PPARγ在神经系统中能够促进IRS-4 基因表达

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）对脑内胰岛素受体底物-4（IRS-4）基因表达的影响。方法体外实验采
用原代培养1周的大鼠皮层神经元,用10 μmol/L PPARγ激动剂罗格列酮分别处理0、1、4、24 h;体内实验选取成年C57BL/6J小
鼠和脑内PPARγ条件性敲除（BKO）小鼠,分别按12 mg/kg腹腔注射罗格列酮（10% DMSO溶解）或同等剂量10% DMSO作用
12 h。利用MTT法检测原代培养皮层神经元存活率;实时定量PCR法检测神经元及皮层组织内IRS-4 mRNA的变化情况。结
果各处理组皮层神经元存活率与对照组相比无显著性差异;罗格列酮处理的皮层神经元,C57BL/6J小鼠和BKO小鼠皮层内
IRS-4 mRNA水平较对照组均明显增高;未处理的BKO小鼠皮层内IRS-4 mRNA水平较对照组显著降低。结论PPARγ在神经
系统中能够促进IRS-4表达。
     

重症肌无力外周血调节性T细胞线粒体自噬异常的研究

目的探讨线粒体自噬对重症肌无力(myasthenia Gravis,MG)患者外周血调节性T细胞(CD4~+CD25~+regulatory T cell,Treg)功能的影响及关系。方法选择首次确诊、尚未接受治疗的15例MG患者,以15名健康人作为对照,分别采集外周血,以磁珠分选法获得Treg细胞,经流式细胞仪鉴定纯度后,分别通过透射电镜检测Treg细胞线粒体自噬情况、Western Blot法检测微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(microtubule associated protein light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)的表达水平、JC-10荧光探针检测线粒体膜电位(以红色荧光细胞数/绿色荧光细胞数比值表示)变化、羧基荧光素琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE,CFSE)检测Treg对正常CD4~+T细胞增殖抑制能力(荧光强度越强,增殖抑制能力越强)。结果与对照组比较,MG组电镜下线粒体自噬明显减少[(25.60±7.81)个、(19.20±5.49)个,t=-2.596,P0.05],且变形线粒体较多;MG组LC3-Ⅱ表达明显减少(0.450±0.137、0.334±0.124,t=-2.413,P0.05);MG组Treg细胞线粒体膜电位下降(2.153±0.537,1.726±0.494,t=2.126,P0.05);MG组CFSE检测平均荧光强度减弱(34.82±10.64、26.49±5.94,t=2.646,P0.05)。结论 MG患者有Treg细胞的线粒体自噬功能降低,这可能与其增殖抑制功能降低相关。     

神经干细胞特异性PPARγ基因敲除小鼠模型的制备与鉴定

目的制备与鉴定神经干细胞特异性PPARγ基因敲除小鼠模型。方法将引进的2种转基因小鼠B6.PPARγloxp/loxp、B6.
Nestin-Cre 进行饲养并杂交繁殖,将子一代小鼠与B6.PPARγloxp/loxp 小鼠回交获得子二代小鼠,提取子二代小鼠的基因组
DNA,利用PCR方法扩增Cre 和loxp 基因片段,并进行琼脂糖凝胶电泳检测。选取基因型为B6.PPARγloxp/loxp.Nestin-Cre
（KO）的小鼠即为神经干细胞特异性敲除PPARγ的敲除小鼠,另选基因型为B6.PPARγloxp/loxp（loxp）作为对照组小鼠。应用
RT-PCR、实时荧光定量PCR方法鉴定神经干细胞特异性敲除PPARγ的敲除小鼠。结果敲除小鼠在基因鉴定时可以扩增得到
PPARγloxp和Cre两个条带,在mRNA表型检测时脑内PPARγ表达显著低于对照组小鼠。成功获得神经干细胞敲除PPARγ基
因的敲除小鼠。所购2种转基因小鼠均有繁殖能力,其繁殖符合孟德尔遗传规律。结论基于loxp-Cre系统成功构建神经干细
胞特异性敲除PPARγ的基因敲除小鼠,为进一步的神经系统疾病的治疗及其机制研究提供模型基础。
     

帕金森病患者血清微小RNA-128、221的表达水平变化及其临床意义

目的 探讨帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者血清微小RNA(miR)-128,miR-221的表达水平变化及其对疾病的辅助诊断价值。方法 选取2016年1月-2019年12月本院收治的PD患者210例作为PD组,均根据Hoehn-Yahr分级进行分组,4～5期的患者纳入到重度组(60例),2.5～3期的患者纳入到中度组(82例),1～2期患者纳入到轻度组(68例); 收集同期本院的体检志愿者60例作为对照组; 检测所有研究对象的血清miR-128,miR-221表达水平,收集患者的病程以及统一帕金森病评定量表(Unied parkinson disease rating scale,UPDRS)评分。结果 PD组血清miR-128水平低于对照组,血清miR-221水平高于对照组(P<0.05); 重度组血清miR-128水平低于中度组和轻度组,血清miR-221水平高于中度组和轻度组(P<0.05),中度组血清miR-128水平低于轻度组,血清miR-221水平高于轻度组(P<0.05); 经Pearson分析显示,PD患者血清miR-128水平与UPDRS II评分、UPDRS III评分、Hoehn-Yahr分级均呈负相关(-0.5<r<0,P<0.05),血清miR-221水平与UPDRS II评分、UPDRS III评分、Hoehn-Yahr分级均呈正相关(0<r<0.5,P<0.05); 受试者操作特征曲线(Receiver operating characteristic curves,ROC)分析显示,血清miR-128,miR-221对PD有较高的早期辅助诊断价值,其曲线下面积均大于0.7; 联合诊断的敏感度和约登指数均有所提升,联合诊断对PD的早期辅助诊断价值更高。结论 PD患者血清miR-128水平呈异常低表达、miR-221水平呈异常高表达,二者均与患者的病情严重程度存在一定的相关性,且对PD有较高的早期辅助诊断价值。     

蒙古沙鼠脑缺血模型术后医源性Horner综合征报道

目的:探讨蒙古沙鼠脑缺血模型术后Horner综合征(HS)的发病机制。方法:40只沙鼠随机分为假手术组、手术1、2、3组。假手术组仅分离出颈总动脉,手术各组分离后同时夹闭双侧颈总动脉5 min。术后观察各组沙鼠出现HS情况;术前、术后1、4、7 d进行NDS评分;术后7 d灌注固定后对海马、下丘脑及脑干等部位进行HE染色。结果:假手术组HS发生率为11.1%,手术1、2、3组分别为37.5%、44.4%、60%;各组术前、术后1、4、7 d NDS差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示手术组海马区可见缺血改变,且细胞计数少于假手术组(P<0.05),下丘脑和脑干等部位HE染色未见缺血改变。结论:本实验HS的发生为颈部手术中机械性损伤所致,而非造模成功后脑缺血引起。