热损伤对人皮肤成纤维细胞氧化应激的影响

目的探讨体外培养人皮肤成纤维细胞热损伤后氧化应激及前列腺素E2（PGE2）分泌的变化及其可能的机制。方法体外培养人皮肤成纤维细胞,制作热损伤模型后分为损伤组、DPI预处理组、NAC预处理组三组,以未受热损伤细胞作为对照组。CCK8比色法检测细胞增殖。荧光探针法及化学发光法观察细胞内活性氧（ROS）含量和NADPH氧化酶（Nox）活性变化,EIA检测上清液中PGE2的变化。半定量RT—PCR法检测人皮肤成纤维细胞表达的Nox亚型的mRNA水平。Westernblot法检测热损伤后Noxl蛋白水平的变化。结果热损伤明显抑制人皮肤成纤维细胞的增殖;热损伤后即刻细胞内ROS含量和Nox活性明显升高,在4h后二者均抵达峰值,而DPI预处理组ROS含量和Nox酶活性明显低于损伤组（P〈0．叭或P〈0．05）;热损伤后细胞分泌PGE2明显增高（P〈0．01）,而DPI预处理组和NAC预处理组均显著低于损伤组（P〈0．01）。RT—PCR结果提示正常人皮肤成纤维细胞表达Noxl、Nox3和Nox4三种亚型,三者表达量无明显差异（P〉0．05）。Westernblot结果显示热损伤后不同时间点Noxl的蛋白表达量逐渐升高。结论热损伤可明显抑制人皮肤成纤维细胞增殖并诱导Nox活性升高和Noxl蛋白表达增高,从而使细胞内ROS量升高,进一步引起PGE2分泌增多。     

经阴道三维超声联合断层超声显像技术在早期异位妊娠诊断中的应用

目的探讨经阴道三维超声联合断层超声显像技术(TUI)在早期异位妊娠诊断中的应用价值。方法对停经4~6周临床疑似异位妊娠的120例患者行经阴道二维及三维超声联合TUI技术检查,做出超声分型诊断;与手术病理及临床随访结果对照,对经阴道二维及三维超声联合TUI技术诊断早期异位妊娠患者的超声声像图特征及漏误诊病例图像特征进行总结分析。结果 120例患者手术病理及临床随访结果证实异位妊娠102例,宫内妊娠18例。与手术病理诊断结果及临床随诊结果对照显示:(1)输卵管妊娠92例,经阴道二维超声正确诊断80例(86.9%,80/92),漏诊8例,误诊4例;经阴道三维超声联合TUI成像正确诊断84例(91.3%,84/92),漏诊8例,无误诊病例。超声声像图示附件区类妊娠囊回声包块,呈"Donut"征或边界不清的不规则包块,多数包块边界和内部结构清晰或较清晰,包块与输卵管位置关系清晰或较清晰。超声诊断未破裂型输卵管妊娠36例,流产型43例,破裂型5例。(2)子宫角妊娠10例,经阴道二维超声正确诊断6例(60.0%,6/10),误诊4例;经阴道三维超声联合TUI成像正确诊断9例(90.0%,9/10),误诊1例。超声声像图示妊娠囊位于一侧子宫角处向外突出,经阴道二维超声显示10例中6例妊娠囊与子宫内膜不相连,4例妊娠囊周边蜕膜包绕显示不清,4例见间质线征;经阴道三维超声联合TUI成像,通过多平面断层图像,尤其冠状面清晰显示9例妊娠囊与子宫内膜不相连,妊娠囊周边蜕膜包绕不完整,6例见间质线征。(3)102例早期异位妊娠因包块小、超声显示不清,经阴道二维及三维超声联合TUI成像均漏诊输卵管妊娠8例;因宫腔内出现"假妊娠囊"结构、妊娠囊偏向一侧与宫内妊娠难以分辨等原因,经阴道二维超声误诊输卵管妊娠4例及子宫角妊娠4例,经阴道三维超声联合TUI成像后清晰显示异位妊娠包块及妊娠囊位置而明确诊断7例,仅误诊1例子宫角妊娠。结论经阴道三维超声联合TUI成像能提供更详尽的早期异位妊娠超声声像图诊断信息,减少早期异位妊娠漏误诊,经阴道三维超声联合TUI成像对早期异位妊娠超声诊断有较好的临床应用价值。     

机械损伤对人皮肤角质形成细胞氧化应激和前列腺素E2分泌的影响

目的探讨机械损伤对人皮肤角质形成细胞前列腺素E2(PGE2)分泌的影响及其可能的机制。方法将体外培养的人皮肤角质形成细胞(HaCaT)分为损伤组、NADPH氧化酶(NOX)抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)预处理组和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理组,三组细胞经划痕法建立体外机械损伤细胞模型,以未建模的HaCaT细胞作为对照组。于建模后不同时点收集损伤组、DPI预处理组和对照组的细胞及各组细胞的培养上清液,分别采用荧光探针技术和化学发光法测定细胞内活性氧(ROS)的生成和NOX活性,以酶联免疫吸附试验检测各组细胞培养上清液中前列腺素E2(PGE2)的质量浓度。结果建模后各时点,损伤组和DPI预处理组细胞内ROS生成和NOX活性均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01);DPI预处理组建模后各时点细胞内ROS生成和NOX活性均显著低于损伤组(P<0.05或P<0.01)。各组细胞培养上清液中PGE2质量浓度的检测结果显示:建模后各时点,损伤组、DPI预处理组和NAC预处理组均显著高于对照组(P<0.01),DPI预处理组和NAC预处理组均显著低于损伤组(P<0.01)。结论机械损伤后人皮肤角质形成细胞...     

免缝合光化学组织粘合术修复兔角膜穿透伤

目的 探讨一种新型的免缝合光化学组织粘合术(photochemical tissue bonding,PTB)修复角膜穿透伤的方法,并评价其疗效. 方法 60只新西兰大白兔建角膜穿透伤模型,伤后左眼用缝合法修复损伤,右眼以PTB技术固定羊膜封闭创面,伤后不同时相点观察眼前房液渗漏清况及前房形态;评价眼内压情况;取角膜组织行组织学检测,观察角膜的新生血管和瘢痕形成,比较两种方法的修复效果. 结果 两组均未见眼房水渗漏,且眼前房深浅均正常无差别;PTB组见羊膜与角膜贴合紧密.PTB治疗后0,1,7d最大眼内压分别为(531.2±49.5) mm Hg、(542.6±74.8) mm Hg、(603.9±69.1) mm Hg,明显优于缝合组[(41.3±12.7) mmHg、(142.6±25.4) mm Hg、(333.3 ±66.7) mm Hg](P＜0.01).PTB组角膜新生血管和肉芽形成在伤后14,28及90 d时明显少于缝合组. 结论 PTB结合羊膜是一种即时、有效封闭角膜穿透伤的方法,且修复效果明显优于缝合法.     

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1及其介导的活性氧在创伤修复细胞中的作用研究进展

活性氧是一类含有未配对电子的氧原子或氧原子团,主要由超氧阴离子、过氧化氢和羟自由基等组成,具有信号转导、免疫调节和激素合成等生物学功能。活性氧被认为是细胞增殖和分化过程中信号级联反应的第二信使,参与基因表达、细胞生长和细胞凋亡等生物学效应的信号转导。信号级联反应过程中的活性氧大多来源于质膜氧化酶,主要是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( NADPH)氧化酶(Nox)。Nox1是Nox蛋白家族的重要成员之一,其产生的活性氧作为信号分子,在创面修复中起重要作用。本文主要就Nox1及其介导的活性氧在表皮细胞、Fb和内皮细胞等创伤修复细胞中的作用进行综述。     

一种连续动态直接观察皮肤创口感染的小鼠模型

目的 拟建立一种稳定、可连续动态直接观察皮肤创口感染的动物模型. 方法 制作小鼠背部全层皮肤切割伤模型,即刻予以皮下缝合后按随机数字表法分为四组:A组小鼠接种50μl无菌PBS液(PBS对照组),B、C、D组(感染组)小鼠分别接种50μl含1×106、1×108和1×1010菌落形成单位(colony forming unit,CFU)/ml可发光耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin- resistant staphylococcus aureus,MRSA)菌株悬液.观察接种后每组小鼠的饮食活动,并记录12,3,5,7,9,11,14 d的平均体重及其死亡率;接种后各时相点采用以电荷耦合器件(charge - couplddevice,CCD)为基础的成像系统记录小鼠创口的荧光素发光强度;接种后24 h切取创口局部组织HE染色,观察各组小鼠创口炎症反应情况;记录每组小鼠创口愈合时间. 结果 (1)平均体重:A、B组小鼠无明显波动;C组逐渐减轻,第3天后逐渐增加,第14天增至接种前水平;D组逐渐减轻直至死亡.(2)死亡率:A、B组为零,C组第14天小鼠死亡率为10％,D组小鼠至接种后第3天死亡率为100％.(3)创口荧光素发光强度:A、B组自接种当天起均逐渐减弱,分别至第5,7天接近完全消失;C组自接种当天起至第14天无明显增强和减弱迹象;D组自接种当天起逐渐增强,且范围逐渐扩大直至死亡.(4)接种后24 h HE染色:四组小鼠创口均有炎症细胞浸润,C、D组浸润更明显.(5)创口愈合时间:A、B组分别于接种后第5,7天愈合;C组至第14天仍未愈合,且切口长度及范围未见明显扩大与减小;D组创口范围自接种当天起逐渐扩大直至死亡. 结论 小鼠皮肤全层切割伤创口接种50μl含1×108 CFU/ml可发光MRSA菌株悬液,可直接实时动态连续观测创口感染的发生与发展,该感染模型易于制作,稳定和重复性高.     

P物质对高糖条件下成纤维细胞增殖及其单核细胞趋化蛋白-1合成的调节作用

目的 探讨外源性P物质(substance P,SP)对高糖条件下人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast,HSF)增殖及其单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)合成的影响. 方法 用高糖DMEM培养基培养HSF;并用SP在不同浓度和不同时相点处理,ELISA法检测细胞上清液中MCP-1分泌水平,观察时问与剂量的时效关系;半定量RT-PCR、实时荧光定量(Real Time)-PCR、Western blot分别检测各组HSF内MCP-1 mRNA的表达和蛋白的合成;细胞增殖试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)检测不同浓度SP作用HSF后的增殖情况. 结果 经SP处理后8h可检测到MCP-1分泌增强(P＜0.05),24h达峰值(P＜0.01),在10,100 nmol/L的浓度下分泌最多(P＜0.01);SP可明显增加高糖条件下HSF MCP-1mRNA的表达和蛋白的合成,特别是在10 nmol/L的浓度下表达最为显著(P＜0.01);在10,1 000nmol/L的SP均明显促进HSF的增殖(P＜0.05). 结论 SP可促进高糖条件下HSF的增殖及MCP-1的合成,对促进糖尿病创面修复可能有一定意义.     

超声引导下细针穿刺活检对甲状腺小结节的诊断价值

目的探讨超声引导下细针穿刺活检（US-FNAB）对〈10 mm甲状腺小结节的诊断价值。方法回顾性分析105例（共计115个）最大径〈10 mm甲状腺结节患者的临床资料,评估US-FNAB细胞学结果与手术病理及临床随访结果对照。结果 115个甲状腺小结节中,细胞学诊断恶性24例,可疑恶性9例,良性68例,不确定4例,不满意10例。经术后病理或临床随访,恶性结节26个,良性结节89个。US-FNAB诊断〈10 mm甲状腺小结节的灵敏度为88.9%（24/27）,特异度为90.0%（79/88）,准确率为90.0%（103/115）。结论 US-FNAB对〈10 mm甲状腺结节诊断的准确性好,具有较高的临床实用价值。