巨噬细胞移动抑制因子在动脉粥样硬化斑块中的表达

背景与目的主要由巨噬细胞和活化淋巴细胞分泌的巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)参与调节先天性和获得性免疫反应,并能抑制巨噬细胞游走,促进巨噬细胞在炎症局部浸润。研究表明,动脉粥样硬化时MIF合成增加。因此,有必要了解动脉粥样硬化斑块     

干预G蛋白βγ亚基介导的信号转导途径对心肌细胞肥大的影响

目的 研究G蛋白βγ亚基在心肌细胞肥大中的作用.方法 采用细菌内同源重组方法制备重组腺病毒载体rAd-βARKct 50 MOI(multiplicity of infection)感染经去甲肾上腺素处理肥大乳鼠心肌细胞,荧光倒置显微镜下观察心肌细胞形态及绿色荧光蛋白的表达,EMAIL图像分析软件测定心肌细胞的表面积,RT-PCR检测βARKct、α-MHC和β-MHC的mRNA表达水平.结果 经测序鉴定证实rAd-β ARKct构建成功,对心肌细胞的感染率40%～50%,与去甲肾上腺素组相比,重组腺病毒组α-MHC定量比值显著上升,β-MHC定量比值显著降低.结论 编码βARKct的重组腺病毒表达载体可以体外感染乳鼠心肌细胞并在心肌细胞中表达βARKct;抑制Gβγ蛋白的功能,可显著逆转去甲肾上腺素介导的肌球蛋白重链表型的改变(α-MHC/β-MHC),逆转心肌细胞肥大.     

同种异体心肌细胞移植对大鼠梗死心肌修复作用的研究

目的观察同种异体心肌细胞移植对心肌梗死大鼠心肌的修复作用和心功能的影响。方法选取110只雄性SD大鼠用于制作心肌梗死模型,术后2周共存活53只,死亡57只。从53只建模成功的SD大鼠中随机选取30只分为3组（每组10只）：心肌细胞移植组（A组）、培养液基质注射组（B组）和单纯心肌梗死组（C组）。A组将原代培养的乳鼠心肌细胞移植到心肌梗死区和梗死边缘区;B组采用与A组同样方法在心肌梗死区和梗死边缘区注射细胞培养液基质;C组不做任何处理。2周后观察A组移植细胞存活情况。采用Langendorff装置检测各组左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末压（LVEDP）、左心室内压最大上升速率（＋dp/dtmax）、左心室内压最大下降速率（-dp/dtmax）和左心室做功（LVW）。结果A组与B组及C组相比,LVSP分别从（47.9±4.6）mmHg和（47.6±3.9）mmHg升高到（52.0±3.0）mmHg（P〈0.05或P〈0.01）;LVEDP分别从（18.8±2.7）mmHg和（24.7±5.8）mmHg降低到（15.8±1.5）mmHg（P〈0.05或P〈0.01）;＋dp/dtmax分别从（1 900±198）mmHg/s和（1 737±347）mmHg/s升高到（2 260±337）mmHg/s（P〈0.05）。3组间-dp/dtmax和LVW比较差异无显著性（P〉0.05）。A组大鼠的心肌中均发现移入的乳鼠心肌细胞,经5-溴脱氧尿核苷（BrdU）标记的免疫组化染色和抗心肌肌钙蛋白I抗体（anti-cTn I）标记的免疫组化染色证明移入的细胞是心肌细胞。结论异体移植的乳鼠心肌细胞可在心肌梗死区存活,并能改善心功能,尤其是改善左心室收缩功能。     

缺氧-复氧对培养的大鼠心肌细胞损伤与细胞凋亡的影响

目的:探讨体外培养的大鼠心肌细胞在缺氧(缺血)和缺氧-复氧(再灌注)状态下心肌细胞损伤和细胞凋亡情况。方法:常规方式培养SD大鼠心肌细胞。给予模拟缺血(缺氧)溶液、模拟复氧(再灌注)液以及终浓度为200U/mL的超氧化无歧化酶(SOD)干预处理,制备缺氧-复氧损伤组(H/R组)、SOD+缺氧-复氧损伤组(SOD+H/R组)和缺氧预处理组(HP组)模型,未经处理的为正常对照组(control组)。结果:屹H/R组的细胞存活率较对照组明显降低(P<0.01);H/R+SOD组和HP组的细胞存活率虽然较正常对照组明显降低(P<0.05),但比H/R组为高(P<0.05);亿H/R组培养液中培养液中心肌酶活性显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。役H/R组心肌细胞内的脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量也明显增高,与HP组和H/R+SOD组的心肌细胞内MDA含量比较有显著性差异(P<0.05);而HP组、H/R组与对照组间比较,无明显差异(P>0.05);均提示了缺氧-复氧过程中心肌细胞损伤严重,也说明了缺氧(血)预处理或SOD均有细胞保护作用。臆H/R组心肌细胞内游离钙含量增加,显著高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01);逸流式细胞仪测定出H/R组心肌细胞凋亡率也明显高于HP组和H/R+SOD组(P<0.01)。心肌细胞凋亡的数量与细胞内钙的增加呈正相关(P<0.01)。肄电镜下所见H/R组的许多细胞表现为胞浆减少,核深染、固缩状态,异染色质不均匀,部分线粒体呈空泡变性,或是肌浆网囊泡变等凋亡期或凋亡前期样改变,少数呈凋亡向坏死方面改变;而其他组则少见此些变化。结论:体外培养的心肌细胞在缺氧-复氧情况下同样可加重心肌细胞损伤,可能是通过降低细胞内钙离子浓度而起作用的。     

巨噬细胞移动抑制因子促进新生微血管生成

目的观察巨噬细胞移动抑制因子对体外培养的人血管内皮细胞增殖的作用,以及通过体内外血管生成实验证实巨噬细胞移动抑制因子促进新生微血管生成的作用。方法采用体外培养的人血管内皮细胞株EA-hy926为实验对象,通过四甲基偶氮唑盐比色法测定血管内皮细胞增殖;利用体外血管生成分析试剂盒量化分析巨噬细胞移动抑制因子在体外对新生微血管生成的作用;利用免疫组织化学染色法检测巨噬细胞移动抑制因子作用后基底膜类似物栓子中第Ⅷ因子相关抗原观察巨噬细胞移动抑制因子在小鼠体内对新生微血管生成的作用。结果巨噬细胞移动抑制因子可以促进体外培养的人血管内皮细胞增殖,促进体外培养的人血管内皮细胞在体外形成血管腔,在小鼠体内也能促进基底膜类似物栓子中新生微血管生成。结论巨噬细胞移动抑制因子有促进新生微血管生成的作用。     

miR-1、miR-16和miR-208前体在乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达

目的检测心肌特异的miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中的表达。方法利用出生1～3d的Sprague-Dawley(SD)大鼠和C57BL/6小鼠,采用2.5%胰酶消化和差速贴壁法分离心肌细胞和心肌成纤维细胞。提取原代的乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及P1代的心肌成纤维细胞总RNA,以β-actin为内参照,逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)分别检测miR-1、miR-16和miR-208的前体表达水平。用FluorChem8900软件分析琼脂糖凝胶电泳后PCR产物条带的灰度值,计算出表达的目的miRNA前体与β-actin的比值。结果有效分离并培养了乳C57BL/6小鼠、乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞。RT-PCR结果显示,在乳SD大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中miR-1和miR-16均有相近水平的表达;心肌细胞中miR-208的表达显著低于miR-208b(P0.01),miR-208b在心肌细胞中的表达显著高于其在心肌成纤维细胞中的表达(P0.05)。乳C57BL/6小鼠心肌细胞中miR-1a-1的表达显著低于miR-1a-2(P0.01),而miR-1a-2在心肌细胞和心肌成纤维细胞中的表达水平一致;miR-16-1在心肌细胞和心肌成纤维细胞中表达水平相近,而miR-16-2在两种细胞中均不表达;心肌细胞中miR-208a和miR-208b表达水平差别不明显,心肌成纤维细胞中只有miR-208a表达,并且在水平上低于其在心肌细胞中的表达(P0.05)。结论 miR-1、miR-16和miR-208前体在乳小鼠、乳大鼠心肌细胞及心肌成纤维细胞中呈细胞特异性的表达。     

ACE2基因多态性与厄贝沙坦降压疗效差异的相关性研究

摘要 目的 研究原发性高血压患者ACE2基因G9570A多态性与厄贝沙坦降压疗效的相关性。 方法 395例患者口服厄贝沙坦150-300mg/日,进行为期8周的降压治疗,用聚合酶链反应(PCR)和限制性酶切方法检测所有患者的ACE2基因G9570A多态性,按性别分为两个亚组。按照基因型对患者治疗前后及治疗过程中的收缩压(SBp)和舒张压(DBp)等进行监测,以比较不同基因型患者之间的降压疗效。结 果 经过8周厄贝沙坦治疗,各亚组收缩压、舒张压及脉压有明显的下降（p<0.01）。A等位基因的男性患者服药后的SBP下降幅度高于G等位基因组,DBP下降幅度低于G等位基因组,但两者之间无显著性差异(P>0.05),而在女性患者中,GA基因型的患者服药后,SBP及DBP下降的幅度均大于GG、AA基因型的患者,但差异也无统计学意义(P>0.05)。结 论 本研究没有发现ACE2基因型与ARB降压疗效相关,其结果尚需进一步研究。     

ACE2基因多态性与高血压合并缺血性脑卒中临床危险因素的相关性

目的 研究血管紧张素转换酶2(ACE2)基因多态性与中国南方高血压合并缺血性脑卒中患者的临床危险因素的相关性.方法 采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,检测139例原发性高血压合并缺血性脑卒中患者的ACE2基因型,同时测定脉压、高敏C反应蛋白、颈动脉内膜中层厚度、高密度脂蛋白及血尿酸水平,分析ACE2基因与原发性高血压患者中缺血性脑卒中发病临床危险因素的相关性.结果 高敏C反应蛋白、脉压、颈动脉内膜中层厚度、尿酸与原发性高血压患者脑卒中的发生呈正相关,男性A基因型者其脉压、高敏C反应蛋白、颈动脉内膜中层厚度、高密度脂蛋白水平高于G基因型者,差异有统计学意义(P＜0.05);女性不同基因型者其脉压、高敏C反应蛋白、颈动脉内膜中层厚度、高密度脂蛋白水平不同,其中AA型者较高,差异有统计学意义(P＜0.05).在不同基因型患者血尿酸水平不同,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 原发性高血压合并缺血性脑卒中患者中,携带A/AA基因者其临床危险因素水平较高,具有再发卒中易感性.     

三七总皂苷对心梗后心室重构大鼠肿瘤坏死因子-α与基质金属蛋白酶表达的影响及其作用机制

目的 研究三七总皂苷(PNS)对急性心肌梗死(AMI)后左室重构(LVRM)大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响并探讨其作用机制.方法 除假手术组外采用结扎大鼠左冠状动脉前降支的方法建立AMI模型,术后24h后随机分为对照组和实验组,连续4周分别灌胃给予生理盐水、福辛普利和PNS低、中、高剂量,观察PNS对病鼠左室舒张末期内径(宽度)(LVIDd)、左室收缩末期内径(宽度)(LVIDs)、左室射血分数(EF)、左室收缩百分率(FS)、二尖瓣口舒张早期血流速度(MY)、心率等反映心功能变化指标及TNF-α与MMP-2表达的影响.结果 PNS中、高剂量组的EF、FS及MV指标均显著提高(P<0.01或0.05);PNS低、中、高剂量组均能明显抑制TNF-α与MMP-2的表达(P<0.05).结论 PNS能够抑制TNF-α与MMP-2的分泌与释放,通过提高左室收缩和舒张功能,降低外周阻力,减轻AMI后LVRM大鼠的心肌缺血再灌注损伤,对病鼠AMI后LVRM心功能有保护和改善作用.

Abstract：

Objective To observe the effects of panax notoginsenoside (PNS) on tumor necrosis factor-α (TNF-α) and matrix metalloproteinases-2 (MMP-2) expressions in rats with post-myocardial infarction ventricular remodeling and explore the mechanism. Methods Rat models of acute infarction ventricular (AMI) were established by ligation of the left anterior descending coronary artery. Twenty-four hours after the operation, the rats were randomized into control and experimental groups for intragastric administration of normal saline (control), fosinopril and PNS at the low, medium and high doses for 4 consecutive weeks. The effects of PNS on the cardiac function index including the left ventricular end-diastolic dimension (LVIDd), left ventricular end-systolic diameter (LVIDs), ejection fraction (EF), percentage of left ventricular systole (FS), mitral early diastolic flow velocity mouth (MV), and heart rate (HR) were observed, and the changes in TNF-α and MMP-2 expression were detected after post-myocardial infarction ventricular remodeling. Results Compared with the control group, PNS at the medium and high doses produced significant improvements in the EF, FS and MV of the rats (P<0.01 or 0.05). TNF-α and MMP-2 expressions were significantly decreased by PNS treatment at low, medium and high doses (P<0.01). Conclusion PNS can inhibit or reduce the expression of TNF-α and MMP-2, thereby enhancing left ventricular systolic and diastolic functions, decreasing peripheral resistance, and improving the cardiac function of rats with post-myocardial infarction left ventricular remodeling.