超抗原活化淋巴细胞对喉癌Hep-2细胞系的抑制作用

目的 观察超抗原活化淋巴细胞后对喉癌细胞的抑制作用.方法 金黄色葡萄球菌肠毒素A与人淋巴细胞混合培养24 h,激活淋巴细胞,再加入人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞混合培养72 h,通过MTT法观察喉癌细胞的抑制情况.结果 ①实验组金黄色葡萄球菌肠毒素A激活淋巴细胞后对人喉鳞癌Hep-2细胞的生长有明显的抑制作用,抑制率是42.68%,高于对照组4.82%(P＜0.01).②抑制作用呈现时间的依赖性.③金黄色葡萄球菌肠毒素A在不同浓度时对喉癌细胞的生长均有抑制作用,特别在浓度是1 μg/ml、72 h培养时抑制率最高,达82.83%.结论 超抗原活化淋巴细胞后明显抑制喉癌细胞的生长.     

小分子干扰RNA转染猪血管内皮细胞优化体系的建立

目的 探索建立高效、稳定的小分子干扰RNA(SiRNA)转染方案并建立优化的猪血管内皮细胞RNA干扰(RNAi)转染体系.方法 针对猪α1,3-半乳糖苷转移酶(α1,3-GT)基因合成数对SiRNA分子,运用不同转染体系(DOSPA、RiboJuice及Lipofectamine 2000)转染永生化猪血管内皮细胞系(PED).分别应用流式细胞术、台盼蓝拒染试验及乳酸脱氢酶释放试验评价干扰α1,3-GT作用下PED的α1,3-半乳糖残基(α-Gal)表达情况以及SiRNA-脂质体转染对PED生长的影响.结果 PED能有效发生特异性RNA干扰现象,且呈明显的剂量依赖性特征.SiRNA-1与脂质体RiboJuice在12 nmol/L∶6 μl时,干扰效果最佳(67.3%～89.5%),整体量效优于DOSPA及Lipofectamine 2000转染体系.靶细胞转染SiRNA-1后48 h时的α-Gal相对表达水平为10.5%,而SiRNA-2转染组则未见明显干扰现象.脂质体转染体系在转染后6～12 h对靶细胞生长稍有影响,24 h后细胞活性逐渐恢复.结论 猪血管内皮细胞存在RNA干扰机制,RiboJuice转染体系是一种高效、低毒的SiRNA转染方式,为研究RNAi在抑制异种排斥反应中的应用奠定了基础.     

COVID-19流行期间武汉某医院皮肤科门诊患者流行病学特点及疾病谱分析

【摘要】 目的 了解COVID-19流行期间皮肤科门诊患者流行病学特点及疾病谱。方法 回顾性比较COVID-19流行期间（2020年1月23日至2020年4月15日）及2019年同期武汉市第一医院皮肤科门诊人次、性别、年龄以及病种等。计数资料采用Pearson χ2检验统计分析。结果 COVID-19流行期间,本院皮肤科门诊量大幅下降,日均门诊量（236人次/d）仅为2019年同期（2 678人次/d）的8.81%;男女患者比值由2019年的1∶1.37逆转为2020年的1.16∶1;0 ~ 6岁、7 ~ 12岁、13 ~ 17岁、18 ~ 45岁患者比例较2019年下降（均P＜0.001）,46 ~ 69岁及＞69岁患者比例上升（均P＜0.001）。COVID-19疫情期间皮肤科门诊病种171种,较2019年同期（442种）减少;变态反应性皮肤病、红斑丘疹鳞屑性皮肤病、病毒感染性皮肤病及细菌感染性皮肤病患者就诊人次占比较2019年同期增多（均P＜0.001）,皮脂腺及汗腺疾病、色素性皮肤病及物理性皮肤病患者占比减少（均P＜0.001）。结论 与2019年同期相比,COVID-19流行期间皮肤科门诊患者数量、性别比、年龄分布、病种等均出现较大变化,本研究为皮肤科医务人员今后应对各种疫情流行、自然灾害提供了参考数据。     

国内首报落叶型天疱疮转变为大疱性类天疱疮1例

患者女,58岁,头颈、胸背起皮疹伴痒痛20 d,于2010年2月入院,皮疹表现为红斑基础上浅表糜烂,尼氏征阳性。组织病理检查示颗粒细胞层及棘细胞层上方裂隙,并可见游离角化不良细胞,直接免疫荧光（DIF）示棘细胞间IgG和C3沉积,诊断为落叶型天疱疮,予以曲安西龙24 mg/d,雷公藤多苷片60 mg/d,烟酰胺300 ...     

分娩和喂养方式对特应性皮炎婴儿肠道菌群的影响

【摘要】 目的 探讨不同分娩及喂养方式对特应性皮炎（AD）婴儿肠道菌群的影响。方法 收集2019年7月至2020年12月在武汉市第一医院皮肤科就诊的33例1 ~ 12月龄AD婴儿,以30例健康婴儿为对照,AD患儿与健康对照根据不同的分娩方式和喂养方式分组。取婴儿粪便提取总DNA,PCR扩增细菌的16S rRNA基因V1 ~ V9区,应用PacBio Sequel测序仪进行高通量测序,采用Wilcoxon秩和检验比较各组菌群在属、种水平上的构成差异,选择差异菌群相对丰度与嗜酸性粒细胞计数及AD皮疹严重程度（SCORAD）评分做相关性分析。结果 顺产对照组（11例）、剖宫产对照组（19例）、顺产AD组（11例）、剖宫产AD组（22例）中相对丰度较高的5个菌属分别为双歧杆菌属、拟杆菌属、韦荣球菌属、链球菌属、大肠杆菌属。配方奶粉喂养对照组（7例）、母乳喂养对照组（12例）、混合喂养对照组（11例）、配方奶粉喂养AD组（12例）、母乳喂养AD组（8例）、混合喂养AD组（13例）中相对丰度较高的5个菌属分为双歧杆菌属、拟杆菌属、梭状芽孢杆菌属、韦荣球菌属、大肠杆菌属。线性判别分析（LEfSe）显示,不同分娩方式对照组和AD组间未见显著差异性菌群;而在不同喂养方式AD组和对照组中,配方奶粉喂养AD组阿克曼菌属、嗜黏蛋白阿克曼菌分别为属水平（LDA值 = 4.78）和种水平（LDA值 = 4.91）差异性最大的菌群。配方奶粉喂养AD组婴儿肠道阿克曼菌属和嗜黏蛋白阿克曼菌相对丰度（数值相等,均为9.60% ± 0.72%）均高于配方奶粉喂养对照组（均为2.50% ± 0.83%,Z = 1.66,P = 0.048）、混合喂养AD组（丰度值均为0,Z = 2.26,P = 0.012）及母乳喂养AD组（丰度值均为0,Z = 1.85,P = 0.032）。AD患儿中肠道阿克曼菌属及嗜黏蛋白阿克曼菌的相对丰度与SCORAD评分均呈正相关（ρ = 0.384、0.387,均P < 0.05）。结论 不同分娩方式对AD及健康婴儿肠道菌群影响无显著差异,配方奶粉喂养AD患儿肠道阿克曼菌属和嗜黏蛋白阿克曼菌相对丰度升高,可能参与AD的发病。     

原发性醛固酮增多症诊断性试验在醛固酮瘤诊断中的临床应用与评价

目的 评价原发性醛固酮增多症的诊断性试验的临床应用价值,探讨临床诊断醛固酮瘤的最佳指标及其切点值。方法 回顾性收集167例高血压患者的临床资料,分为醛固酮瘤组（93例）、原发性高血压组（74例）,并比较两组间临床特征的差异。对卧位醛固酮,盐水负荷试验、卡托普利试验后醛固酮绝对值和下降率5项指标进行受试者工作特征（ROC）曲线绘制并比较其曲线下面积（AUC）。结果 与原发性高血压组比较,醛固酮瘤组卧位醛固酮水平更高,高血压3级患者的比例更高,血钾均值更低,体位改变和盐水负荷后醛固酮变化率更小（P<0.05）。卡托普利试验后醛固酮下降率两组间差异无统计学意义。于167例高血压患者中诊断醛固酮瘤,卧位醛固酮的AUC为0.975,盐水负荷试验后醛固酮绝对值和下降率的AUC为0.984和 0.680（P<0.001）,卡托普利试验后醛固酮绝对值和下降率的AUC为0.949和0.538（P<0.001）。以卧位醛固酮/肾素比值（ARR）>30且卧位醛固酮>17.8 ng/dL为初筛阳性条件时,敏感性96.8%,特异性90.5%。以14.59 ng/dL为盐水负荷试验后醛固酮切点值时,诊断醛固酮瘤的敏感性为90.2%、特异性为97.3%。以19.11 ng/dL为卡托普利试验后醛固酮切点值时,敏感性为88.8%、特异性为95.9%。结论 以卧位ARR>30加卧位醛固酮>17.8 ng/dL为初筛阳性条件,具有较高的敏感性和特异性。盐水负荷和卡托普利试验后醛固酮水平绝对值是确诊醛固酮瘤更合理有效的指标。     

14例儿童色素减退型蕈样肉芽肿诊疗分析

回顾性分析2015年7月至2020年7月在武汉市第一医院皮肤科经临床和病理确诊的14例儿童色素减退型蕈样肉芽肿(HMF)临床、影像、病理、治疗及随访资料。14例患儿中男5例，女9例。诊断年龄4～13岁，发病年龄3～12岁，病程9个月～7年。皮损表现为大小不等、不规则形或类圆形，边界欠清晰的色素减退斑，局部融合。皮肤镜下见色素减退呈波点状、斑马样和网格状模式，血管呈点状、精子样、短细线状和星状血管结构模式。反射式共聚焦显微镜(RCM)下色素减退斑均表现为基底层色素轻度减退，未见明显色素缺失，真表皮交界处及真皮浅层可见较多高折光异形细胞。皮损组织病理示棘层下部和基底层可见异形淋巴细胞浸润，核深染，部分扭曲呈脑回状，部分聚集呈Pautrier微脓疡。免疫组化：CD3均阳性，CD20均阴性，4例仅CD8阳性，10例CD8、CD4均阳性。12例患儿采用NB-UVB照射治疗，8例完全消退，4例部分消退，3例复发再次照射后完全消退。2例分别给予糠酸莫米松和他克莫司治疗，6个月和8个月后消退面积>80%。本研究显示皮肤影像有一定辅助诊断价值，NB-UVB治疗HMF安全有效，HMF预后一般良好，但...     

扁平苔藓皮损中microRNA-155的表达及与Th17/Treg失衡的相关性

目的:检测microRNA-155(miR-155)在皮肤扁平苔藓(CLP)中的表达,明确其与辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)失衡的相关性。方法:应用TaqMan探针法检测33例CLP患者和25名健康对照者外周血中miR-155,孤儿受体-γt(RORγt),白细胞介素-17A(IL-17A),叉状头/翼状螺旋转录因子P3(Foxp3)和IL-10的基因表达水平。结果:CLP中miR-155,RORγt、Foxp3和IL-17A的表达较对照组显著升高,而IL-10的表达显著降低(均P0.05);CLP组中,miR-155分别与RORγt、Foxp3和IL-17A的含量显著正相关(均P0.001),与IL-10的含量无明显相关性(P0.05)。结论:CLP中的miR-155过表达可能与Th17/Treg失衡有关。     

猪睾丸Sertoli细胞的分离、培养及其免疫豁免相关细胞因子的检测

目的 探讨猪睾丸Sertoli细胞分离、培养的方法 ,并对其体外培养的状态及免疫豁免相关细胞因子的表达进行检测,为Sertoli细胞用于移植提供依据.方法 无菌条件下取10～15日龄的湖北白猪睾丸,剥离睾丸白膜及表面血管,剪碎后用2.0 g/L V型胶原酶以及2.5 g/L胰蛋白酶和0.5 g/L DNaseI消化(两步法)分离Sertoli细胞,于37℃、含体积分数为5%CO<,2>的培养箱中培养.采用倒置相差显微镜观察细胞形态,透射电镜进行超微结构鉴定,流式细胞仪检测细胞体外活率.逆转录聚合酶链反应检测Sertoli细胞sox9、FasL、转化生长因子β(TGF-β)及Clusterin的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞的活性.结果 猪睾丸经分离、培养,所获得的Sertoli细胞纯度达90%以上,培养后的细胞凋亡率为(2.61±0.96)%,死亡率为(2.12±0.74)%;培养的Sertoli细胞稳定表达sox9、TGF-β、Clusterin,而FasL表达较弱.体外培养的Sertoli细胞可以保持良好活性达21 d.结论 采用V型胶原酶以及胰蛋白酶和DNaseI两步法消化分离可获得大量高纯度的Sertoli细胞,该细胞在培养过程中能够稳定表达FasL、TGF-β和Clusterin分子.