PDECGF-siRNA诱导膀胱癌细胞凋亡机制的探讨

目的 探讨RNA干扰技术沉默血小板源性内皮生长因子基因(platelet-derived endothelial cell growth factor, PDECGF)表达诱导人膀胱癌细胞凋亡的机制.方法 针对人PDECGF mRNA序列设计合成编码干扰RNA (siRNA) 的DNA模板, siRNA;构建含RNA聚合酶启动子Ⅲ转录载体pRNAT-U6/Neo并能形成发夹结构小干扰RNA(siRNA)的psiPDECGF质粒;用其转染人膀胱癌T24细胞株,采用RT-PCR、Western 印迹法观察转染前后PDECGF基因及相关基因表达变化,采用凋亡DNA琼脂糖凝胶电泳及吖啶橙/溴化乙啶染色法观察细胞凋亡.结果 显示PDECGF siRNA对膀胱癌T24细胞中PDECGF基因表达产生明显抑制作用;转染psiPDECGF-2细胞组PDECGF mRNA水平明显降低,上述重组质粒可诱导T24细胞凋亡,同时caspase-3、p53蛋白水平明显增高.结论 证实psiPDECGF-2可抑制PDECGF在T24细胞的表达,诱导肿瘤细胞凋亡.其机制与caspase-3、p53蛋白水平表达增高有关.     

PDECGF特异性RNA抑制片段诱导裸鼠膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 利用RNA干扰技术在裸鼠膀胱癌动物模型中通过抑制靶向沉默血小板源性内皮生长因子基因(PDECGF)的表达,探讨其在活体动物肿瘤组织中的作用.方法 将psiPDECGF-1及-2稳定转染的阳性T24细胞株及其他对照组直接接种于裸鼠皮下,观察肿瘤细胞生长及成瘤情况、测定肿瘤体积的变化;免疫组化检查PDECGF蛋白表达;TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 裸鼠体内成瘤实验发现siRNA2组第21天时成瘤率只有50%,而其他各组成瘤率为100%.siRNA2组生长速度明显慢于其他3组,siRNA2组不仅成瘤延迟,且生长速度明显慢于其他3组(P＜0.01).免疫组化证实siRNA2组肿瘤组织PDECGF 蛋白表达最低; TUNEL检测siRNA2组细胞凋亡数明显多于其他3组 (P＜0.05).结论 PDECGF siRNA载体稳定转染细胞株体内实验可见膀胱癌细胞成瘤率降低,成瘤延迟及肿瘤生长速度减慢,癌细胞凋亡增多.PDECGF siRNA在裸鼠体内依然对膀胱癌细胞有明显抑制作用.     

骨髓间充质干细胞对糖尿病大鼠疗效观察

目的 体外诱导骨髓问充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)分化为胰岛样细胞,用于干预治疗糖尿病大鼠.方法 取周龄大鼠骨髓细胞,进行MSC培养纯化扩增,用bFGF、胰岛素等培养体系诱导MSC向胰岛细胞转化;双硫腙染色鉴定胰岛样细胞.使用链脲菌素(Streptozotocin,STZ)制作糖尿病大鼠模型,将诱导分化的胰岛样细胞移植至糖尿病模型大鼠,观察干预治疗效果.结果 体外诱导MSCs由长梭形变成多角形并逐渐聚集成圆形,双硫腙染色后细胞团成亮红色,表明为胰岛样细胞.糖尿病模型大鼠移植诱导分化胰岛样细胞1周后,多饮、多尿症状减轻,10 d后,血糖值由(21.352±3.150)mmol/L降低为(14.604±3.236)mmol/L,与对照组(22.256±4.051)mmol/L比较,差异无统计学意义(P>0.05);尿糖值由(18.00±1.00)g/L降低为(8.50±0.25)g/L,与对照组(20.00±0.18)g/L比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨髓间充质于细胞可在体外诱导分化为胰岛样细胞;骨髓间充质干细胞诱导分化的胰岛样细胞可以降低糖尿病大鼠血糖、尿糖值水平,可能具有治疗糖尿病作用.     

基于ICD-10-PCS和ICD-11模式的临床手术名称及分级标准的研究

目的：研究制定临床手术名称字典库和手术分级标准的方法和路径,保障医疗技术临床应用质量和安全。方法：以ICD-9-CM-3、医学名词术语集和相关诊疗技术临床应用管理规范为基础,结合临床科室实际确定临床手术名称“基础字典库”,引入ICD-10-PCS结构化模式和ICD-11后组配概念,建立“后组配表单”,确定手术分级跃升规则。结果：形成了相对简化、完整、符合临床需求的手术名称“基础字典库”和内涵拓展“后组配表单”样式及下拉字典和赋分标准。结论：相对简化的手术名称“基础字典库”搭配内涵拓展“后组配表单”模式可以使临床手术名称更精准,院内手术分级标准更合理。     

葡萄籽提取物对缺血再灌注导致衰老大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用

目的 探讨葡萄籽提取物(Grape seed extract proanthocyanidin,GSPE)对缺血再灌注(I/R)导致衰老大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用.方法 分离培养24月龄Wistar雄性大鼠的原代肾小管上皮细胞,第3代后,将细胞分为对照组、10 μmol/L Antimycin A处理组、GSPE干预组以及Antimysin A+GSPE 组.Anexin V/PI染色,流式细胞仪检测肾小管上皮细胞凋亡情况,定量PCR和Western印迹法分别检测Caspase-3mRNA和蛋白表达水平,化学发光法检测细胞Capsase-3活性及过氧化物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.激光共聚焦检测细胞内活性氧(ROS)的浓度.结果 (1)衰老大鼠肾小管细胞经Antimycin A处理后,凋亡率增高,Caspase-3,MDA,ROS明显增加,SOD下降;(2)经GSPE干预后,其凋亡情况明显好转,caspase-3、MDA、ROS明显降低.SOD含量部分恢复(P＜0.05).结论 老年大鼠肾小管细胞在I/R损伤时,ROS 堆积,线粒体损伤导致肾小管上皮细胞凋亡.GSPE可清除ROS从而达到抑制肾小管上皮细胞凋亡、减轻I/R损伤的作用.     

脊髓缺血再灌注损伤模型改进的研究

目的 改进传统的脊髓缺血再灌注损伤模型进行.方法 实验动物分为动脉夹和结扎线法制备脊髓缺血再灌注损伤模型.结扎线结扎腹主动脉后,不进行二次开腹,缺血一定时间后,直接抽拽腹外的线头.通过后肢神经功能评分和病理组织学观察两种模型制备方法的效果.结果 后肢神经功能评分和病理组织学观察结果表明二者效果基本相同. 结论 结扎线法可减少二次开腹,避免不能关腹引起的脏器在空气中长时间暴露,优于动脉夹法,可以替代动脉夹法制备脊髓缺血再灌注损伤模型.     

基因重组人源超氧化物歧化酶抗辐射作用的研究

目的 研究不同浓度的基因重组人源超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)对小鼠的抗辐射功能的影响.方法 小鼠经口灌胃给药,剂量分别为1 500 U/Kg,6 000 U/Kg,24 000 U/Kg;另设生理盐水组.各组动物每天固定时间给药1次,连续给药1周.末次给药1 h后,用深部X线治疗机对小鼠进行全身照射,剂量为1.0 Gy.照射后24 h,通过检测各组小鼠骨髓细胞的微核率和染色体畸变率探讨CuZn-SOD的防护作用.结果 与生理盐水组相比,三种不同浓度的超氧化物歧化酶均使小鼠的骨髓嗜多染红细胞的微核率及骨髓细胞染色体畸变率显著降低(P<0.01).结论 基因重组人源超氧化物歧化酶CuZn-SOD具有抗辐射作用.     

银杏叶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的探讨预先给予银杏叶提取物能否预防大鼠脊髓缺血再灌注损伤。方法将30只大鼠随机分为3组,假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、银杏叶提取物保护组(G组)。其中G组每日腹腔注射给予0.83 ml.kg-1GBE,连续给药5天。采用腹主动脉缺血法制备大鼠的脊髓缺血再灌注损伤模型。缺血45 min,再灌注24 h后进行Tarlov神经功能评价和病理组织学改变的观察。结果 G组与IR组相比较,神经功能评分结果显示IR组后肢神经功能改善明显,神经功能评分结果差异具有显著的统计学意义(P0.05)。病理组织学结果表明,IR组出现明显的病理改变,神经细胞固缩、组织内血管充血等病理改变,G组的病理改变较轻,明显好于IR组。结论银杏叶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。