重症监护病房的细菌分布及耐药分析

目的 探讨重症监护病房感染患者的细菌分布及细菌对抗生素的耐药性。方法 对254例感染患者进行细菌培养及药敏试验。药敏试验采用K-B法，同时对大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌进行超广谱β内酰胺酶(ESBLs)确证试验测定，葡萄球菌进行耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)测定。结果 254例感染患者共分离出260株细菌，主要为大肠埃希菌57株、肺炎克雷伯菌42株、不动杆菌37株、铜绿假单胞菌32株、金黄色葡萄球菌34株、白色念珠菌20株、肠球菌16株。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs分离率达51％、57％，葡萄球菌MPS占79％。结论 重症监护病房的感染源主要为革兰氏阴性杆菌。另外，金黄色葡萄球菌与白色念珠菌也不容忽视。所分离出的菌株呈高度耐药性.     

梅毒螺旋体Tp0821基因的克隆、表达、纯化及免疫活性研究

目的 构建梅毒螺旋体(Tp)膜脂蛋白Tp0821的重组质粒,表达、纯化其相应蛋白,研究其免疫活性.方法 构建重组质粒pQE32/Tp082l,诱导表达其相应蛋白,以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔,制备多克隆抗体并测定其效价.建立间接ELISA法,检测80份梅毒参比血清、临床经FTA-ABS确诊的阳性血清各150份.结果 成功构建重组质粒pQE32/Tp0821,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白分子量与预期结果相符.将亲和层析后所获高纯度重组蛋白免疫新西兰兔,制备的多克隆抗体效价达1:6400.间接ELISA法检测梅毒参比血清、临床梅毒患者血清,与间接免疫荧光螺旋体抗体吸附试验(FTA-ABS)法比较,其灵敏度、特异度分别为92.6%和98.6%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Tp0821重组蛋白具有较好的免疫活性,可用于梅毒血清学检测.     

梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136前炎症活性的研究

目的 初步研究梅毒螺旋体纤连蛋白结合蛋白Tp0136潜在的前炎症活性。方法构建重组质粒pET-28a/Tp0136并诱导其表达目的蛋白;将不同浓度(1、2、5、10 μg/mL)的rTp0136分别刺激THP-1源性巨噬细胞,ELISA法分别检测其产生前炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平;并同时用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)预先处理巨噬细胞,检测相应细胞因子分泌量。结果成功构建了pET-28a/Tp0136重组质粒,并诱导表达和纯化出rTp0136;重组蛋白能诱导巨噬细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α,并且呈浓度和时间依赖性;重组蛋白刺激经PDTC预处理后的巨噬细胞,其IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌水平分别降至32%、35%和27%。结论rTp0136可诱导巨噬细胞产生前炎症细胞因子,该过程可能受NF-κB调控。     

2006至2008年间某医院感染病原菌谱及其耐药性分析

目的了解、分析桌医院在2006-2008年间临床分离病原菌的分布及其耐药情况。方法对2006-2008年期间某医院临床微生物室分离到的病原菌,用K-B琼脂扩散法药敏试验的抑茵圈直径输入计算机,采用WHONET5.3软件进行统计分析,根据美国临床实验室标准化协会（CLSI）2006年标准判定其耐药性。结果在此3年间革兰阳性菌检出构成比稍有上升趋势,而革兰阴性菌略有下降趋势;葡萄球菌属对青霉素的耐药率超过93.0％,对红霉素、阿奇霉素的耐药率超过53.2％;凝固酶阴性葡萄球菌对苯唑西林的耐药率超过73.8％,明显高于金黄色葡萄球菌;肠球菌属对万古霉素的耐药率为1.0％;大肠埃希菌及克雷伯菌属对氨苄西林耐药率均很高;革兰阴性菌对亚胺培南及美罗培南开始出现耐药。结论某医院于2006-2008年间检出病原菌存在严重耐药,及时监测病原菌变化及其耐药趋势以指导临床用药非常重要。     

2450例梅毒血清学结果分析

目的:比较快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)的检出效果。方法:用三种试验对我院2450例住院患者血清进行检测,不同方法之间比较采用2χ检验。结果:RPR阳性检出率为2.16%,ELISA阳性检出率为2.65%,TPPA阳性检出率为2.61%。RPR与TPPA法比较,差异具有统计学意义。ELISA与TPPA法比较,差异无统计学意义。结论:临床上可采用RPR与ELISA法作为梅毒血清学的过筛试验,对于梅毒的确诊需采用TPPA法。     

梅毒螺旋体Tp0751重组蛋白的表达及鉴定

目的表达梅毒螺旋体粘附蛋白Tp 0751,纯化表达产物并对其抗原性进行鉴定。方法通过生物信息学分析,去除Tp 0751信号肽序列,构建原核表达体并在大肠埃希菌（E.coli）R2566中进行诱导表达;Ni-NTA法纯化重组蛋白;蛋白质印迹法（WB）鉴定重组蛋白。结果成功构建了PET-28a（＋）/Tp 0751原核表达载体;经表达、纯化后获得了相对分子量约为26 kD的融合蛋白;经WB分析能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应。结论重组表达的Tp 0751重组蛋白具有良好的抗原性,为进一步研究Tp 0751重组蛋白在梅毒致病过程中的作用奠定了基础。     

检出鲍曼不动杆菌临床分布及耐药性分析

目的了解检出鲍曼不动杆菌的耐药性及临床分布特征，为诊治提供参考。方法用琼脂扩散法（K—B法）进行药物敏感性检测，按表型确证试验检测ESBLs。结果检出的鲍曼不动杆菌对IPM近100％敏感，对AMX／CA、CAZ／CA、CAZ、CIP敏感率达80％以上，对CZ、FOX几乎全部耐药，ESBLs检出率为16％。本组结果感染者以呼吸内科住院者为多，标本来源以下呼吸道标本最多见。结论鲍曼不动杆菌耐药率高，可普遍存在于医院环境中，应加强院内感染控制，防止暴发流行。     

梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达及免疫活性研究

目的 克隆和表达梅毒螺旋体Tp0319基因,并对其表达产物进行免疫活性分析。方法 挑选并克隆出Tp0319免疫优势区基因,构建原核表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法鉴定;用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔;间接ELISA法检测梅毒螺旋体参考血清及临床标本。结果 成功构建原核表达载体pQE32/Tp0319;高效表达和纯化出一相对分子质量约30 000的重组蛋白。用重组蛋白免疫新西兰兔,能刺激其产生高水平抗体滴度。Western印迹证明其能与梅毒患者血清发生特异性反应,阴性对照菌未见目的表达条带。间接ELISA法检测80份梅毒螺旋体参考血清（阴性、阳性各40份）,阳性和阴性结果的符合率均为100%。检测200份临床梅毒血清标本及200份正常人血清,结果与梅毒螺旋体明胶凝集试验相比,灵敏度和特异度分别为92.6%和100%,符合率为96%。结论 制备的Tp0319重组蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础。     

两种巢氏PCR方法检测二期梅毒血液标本的比较

目的 比较两种巢氏PCR方法在检测二期梅毒患者血液标本中的价值。 方法 对tpp47和polA,分别建立两个巢氏PCR扩增全血中的梅毒螺旋体DNA。 结果 在353例梅毒阳性全血中,nPCR-tpp47和nPCR-polA分别检出142例(40.2%)和132例(37.4%),结果差异有统计学意义(χ²=5.79,P<0.05);两种巢氏PCR在血清学试验高滴度(RPR≥1:8或TPPA≥1:2 560)组的检出率明显高于低滴度组(RPR<1:8或TPPA<1:2 560)。 结论 在检测二期梅毒全血标本Tp DNA时,nPCR-tpp47优于nPCR-polA;巢氏PCR方法可作为梅毒血清学试验的补充试验。     

梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达、纯化及其在临床诊断中的初步应用

目的克隆、表达及纯化梅毒螺旋体(Tp)外膜蛋白Tp 0319,并建立间接ELISA方法,探讨其在梅毒血清学诊断中的价值。方法构建重组质粒PQE32/Tp 0319,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和western blot鉴定表达结果;Ni-NTA亲和层析法纯化重组蛋白,间接ELISA检测梅毒患者血清中特异性IgG抗体。结果成功构建了PQE32/Tp 0319重组质粒;经SDS-PAGE检测,诱导产物显示有一条相对分子质量约为30 000的特异蛋白质条带,western blot分析证明其只与人抗Tp IgG发生特异性反应;将Tp 0139用于间接ELISA检测抗Tp抗体阴、阳性参比血清,特异性和敏感性均为100%;检测梅毒患者和健康献血者血清各150份,结果与TPPA法符合率为95.3%。结论制备的Tp 0319重组蛋白有较好的免疫反应性,可望用于临床梅毒血清学诊断。