碍突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)快速特异鉴定法,对随机采集的110名正常对照与先证者及其家庭成员的GALNS基因第14外显子进行序列分析,同时采用生物信息学方法对蛋白质二级、三级结构进行预测,以及直接测定患儿GALNS酶活性的方法,对该新突变进行致病性鉴定.结果 先证者尿检呈弱阳性GAGs(±),其GALNS基因第14外显子内存在杂合的c.1567T＞G终止密码突变,第4外显子存在杂合的c.374C＞T错义突变,为两种突变的复合杂合子.其妹突变类型与先证者完全相同,其母仅在第14外显子存在杂合的终止密码突变,为该病的携带者,其父仅在第4外显子存在杂合的错义突变,也为杂合子;第14外显子的PCR产物经XspⅠ酶切后,正常对照组切出28 bp、120 bp、399 bp 3条带,而患者和携带者的母亲均切出28 bp、120 bp、148 bp和399 bp 4条带;用ARMS特异引物扩增后,正常对照组均扩增阴性,而患者及携带者均扩增阳性;蛋白质二级、三级结构预测结果显示:c.1567T＞G变异导致终止密码(TAG)突变为谷氨酸(GAG),使多肽链延长了92个氨基酸残基,导致蛋白质二、三级结构发生明显改变,而正常对照无此变化.酶活性测定的结果显示:患者的GALNS酶活性仅为8.3 nmol/17 h/mg pr,明显低于正常值(正常参考值为41.9～92.1 nmol/17h/mg pr).结论 c.1567T＞G变异是一种新的致病性突变,是引起该家系患儿发病的根本原因.

Abstract：

Objective To study the molecular genetic mechanism of mucopolysaccharidosis type ⅣA(MPS ⅣA), and reveal the relationship between the genotype and phenotype, and provide a basis for prenatal gene diagnosis in the future. Methods A preliminary diagnosis was made by qualitative detection of urinary glycosaminoglycans of the suspected MPS ⅣA proband. Then, mutation detection was performed on the proband and her family members with PCR and direct sequencing of the PCR products. After a novel c.1567T＞G mutation was detected,XspⅠrestriction enzyme digestion and amplification refractory mutation system(ARMS) fast specific identification were established to analyze the sequences of exon 14 in GALNS gene, including 110 randomly selected healthy controls, the proband and other pedigree members. At the same time, bioinformatic approaches for protein secondary, tertiary structure prediction were applied to identify the novel pathologic mutation. Results The proband's urine GAGs test was a weak positive(±),and a c.1567T＞G heterozygous termination codon mutation in exon 14 and a c.374C＞T heterozygous missense mutation in exon 4 were found. The proband was compound heterozygous of the two mutations, so was her younger sister. Her mother was a carrier with only a c.1567T＞G heterozygous mutation in exon 14. Her father had a heterozygous mutation of c.374C>T in exon 4. After XspⅠrestriction enzyme digestion, healthy controls had three bands including 28 bp, 120 bp and 399 bp, while the proband and her mother had four bands consisting of 28 bp, 120 bp,148 bp and 399 bp. For amplification by ARMS specific primers, it was negative for the controls,while it was positive for the proband and the carrier. The results of protein secondary and tertiary structure prediction showed that the c.1567T＞G mutation located in the stop codon, resulted in stop codon (TAG) changing to glutamic acid (GAG), with the peptide chain extending 92 amino acid residues, and secondary and tertiary protein structure change, which were not found in the controls. The result of enzyme assay showed that the activity of GALNS enzyme in the affected child was 8.3 nmol/17h/mg pr, which was obviously lower than the normal value (the normal range is 41.9-92.1 nmol/17h/mg pr). Conclusion These results illustrate that the c.1567 T＞G is a novel pathologic mutation, which is the main cause of the disease in this family.     

缺血修饰白蛋白与急性冠状动脉综合征关系的研究进展

急性冠状动脉综合征(ACS)是常见且病死率较高的心血管急症。传统的血液中生化标志物在对ACS的早期诊断和预后评价等临床应用中存在诸多局限。作为新兴的血液中生化标志物,缺血修饰白蛋白(IMA)应用于ACS测定心肌损伤及危险分层。现对IMA的概述、形成、生物学特性及其与ACS的关系(包括诊断、治疗及预后)的最新研究进展和临床应用予以综述。     

生化标志物联合检测对急性冠脉综合征早期诊断的意义

目的:探讨生化标志物联合检测在急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)的早期诊断价值。方法:因胸痛发作3 h内就诊患者分为ACS组和非缺血性胸痛(non-ischemic chest pain,NICP)组,在胸痛0～3 h和3～6 h分别抽血采用ELISA等方法检测骨髓相关蛋白(Myeloid-re-lated protein,MRP)、妊娠相关蛋白A(pregnancy-associatedplasma protein A,PAPP-A)、肌酸激酶同工酶MB(creatine ki-nase-MB,CK-MB)和肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)四项指标。评价MRP与PAPP-A、CK-MB、cTnI联合检测在ACS的早期诊断价值。结果:MRP诊断发病3 h内ACS的灵敏度为57.4%,高于PAPP-A(8.2%)、CK-MB(21.3%)和cTnI(18.0%)。四项指标联合诊断ACS的灵敏度提高到75.4%。MRP诊断发病3～6 h ACS的灵敏度为78.7%,也高于PAPP-A(39.3%)、CK-MB(49.2%)和cTnI(45.9%)。四项指标联合诊断ACS的灵敏度提高到96.7%。结论:MRP对ACS诊断的灵敏度高于PAPP-A、CK-MB、cTnI,可作为诊断ACS的早期生化标志物。四项指标联合检测可提高ACS的早期诊断。     

致死性侏儒症p.R248C突变热点的快速检测和三例TD-Ⅰ型高危胎儿的快速产前诊断

目的 针对致死性侏儒症Ⅰ型(thanatophoric dysplasia type Ⅰ,TD-Ⅰ)FGFR3基因的突变热点“p.R248C”,建立快速特异的酶切鉴定法(restriction endonuelease testing,RE)和扩增受阻突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)/RE法,并应用于后续3例疑似TD-Ⅰ高危胎儿的快速产前诊断,以及时防止患胎出生,同时为今后的胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)打下良好基础.方法 首先,针对突变热点p.R248C突变前后的序列特点,选择合适的内切酶“AfeI”,建立酶切鉴定法.其次,没计双错配碱基特异引物结合Apa LI酶切,建立ARMS/RE双重特异鉴定法.对阴性和阳性结果均再用普通引物扩、测的结果进行验证. 结果 用AfeI酶切FGFR3基因exons (6-7)普通引物的PCR产物(535 bp),正常对照及非p.R248C突变的TD病例均能被切成255 bp和280 bp 2个片段,而胎1～胎3均切出255 bp、280 bp和535 bp 3个片段.用特异引物E7(p.R248C)扩增,正常对照和非p.R248C突变的TD病例均扩增阴性,无法进一步做酶切鉴定;而p.R248C突变均扩增阳性,当再用Apa LI酶切PCR产物(365 bp)时,胎1～胎3均切出22 bp和343 bp 2个片段.通过引物扩、测结果显示:胎1～胎3均是p.R248C杂合突变. 结论 该法快速特异、准确可靠,可用于p.R248C突变热点的快速检测及含该突变高危胎儿的快速产前诊断.该法还可用于含p.R248C突变TD-Ⅰ型家系的PGD.胎1～胎3都是TD-Ⅰ患胎,建议尽早终止妊娠.     

一例成骨不全Ⅱ型高危胎儿的产前基因诊断

目的对广东一疑似致死性侏儒症或成骨不全Ⅱ型的高危胎儿实施产前基因诊断,以阐明胎儿骨发育异常的真实病因,及时预防患胎出生。方法对经超声检查初诊为致死性侏儒症或成骨不全、已孕25周的高危胎儿,在抽取脐血制备DNA模板后,采用PCR-DNA直接测序法,分别对胎儿的FGFR3基因和COL1A1基因进行突变检测,然后对所发现的突变进行分析和鉴定。结果 FGFR3基因未发现病理性突变,而COL1A1基因发现一典型的杂合错义突变(c.3065G>T,p.G1022V),经查HGMD数据库证实为成骨不全Ⅱ型的致病性突变。结论 (1)此高危胎儿为成骨不全Ⅱ型患胎,应及时终止妊娠(胎儿已经引产,经复查证实与产前基因诊断结果完全一致)。(2)在超声初诊基础上,采用产前基因诊断可快速、有效对高危胎儿做出确诊,为出生缺陷的预防提供技术保障。     

一例Morquio A综合征高危胎儿的快速产前基因诊断

目的 快速、准确地对Morquio A综合征[又称黏多糖贮积症Ⅳ A型(mucopolysaccharidosis typeⅣ A,MPSⅣ A)]高危胎儿做出产前基因诊断,从而及时而高效地防止患儿的出生,以最大程度减少流产对母体的伤害.同时,为今后的植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)创造必要的前提条件.方法 在明确先证者病因及其父母基因型的基础上,应用已建立的突变特异性扩增系统(amplification refractory mutation system,ARMS)直接鉴定法、变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)快速筛检法,结合DNA序列分析法,对1例已孕10周的MPSⅣA高危胎儿的GALNS基因相应突变位点进行快速检测和鉴定.结果 胎儿的DHPLC筛检结果显示第1外显子和第10外显子的PCR产物都有异常双峰,而相应正常对照均只有正常单峰;用GALNS 基因ARMS特异引物扩增的结果显示:胎儿有相应的特异扩增产物,而正常对照无;普通引物扩增产物的测序结果显示:胎儿GALNS基因的第1外显子和第10外显子分别获得了父源性的c.106-111 del(p.L36-L37 del)杂合缺失突变和母源性的c.1097 T＞C(p.L366P)杂合错义突变,为两种突变的复合杂合子.结论 该高危胎儿是一带有与先证者完全相同基因型的Morquio A综合征病胎,应尽早终止妊娠;ARMS法、DHPLC法结合DNA序列分析法是快速、准确产前基因诊断MPS Ⅳ A高危胎儿的有效方法,特别适用于已明确病因的高危胎儿的早期诊断;其中,ARMS法和DHPLC法还特别适用于大批量正常对照组的快速鉴别,对于新突变的致病性鉴定起着重要的作用.     

一罕见成骨不全IV型的基因诊断

目的对一疑似成骨不全IV型或其他类型的患儿实施基因诊断,以揭示患儿发病及频繁骨折的内在原因,为今后实施对症治疗和产前基因诊断创造必要的前提条件。方法对经症状、体征观察和x线检查初诊为成骨不全Iv型或其他类型的患儿,在抽取外周血制备DNA模板后,采用PCR、DNA直接测序法,对患儿的COLlAl基因进行突变检测,然后对所发现的突变进行分析和鉴定。结果在COLlAl基因的编码区内发现一典型的错义突变（c．823G〉C1／p．G275R）,经查HGMD数据库证实为成骨不全Iv型的致病性突变。结论先证者为一罕见的成骨不全IV型患儿,所发现的p．G275R突变为中国人群首次报道的病理性突变。