可体内、外示踪的BMP2真核表达载体的构建和表达

目的 拟构建双顺反子增强型绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP2)真核表达载体,为其在真核细胞体内外示踪定位打下基础.方法 以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法获得BMP2片段,将其分别与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的重组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定.将质粒转染CHO细胞后Western Blot检测BMP2蛋白表达,用RT-PCR检测BMP2mRNA表达.结果 琼脂糖电泳显示PCR产物为一条长约1216 bp的带,重组表达载体pSELECT-GFP zeo-hBMP2经双酶切可得到约1216 bp的片段,测序证实与Genebank中hBMP2序列完全相符,重组表达载体脂质体法转染CHO细胞48～72 h后荧光显微镜下证实转染成功,经RT-PCR证实CHO细胞中存在BMP2基因表达,采用免疫荧光化学方法证实载体中CHO细胞表达BMP2蛋白.经Western Blotting鉴定重组蛋白为分泌蛋白,相对分子质量在17×103左右.结论 成功构建可体内外示踪增强含双顺反子绿色荧光蛋白人BMP2真核表达载体.     

后路经皮脊柱内镜减压术联合桃红四物汤治疗血瘀气滞型神经根型颈椎病的效果观察

目的：探讨后路经皮脊柱内镜减压术联合桃红四物汤治疗血瘀气滞型神经根型颈椎病(CSR)的临床效果。方法：选取2020年7月-2021年7月北京市昌平区中西医结合医院收治的70例血瘀气滞型CSR患者作为研究对象，根据随机数字表法分为对照组与观察组，各35例。对照组采用后路经皮脊柱内镜手术治疗，观察组在对照组基础上配合口服桃红四物汤治疗，比较两组疼痛情况、颈椎功能、手术优良率。结果：观察组术后1、12个月视觉模拟评分法评分低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；观察组术后1、12个月日本骨科协会评估治疗分数高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；两组手术优良率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：后路经皮脊柱内镜减压联合桃红四物汤治疗血瘀气滞型CSR的效果显著，安全可靠，可以有效缓解患者术后疼痛，改善颈椎功能。     

含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2表达载体的构建

目的:骨形态发生蛋白2是目前研究最为广泛、诱导成骨活性最强的骨形态发生蛋白之一.实验拟构建绿色荧光蛋白标记的人骨形态发生蛋白2(human Bone Morphogenetic Protein-2,hBMP2)真核表达载体,为在真核细胞的高效表达和基因治疗打下基础.方法:实验于2006-03/2007-03在天津医科大学卫生部激素与发育重点实验室完成.①实验材料:含完整人骨形态发生蛋白2基因片段的pcDNA3.1/CT-hBMP2质粒由李曦铭博士惠赠;双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS(Invivogen公司),Zeo(Invivogen公司):pTA2R-T Easy(鼎国生物技术有限公司).②实验过程及评估:以重组质粒pcDNA3.1/CT-hBMP2为模板,结合已设计好的特异性引物,采用聚合酶链反应方法亚克隆出人骨形态发生蛋白2目的片段,将该片段分别与克隆载体pTA2-T-easy和双顺反子真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,转化入感受态DH5α细胞中,通过筛选得到含有绿色荧光蛋白的蘑组表达载体pSELECT-GFPzeo-hBMP2,并进行测序鉴定.结果:①聚合酶链反应获得长度约1 216 bp的目的片段,与预期片段相符.②经与克隆载体pTA2-T-easy和真核表达载体pSELECT-GFPzeo-MCS连接,筛选及序列分析后,证实所插入目的片段与GenBank检索的骨形态发生蛋白2cDNA序列(NM-001200)100%匹配.结论:成功构建含双顺反子绿色荧光蛋白人骨形态发生蛋白2真核表达载体.     

独活寄生汤薰洗配合针灸治疗糖尿病周围神经病变的效果核心探究

目的：探讨糖尿病周围神经病变（Diabetic peripheral neuropathy,DPN）疾病特点,研究中医独活寄生汤薰洗配合针灸治疗价值。方法：从2019年2月至2020年5月收治的患者中抽取研究对象,从中选取80例DPN疾病患者,按照患者入院先后顺序进行分组治疗。两组患者入院后,在采取降糖等常规治疗的基础上,对照组患者实施甲钴胺治疗,观察组患者实施独活寄生汤薰洗+针灸治疗,每组各40例。对比两组DPN患者的治疗效果、血清指标丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathione peroxidase,GSH-Px）以及感觉神经（sense nerveconduction velocity, SNCV）传导速度、运动神经（motornerve conduction velocity, MNCV）传导速度、生活质量、中医症候积分变化情况。结果：观察组DPN患者治疗总有效率92.50%明显高于对照组的60.00%,差异显著（P <0.05）;经过治疗后,两组DPN患者的MDA、GSH-Px、SNCV、MNCV指标水平改善,观察组有优势...     

身痛逐瘀汤联合椎板间入路脊柱内镜下椎间盘摘除术治疗血瘀气滞型L5S1腰椎间盘突出症的效果

目的：探讨身痛逐瘀汤结合椎板间入路脊柱内镜下椎间盘摘除术(PEID)治疗血瘀气滞型L₅S₁腰椎间盘突出症(LDH)的临床效果。方法：选取2020年9月-2021年9月北京市昌平区中西医结合医院收治的80例血瘀气滞型L₅S₁LDH患者作为研究对象，以随机数字表法分为对照组与观察组，各40例。对照组采用PEID手术治疗，观察组在对照组基础上配合口服身痛逐瘀汤治疗，比较两组疼痛评分、功能障碍评分、手术优良率。结果：治疗前，两组视觉模拟评分法(VAS)评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)；术后1、3个月，两组VAS评分均低于治疗前，且观察组低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前，两组日本骨科协会评估治疗分数(JOA)评分比较，差异无统计学意义(P>0.05)；术后1、3个月，两组JOA评分均高于治疗前，且观察组高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。两组手术优良率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：身痛逐瘀汤联合PEID治疗血瘀气滞型L     

颈椎后纵韧带骨化症手术治疗进展

颈椎后纵韧带骨化(Ossification of the posterior longitudinal ligament of the cervical spine,OPLL)是一种原因未明的病理现象,表现为颈椎后纵韧带内异位骨形成。当骨化块压迫脊髓、神经根或血管引起临床症状时叫颈椎后纵韧带骨化症。近年来,有关手术治疗OPLL症的文献报道日益增多,手术方式亦不断改进,但每种方法均有其优劣之处及适应范围。本文就OPLL症的手术治疗进展作一综述。     

生物材料在脊柱外科中的应用

近年来，随着脊柱外科的蓬勃发展，有关生物材料在脊柱中的应用的文献报道日益增多，材料的性能亦不断改进，但每种材料均有其优劣之处及适应范围。本文就生物材料在脊柱外科中的应用进展作一综述。     

身痛逐瘀汤敷贴治疗气滞血瘀型膝骨关节炎的临床观察

目的:观察身痛逐瘀汤敷贴治疗气滞血瘀型膝骨关节炎(KOA)的临床疗效。方法:选取60例气滞血瘀型KOA患者,随机分为对照组和治疗组,每组30例。对照组给予常规治疗,治疗组在此基础上加用身痛逐瘀汤敷贴治疗,两组患者均治疗2周。比较两组患者治疗前后及随访3个月时的疼痛数字分级法(NRS)评分及膝骨关节炎严重性指数(ISOA)。结果:治疗后及随访3个月,治疗组NRS评分及ISOA评分均低于同期对照组(P<0.05)。结论:身痛逐瘀汤敷贴治疗可明显缓解气滞血瘀型KOA患者的疼痛症状,提高日常生活能力。     

PLDD结合针灸治疗腰椎间盘突出症临床观察

<正>腰椎间盘突出症是临床常见病,目前我国体力劳动者中占15%~20%。腰椎间盘突出的治疗方法主要分为手术治疗、保守治疗和微创治疗。微创介入技术治疗是应用现代高科技手段进行的一种微创性治疗,该类方法治疗腰椎间盘突出症具有不开刀、创伤小、恢复快、效果好的优点,但部分患者会遗留临床症状。笔者采用PLDD结合针灸治疗腰椎间盘突出症患者152例,效果显著,现报道如下。     

可体内、外示踪的BMP2真核表达载体的构建和表达

Objective To construct green fluorescent protein (GFP)-labeled pSELECT-GFP zeohBMP2 eukaryotic expression vector. Methods The encoding fragment of hBMP2 gene was obtained from a recombinant plasmid pcDNA3.1/CT-hBMP2 by using polymerase chain reaction (PCR). hBMP2 gene was inserted into pTA2-T-easy and pSELECT-GFPzeo-MCS eukaryotic expression vector, and then transferred into competence DHSα cells. After screening, pSELEC-GFPzeo-hBMP2 was obtained and identified by sequence analysis. The recombinant vector pSELECT-GFP zeo-rhBMP2 was transfected into CHO cells. The successful trasfection was verified by fluorescence microscope in 48-72 hours. The RT-PCR and immunofluorescence was used to confirm the hBMP2 expression. Western Blotting was used to detect the secretion of hBMP2.Results A 1216 bp fragment was obtained by PCR, the same as expectant fragment. The recombined pSE-LECT-GFPzeo-hBMP2 eukaryotic expression vector was identified by restriction mapping and sequence analysis. The results were identical with that of reported hBMP2 sequence (Genebank NM-001200). The successful transfection was verified by fluorescence microscope in 48-72 hours. The stable expression in eukaryotic cells was confirmed by immunofluorescence and RT-PCR which showed an obvious band between 1000-2000 bp. Western Blotting identified the immunogenicity of recombinant human BMP2 with the molecular weight of about 17×103. Conclusion The pSELECT-GFPzeo-hBMP2 eukaryotic expression vector was constructed successfully.