TLR4介导氧化型低密度脂蛋白致动脉粥样硬化作用的研究

目的探讨氧化型低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，ox-LDL）的致动脉粥样硬化作用与Toll样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）表达的相关性。方法构建针对TLR4的小干扰RNA（small interference RNA，siRNA）表达载体，转染人单核细胞株U937，于转染前后用不同浓度的ox-LDL刺激，用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测TLR4蛋白和mRNA表达变化，同时用ELISA测定NF-κB活性改变以及细胞上清液中动脉粥样硬化相关细胞因子MCP-1和IL-8的浓度变化。结果ox-LDL刺激可导致单核细胞TLR4表达上调，同时NF-κB p65活性增强，MCP-1和IL-8在细胞上清液中的浓度显著高于对照组（P〈0．05），并且呈剂量依赖性；利用siRNA表达载体使TLR4表达抑制后，相同剂量的ox-LDL刺激，NF-κB p65相对活性以及MCP-1和IL-8的分泌显著低于TLR4未抑制组（P〈0．05）。结论ox-LDL的致动脉粥样硬化作用至少部分是由TLR4介导的；调节TLR4的表达，可以减弱ox-LDL刺激引起的包括NF-κB活化以及MCP-1和IL-8分泌等致动脉粥样硬化效应。     

自身免疫性肝病148例临床特点分析

目的 分析自身免疫性肝病（autoimmune liver diseases,ALDS）的临床、生化及自身抗体特点.方法 分析我院1996年-2005年148例ALDS患者其中自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis,AIH）患者52例,原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosi,PBC）患者96例的临床表现,并分析有关实验室检查资料.结果 两组患者临床症状均不典型,肝功能各项指标普遍异常,AIH组以ALT升高更为明显,而PBC组患者ALP和GGT升高更为显著（P＜0.01）.在自身抗体检测情况两组有极大的差异.AIH患者主要以高效价的抗核抗体（antinuclear antibodies,ANA）（44/52）和/或抗平滑肌抗体（antismooth muscle antibodies）（35/52）为主,此外,尚有9.6%（5/52）和3.8%（2/52）的AHI患者出现抗可溶性肝抗原抗体（auti-soluble liver antigen autoantibdies,抗SLA）和抗肝/肾微粒体（liver/kidney microsomal,LKM）抗体阳性.PBC组以抗线粒体抗体（mitahondrial anto-antibodies,AMA）阳性（99.0%）为主,93.8%的患者AMAM2阳性.结论 AIH及PBC的诊断可结合临床、生化、自身抗体检查的结果,其中自身抗体的检测尤为重要.     

人心肌线粒体肌酸激酶的提纯及抗体制备

目的　从人心肌中分离纯化肌小节型线粒体肌酸激酶 (sMtCK) ,制备抗血清 ,从抗血清中制备对sMtCK有特异免疫反应的抗体 ,建立酶联免疫吸附试验 (ELISA) ,测定血清sMtCK。方法　采用超低温高速离心、硫酸铵分级提取、SepharoseCL6B层析等技术分离纯化sMtCK ,免疫新西兰大白兔。应用自制抗sMtCK建立ELISA检测健康体检者、心肌炎及急性心肌梗死 (AMI)患者血清sMtCK。结果　经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)和Westernblot鉴定 ,纯化的sMtCK为单一蛋白质条带。制备的抗sMtCK多克隆抗体在琼脂糖免疫扩散实验和ELISA中的抗体效价分别为 1∶32和 1∶80 0。自制抗体建立的ELISA检测心肌炎和AMI患者的血清sMtCK阳性率分别为 5 1.6 % (16 / 31)和 5 4 .1% (2 0 / 37) ,与健康对照组相比差异有显著性 (P <0 .0 1)。结论　经离心、提取、纯化所得的sMtCK是免疫纯。建立的ELISA检测血清sMtCK有助于心肌炎和AMI的诊断。     

联检血清VEGF、CA15-3、TSGF及放射性核素骨扫描对乳腺癌骨转移诊断的临床价值

目的：探讨了联检血清VEGF、CA15-3、TSGF及放射性核素显像对诊断乳腺癌骨转移的临床价值。方法：应用发光免疫分析技术和酶联法检测了82例乳腺癌患者血清VEGF、CA15-3、TSGF这三种肿瘤标志物,应用SPECT对既有患者进行了骨扫描检测,以明确有无转移。结果：82例乳腺癌患者血清VEGF、CA15-3、TSGF水平均显著地高于正常人组（P≤0.01）,32例临床诊断为乳腺癌骨转移组又非常显著地高于正常人组（P≤0.01）。结论：检测血清VEGF、CA15-3、TSGF水平结合全身骨扫描可提高对乳腺癌骨转移诊断的准确性,具有重要的临床价值。     

肝硬化患者血清脯氨酸肽酶活性与脂质过氧化损伤的关系

据文献报道,免疫反应中产生的氧化应激和脂质过氧化损伤在乙肝病程的作用广泛受到临床和科研工作者的关注。脯氨酸肽酶（prolidase,PLD）在肝细胞中有较高的含量,能水解氨基酸末端含有脯氨酸和羟脯氨酸的多肽,是一种蛋白水解酶。本文探讨了肝硬化患者血清PLD与脂质过氧化的关系,现报告如下。     

IgD型多发性骨髓瘤患者实验室检查结果分析

目的 IgD型多发性骨髓瘤患者临床上较为少见,通过实验室检查,以求发现其特点,避免漏诊。方法分别收集20例本实验室检测到的IgD型I、gG型I、gA型I、gM型多发性骨髓瘤患者的实验室检查结果,分析IgD型与其它较为常见类型的多发性骨髓瘤患者实验室检查结果的异同。结果 IgD型多发性骨髓瘤患者的免疫球蛋白定量结果显示,IgGI、gA和IgM含量均减低者有18例占90%,其余两例3种免疫球蛋白含量处于正常下限。轻链定量发现,20例IgD型多发性骨髓瘤患者有19例为IgD型λ轻链型,占95%,而IgD型κ轻链型仅1例,且20例中有19例是轻链比值异常的。IgD型多发性骨髓瘤患者的血清蛋白电泳阳性率与其余类型无显著差异（P〉0.05）;免疫固定电泳显示IgD泳道有特异性的抗原抗体沉淀带。结论如实验室检查发现患者免疫球蛋白IgGI、gA和IgM含量均减低、轻链比值异常、血清蛋白电泳出现阳性条带,要高度怀疑其为IgD型多发性骨髓瘤,免疫固定电泳时务必加IgD泳道,以避免IgD型多发性骨髓瘤的漏诊。     

Toll样受体4小干扰RNA表达载体的构建及鉴定筛选

目的构建并筛选到能有效抑制TLR4基因表达的小干扰RNA表达载体,用于研究TLR4基因功能。方法 RNA干扰采用体外构建小干扰RNA表达载体法,将构建好的表达载体转染单核细胞株,分别用流式细胞术和实时荧光定量RT-PCR法检测TLR4蛋白和mRNA表达变化,筛选抑制效率最高的小干扰RNA表达载体。结果成功构建了TLR4小干扰RNA表达载体,并经电泳及测序证实;编号为S8-1的载体转染入细胞后,TLR4阳性率为27.03%,显著低于对照组的35.12%;流式细胞术和实时荧光定量RT-PCR法检测均证实编号为S8-1小干扰RNA表达载体的抑制效率最高,可用于后续实验。结论本实验所构建的编号为S8-1小干扰RNA表达载体可有效抑制TLR4基因表达,小干扰RNA表达载体法能够抑制体外培养细胞株TLR4的表达,可用于研究TLR4基因功能。     

冠心病患者血清CRP和高半胱氨酸水平观察

目的探讨冠心病(CHD)患者外周血C反应蛋白与高半胱氨酸(Hcy)水平的改变及其临床意义。方法测定108例CHD患者及56例健康体检者血清Hcy及CRP浓度,生化常规测定血脂及其他炎症指标,进行相关性分析。结果CHD组血清Hcy水平为(20.50±6.29)μmol/L,其中AMI组(21.09±9.04)μmol/L,非AMI组(20.30±5.14)μmol/L,均显著高于健康对照组(11.51±2.55)μmol/L(P<0.001),而CHD两组之间无显著性差异;CHD组血清CRP平均为25.23mg/L(0.16～179mg/L),其中AMI组为72.70mg/L(3.57～179mg/L),非AMI组为5.24mg/L(0.16～31.8mg/L),均显著高于健康对照组0.46mg/L(0.16～1.28mg/L)(P<0.001),CHD两组之间有显著性差异(P<0.01)。血清Hcy与WBC、T-Bil、D-Bil、I-Bil呈明显正相关,CRP与WBC、T-Bil、D-Bil、I-Bil呈明显正相关,与LDL-C、apoB100、TBA、Alb呈明显负相关。结论CHD患者血清Hcy和CRP水...     

肝功能相关酶学检测指标国产诊断试剂的质量比对研究

目的 评价在罗氏MODULAR P-800全自动生化分析仪(简称P-800)上应用国产诊断试剂检测肝功能相关指标的可行性.方法 应用上海复星长征医学科学有限公司和罗氏原装配套试剂,在P-800上同时测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、谷氨酰基转移酶(GGT)和碱性磷酸酶(ALP).评价国产试剂的批内批间精密度、线性范围、抗干扰能力以及与罗氏原装配套试剂进行相关性分析.结果 精密度试验结果表明,国产试剂检测结果批内、批间变异系数(CV)均<5%;线性范围验证试验表明国产试剂基本达到说明书声称的线性范围;干扰试验表明国产试剂与原装配套试剂的抗干扰能力无明显差异;方法学比对试验结果表明,应用国产试剂和原装配套罗氏试剂同时检测40份临床样本,其检测结果基本一致(P>0.05),相关性较好(r>0.975,b在1.0±0.05之间).结论 对于该研究涉及的四项肝功能相关酶学诊断指标,应用国产试剂与罗氏原装配套试剂相比,其相关性较好、精密度较高、线性范围达到说明书规定范围,对胆红素和乳糜有较好地抗干扰能力;肝功能相关国产诊断试剂检验结果与罗氏原装配套试剂具有可比性,可替代进口试剂,实现国产化.     

抗坏血酸、胆红素和血红蛋白对临床生化指标检测的影响

目的:探讨血清标本中抗坏血酸、游离胆红素、结合胆红素和血红蛋白等物质对临床生化指标检测的干扰和影响.方法:健康志愿者复合血清加入不同浓度梯度的上述干扰物质后,用全自动生化分析仪检测血糖(G1u)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、总胆固醇(TCH)和三酰甘油(TG)的水平.结果:抗坏血酸、游离胆红素和结合胆红素浓度与Glu水平呈负相关(r=-0.999 46,-0.997 79,-0.999 38,P＜0.05),与Cr、UA和TCH的水平无明显相关性.血红蛋白与TG呈负相关(r=-0.962 63,P＜0.05),与UA正相关(r=0.995 37,P＜0.05),与其余指标无明显相关性.结论:抗坏血酸、游离胆红素、结合胆红素和血红蛋白等物质会对临床生化指标构成干扰,在解释检验结果时应考虑到上述因素.