生长激素受体及其亚型与糖尿病及其并发症的关系

在糖尿病患者及糖尿病动物模型中均存在生长激素受体的异常。作为哺乳动物体内生长激素的主要受体,可活化信号转导、促前脂肪细胞分化等,生长激素受体活性和(或)数量的变化对生长激素的功能产生明显的影响。现对生长激素受体的分子结构、组织分布和功能,以及生长激素受体及其亚型与糖尿病及其并发症之间的相互影响进行综述。     

人KIAA1199蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定

目的 KIAA1199是一种功能未知的胞浆蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础。方法采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pMAL-C2X和pGEX-5X-1原核表达载体中。经IPTG诱导后,重组质粒pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KIAA1199,分别表达含麦芽糖结合蛋白(MBP)的MBP-KIAA1199融合蛋白和含重组谷胱甘肽转移酶(GST)的融合蛋白GST-KIAA1199。其中,MBP-KIAA1199融合蛋白经纯化后,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体;GST-KIAA1199融合蛋白用于检测抗体特异性。此后应用ELISA及Westernblot方法鉴定该抗体。结果 pMAL-C2X/KIAA1199和pGEX-5X-1/KI-AA1199两个重组质粒构建成功,并获得了高效价的特异性多克隆抗体。结论成功制备了KIAA1199抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础。     

小鼠OC-STAMP蛋白表达、纯化、抗体制备及鉴定

目的 OC-STAMP蛋白是一种功能尚不明确的六次跨膜蛋白,通过制备多克隆抗体来为进一步研究其功能奠定基础.方法 采用PCR技术扩增出目的基因,将其克隆到pGEX-4T-1原核表达载体中.经IPTG诱导后,重组质粒pGEX-4T-1/OC-STAMP表达含重组谷胱甘肽转移酶（GST）的融合蛋白GST-OC-STAMP.GST-OC-STAMP融合蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体.此后应用ELISA及Western blot方法鉴定该抗体.结果 pGEX-4T-1/OC-STAMP重组质粒构建成功,并通过原核表达获得达到免疫要求的融合蛋白.免疫所得抗体血清经间接ELISA法、Western blot检测,确定获得了高效价的小鼠OC-STAMP多克隆抗体.结论 成功制备了小鼠OC-STAMP抗体,为进一步研究基因功能奠定了基础.     

内质网应激对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白Ufm1表达的影响

目的 探讨内质网应激(ERS)对巨噬细胞类泛素折叠修饰蛋白(Ufm1)表达的影响.方法 制备搪尿病模型小鼠(db/db鼠,糖尿病组,n=6)和同窝野生型(WT) C57小鼠(对照组,n=6)的原代腹腔巨噬细胞,采用Real-Time PCR技术检测ERS相关分子( GRP78、XBP1)及Ufm1 mRNA的表达.分别用8μg/mL衣霉素(TM)、0.5 μmol毒胡萝卜素(TG)和0.8 μmol TG诱导小鼠-单核巨噬细胞系RAW264.7,采用Real-Time PCR技术检测GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达,采用Western blotting法检测ERS相关因子(p-eIf2α、eIf2α、CHOP)及Ufm1蛋白的表达.结果 糖尿病组小鼠腹腔巨噬细胞GRP78、XBP1和Ufm1 mRNA的表达量均显著高于对照组(均P ＜0.001).经TM或TG诱导的RAW264.7细胞中Ufm1 mRNA和蛋白的表达量均明显高于阴性对照细胞(P＜0.05).结论 糖尿病小鼠腹腔巨噬细胞中ERS相关因子及Ufm1的表达同时升高.体外诱导巨噬细胞株ERS能导致Ufml的表达升高;提示Ufm1可能部分通过ERS途径影响巨噬细胞功能而参与糖尿病动脉粥样硬化过程.