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目的:探讨试剂与仪器匹配因素对PCR荧光法检测HLA-B27等位基因的影响。方法:首先采用自建荧光定量PCR法对85例样本中HLA-B27等位基因进行检测,随后采用商品化试剂盒PCR荧光法同时在两款荧光定量PCR仪Stratagene Mx3000P~?和Roche cobas~? Z480上对HLA-B27进行再次检测。结果:商品化试剂盒方法在cobas~? Z480上检出HLA-B27等位基因的结果为65例阳性、20例阴性,与自建方法所检出的结果完全一致;而其在Mx3000P~?上检出的结果为30例阳性、55例阴性,与自建方法的检测结果之间存在显著性差异(χ~2=33.03,P0.005)。该商品化试剂盒方法在Mx3000P~?上的漏检率为53.85%。结论:该商品化试剂与Mx3000P~?荧光PCR仪的匹配性不佳,严重影响了检测结果的准确性。在临床实际工作中,评价PCR试剂的检测性能需要结合仪器,综合考虑以保证检测结果的准确性。 相似文献
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目的:评估1种应用实时荧光PCR法检测念珠菌(包括白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌)核酸试剂的性能是否满足临床应用要求。方法:(1)应用含白色念珠菌106和108CFU/mL 2种浓度水平的临床混合下呼吸道样本,按照EP15-A3文件5×5精密度设计方案,5 d内每天每种浓度做5个复孔,共计25孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其重复性和实验室内精密度;(2)应用白色念珠菌、热带念珠菌和光滑念珠菌3种念珠菌标准株及大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、金黄色葡萄球菌标准株菌液,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其特异性;(3)将白色念珠菌标准株用生理盐水10倍梯度稀释为1×105、1×104、1×103和1×102CFU/mL,5 d内每天每种浓度4个复孔,共计20个复孔,提取核酸后应用该试剂扩增以评价其检出限;(4)收集101例来自呼吸系统疾病患者的下呼吸道标本,提取核酸后应用该试剂扩增检测,并与真菌培养法的结果进行比较,以评价其符合率。结... 相似文献
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