siRNA沉默PPARα减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡

背景:多药耐药一直是遏制提高结肠癌化疗有效性的瓶颈问题。目的:探讨沉默PPARα能否减弱羟喜树碱诱导的人结肠癌细胞凋亡,从而阐明PPARα在羟喜树碱耐药中的潜在作用。方法:构建针对PPARα基因的siRNA干扰载体,并转染人结肠癌SW1116细胞,经G418筛选出稳定转染的细胞,以RT-PCR和蛋白质印迹法验证干扰效果。经羟喜树碱干预后,以MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡。以定量RT-PCR检测不同浓度miR-506前体转染SW1116细胞后对PPARα下游调控靶基因mRNA表达的影响。结果:siRNA干扰载体Ⅲ的沉默效果最佳,PPARα mRNA和蛋白表达分别下调了约94.1%±3.4%和70.8%±8.6%。稳定转染siRNA的SW1116细胞的半数抑制浓度(IC_(50))为(332±19)μg/L,亲本SW1116细胞为(152±12)μg/L。在相同浓度羟喜树碱的作用下,亲本SW1116细胞的凋亡率显著高于稳定转染siRNA的SW1116细胞(150μg/L:7.0%±2.5%对2.8%±1.6%;300μg/L:32.4%±7.1%对18.5%±2.7%)。miR-506前体下调HMGCS-2表达,上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达,其中上调CCND1的作用最为明显。结论:成功构建了针对PPARα的siRNA干扰载体;沉默PPARα能增强SW1116细胞对羟喜树碱的抵抗性,可能与下调HMGCS-2表达并上调FABP-2、CCND1和TGF-β1表达有关。     

羟基喜树碱富集结肠肿瘤干细胞样群体的初步研究

背景:肿瘤干细胞是临床上肿瘤耐药的主要机制,识别并靶向肿瘤干细胞为肿瘤治疗的研究带来了新的思路。目的:探讨在体外以化疗药物富集结肠肿瘤干细胞样群体的可行性。方法:应用前期实验中以药物浓度递增诱导法建立的羟基喜树碱(HCPT)耐药人结肠癌细胞株SW1116/HCPT,免疫荧光标记干细胞表面抗原CD133,Hoechst33342/PI双染流式细胞仪检测、分选侧群(SP)细胞,实时PCR检测干细胞相关和多药耐药相关基因表达。结果:亲代细胞株SW1116中CD133阳性群体和SP群体分别仅占2%和1%,耐药细胞株SW1116/HCPT中则高达7%和61%,多药耐药基因MDR1抑制剂维拉帕米可使两组SP群体均下降至接近0水平。SW1116/HCPT细胞SP群体中干细胞相关基因CD133、Nanog和多药耐药相关基因MDR1、MRP1、MRP2、MRP6 mRNA表达水平较非SP群体显著上调(P0.05)。结论:HCPT药物浓度递增诱导法可成功富集结肠肿瘤干细胞样群体,其SP亚群中存在于细胞相关和多药耐药相关基因高表达。     

miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的功能研究

目的探讨miR-506在人结肠癌羟基喜树碱多药耐药中的潜在作用。方法首先通过PCR从基因组DNA中克隆出包含miR-506前体的片段,将其连接至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中,测序进行验证。将构建成功的pMIF-miR-506转染至低表达miR-506的亲本细胞SW1116中,加入含G418的选择性培养基进行选择性培养。运用RT-PCR验证稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株中的miR-506的表达情况,MTT法检测稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株和亲本细胞SW1116对羟基喜树碱的敏感性差异,Annexin V/PI检测各自对羟基喜树碱的凋亡情况。结果测序结果表明hsa-miR-506的前体序列被成功地构建至miRNA表达载体pMIF-cGFP-Zeo中。TaqMan荧光定量PCR技术检测发现,相比亲本细胞SW1116,稳定表达绿色荧光的SW1116细胞克隆中miR-506的含量显著升高,约为33.7±8.3倍。细胞增殖试验表明稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的IC50为(280±13)μg/L,而对照组SW1116的IC50为(152±12)μg/L。同时还发现在相同浓度的羟基喜树碱作用下,亲本细胞SW1116较稳定转染pMIF-miR-506的SW1116细胞株的凋亡细胞比率增高(150μg/L:7.8%±1.7%vs5.4%±1.2%;300μg/L:33.6%±3.9%vs18.2%±4.7%)。结论成功地构建了过表达miR-506的载体pMIF-miR-506;过表达miR-506能够增加SW1116对羟基喜树碱的抵抗性。     

microRNA与消化道肿瘤的研究进展

肿瘤的发生是由于一系列癌基因蛋白和抑癌基因蛋白的开放读码框突变所致。microRNA的发现使人们对肿瘤形成有了新的认识，越来越多的证据表明microRNA与肿瘤的发生和发展密切相关。与消化道肿瘤相关的microRNA相继被报道。microRNA的进一步研究将会使消化道肿瘤在发病机制研究、诊断和治疗方面取得重大突破。本文就近年microRNA与消化道肿瘤的研究进展作一综述。     

表皮生长因子受体单克隆抗体在结直肠癌治疗中作用的系统评价

背景：研究表明表皮生长因子受体（EGFR）信号通路可调节细胞的分化、增殖、迁移、凋亡以及血管发生。近年来,靶向EGFR的单克隆抗体拓宽了结直肠癌治疗的选择范围。目的：系统评价EGFR单抗联合结直肠癌治疗方案在结直肠癌治疗中的疗效和安全性。方法：从常用电子数据库中检索结直肠癌治疗方案联合与未联合EGFR单抗治疗结直肠癌的随机对照试验,分析反应率和不良反应发生率的合并比值比（OR）,行亚组分析和敏感性分析,以漏斗图检测出版偏倚。结果：共7项随机对照试验（n=4186）纳入分析。联合与未联合EGFR单抗（治疗组和对照组）的反应率按意向治疗（ITT）分析分别为25．4％和17．6％（OR3．36,95％CI：1．42～7．95）,按方案（PP）分析分别为25．6％和18．0％（OR3．32,95％CI：1．40～7．88）．治疗组反应率明显优于对照组;两组3级以上不良反应总体发生率按ITT分析分别为71．2％和54.3％（OR2．23．95％CI：1．74～2．86）．治疗组3级以上不良反应总体发生率和皮肤损害、腹泻、低镁血症发生率均高于对照组。结论：EGFR单抗可明显提高结直肠癌,尤其是转移性或进展期结直肠癌患者对治疗的反应率,伴3级以上不良反应发生率增高。     

一氧化氮供体型NSAIDs在结肠癌化学预防中的作用

一氧化氮供体型非甾体抗炎药（NO—NSAIDs）是由特定的化学连接基团将传统NSAIDs与NO供体部分连接而成,其研发最初系用于减少传统NSAIDs的不良反应。NO-NSAIDs对结肠癌细胞株的生长抑制作用较母体化合物强数百倍,并能在动物模型中有效预防结肠癌的发生,作用机制可能涉及对细胞动力学、细胞信号转导和药物代谢酶的影响。动物实验和前期人体研究已证实NO—NSAIDs是安全的。NO—NSAIDs的高效性和安全性决定了其可能成为具有潜力的结肠癌化学预防剂。     

炎症性肠病患者外周血单个核细胞和血浆中肿瘤坏死因子受体相关因子-6的激活

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子-6（tumor necrosis factor receptor—associated factor-6,TRAF-6）在炎症性肠病患者外周血单个核细胞和血浆的表达,及其与内镜下疾病活动性的相关性。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）分析炎症性肠病患者和正常对照者血浆中TRAF-6蛋白的表达,SYBR—green real time PCR方法分析炎症性肠病患者和正常对照者外周血单个核细胞中TRAF-6 mRNA的表达。数据处理使用Graph Pad Prism 5。结果克罗恩病患者（P=0．000）和溃疡性结肠炎患者（P=0．000）血浆TRAF-6水平显著高于正常对照者,但是克罗恩病患者（r=-0．114,P=0．377）以及溃疡性结肠炎患者（r=0．044,P=0．727）血浆TRAF-6表达水平和内镜下疾病活动指数均无显著的相关性。克罗恩病患者（P=0．000）和溃疡性结肠炎（P=0．000）患者外周血单个核细胞TRAF-6 mRNA表达均显著高于正常对照者外周血单个核细胞中mRNA的表达。结论炎症性肠病患者血浆和外周血单个核细胞中均存在TRAF-6的激活,但血浆TRAF-6的高表达不能反映内镜下的疾病活动程度。     

激光共聚焦显微内镜的临床应用进展

冷光源内镜是目前应用于胃肠道检查的主要方法，做出临床诊断还需依靠活检。其缺点是延迟了诊断，增大了活检取样误差，增加了操作的危险性和费用，缺乏定量的指标，从而造成检查者本身和检查者之间存在诊断差异。     

炎症性肠病患者肠黏膜炎症和非炎症组织CD27的激活表达

目的比较炎症性肠病患者肠黏膜炎症组织、非炎症组织及正常对照者肠黏膜CD27激活表达的差异,探讨CD27激活表达在炎症性肠病发病中的意义。方法共纳入32例克罗恩病患者、41例溃疡性结肠炎患者及40例正常对照者。分别应用West-ern blot试验和SYBR-green real time PCR方法分析炎症性肠病患者肠黏膜炎症组织、非炎症组织及正常对照者肠黏膜CD27蛋白及其mRNA的表达。数据处理使用GraphPad Prism 5软件。结果克罗恩病和溃疡性结肠炎患者肠黏膜炎症组织CD27蛋白及其mRNA表达均显著高于非炎症组织及正常对照组织(P均0.01);克罗恩病患者肠黏膜非炎症组织CD27蛋白及其mRNA表达显著高于正常对照组织(P=0.000);溃疡性结肠炎患者肠黏膜非炎症组织CD27蛋白表达显著高于正常对照组织(P=0.000)。结论炎症性肠病患者肠黏膜组织中存在CD27的激活表达,这种激活效应不仅出现在内镜表现为炎症性肠病的炎症组织中,甚至出现在炎症性肠病患者内镜表现为正常的肠黏膜中,CD27的激活表达是炎症性肠病发病的早期事件。     

血浆肿瘤坏死因子受体相关因子-4升高对炎症性肠病的临床意义

目的 分析血浆肿瘤坏死因子受体相关因子-4(tumor necrosis factor receptor-associated factor-4,TRAF4)水平对于炎症性肠病的诊断价值以及与内镜下疾病活动性的相关性.方法 应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分析炎症性肠病患者和正常对照者血浆中TRAF4蛋白的表达,受试者工作特征曲线(receiver-operating characteristic,ROC)分析血浆TRAF4水平对于克罗恩病和溃疡性结肠炎的诊断价值,应用Pearson相关分析研究血浆TRAF4水平与内镜下疾病活动性的相关性.数据处理使用GraphPad Prism 5.结果 克罗恩病患者和溃疡性结肠炎患者血浆TRAF4水平均显著高于正常对照者(P＜0.05);克罗恩病患者和溃疡性结肠炎患者血浆TRAF4表达水平和内镜下疾病活动指数均无显著的相关性(P＞0.05).结论 炎症性肠病患者血浆TRAF4水平增高,对区分炎症性肠病患者和正常对照者具有诊断价值,但血浆中TRAF4的水平不能反映内镜下疾病活动程度.