rhIGF-1对成骨细胞增殖、分化及骨保护素、骨保护素配体基因mRNA表达的影响

目的 观察不同剂量rhIGF-1对成骨细胞增殖，分化及骨保护素，骨保护素配体mRNA基因表达的影响，为明确骨保护素，骨保护素配体在骨质疏松症发病的作用机理及rhIGF-1在临床中应用提供实验依据。方法 取2代培养的大鼠成骨细胞，在rhIGF-1为0ng/ml,10ng/ml,20ng/ml,50ng/ml的浓度中培养。观察细胞的生长及钙结节的形成，MTT法，碱性磷酸酶（ALP），骨钙素（OCN）测定细胞增殖和分化，RT－PCR测定rhIGF-1对成骨细胞骨保护素，骨保护素配体基因mRNA表达的影响。结果 成骨细胞在7d可铺满瓶壁，30d可形成钙结节，rhIGF-1可促进成骨细胞的增殖，ALP和OGN的分泌，促进骨保护素，骨保护素配体基因的表达，以促进骨保护素表达明显，在rhIGF-1为10ng/ml时作用明显。结论 rhIGF-1可促进大鼠成骨细胞的增殖，分化，及骨保护素，骨保护素配体基因mRNA的表达，骨保护素mRNA表达显。rhIGF-1可能通过影响骨保护素，骨保护素配体而调节成骨细胞破骨细胞的平衡，使骨重建，从而防治骨质疏松症。     

三七总甙对成骨细胞增殖、分化及0PG表达影响的研究

目的 观察不同剂量的三七总甙对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化及OPG表达的影响，探索体外作用的机制和最佳剂量。方法 第2代培养的成骨细胞分别加入终浓度为0μg／ml、10μg／ml、50μg／ml、100μg／ml的三七总甙，观察细胞生长、钙结节形成情况，碱性磷酸酶(ALP)染色、分泌量检测，骨钙素(OCN)检测，MTT法观察成骨细胞增殖，免疫组化SP法结合阳性细胞计数法检测成骨细胞OPG表达。结果 成骨细胞在7d可铺满瓶壁，30d可形成钙结节，三七总甙可促进成骨细胞的增殖ALP、OCN的分泌，以50μg／ml时作用明显。三七总甙可促进成骨细胞OPG的表达，在50μg／ml时作用明显。结论 三七总甙可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化，促进成骨细胞OPG的表达，以50μg／ml时作用明显。     

TGF-β对成骨细胞增殖、分化及OPG基因mRNA表达的影响

目的 观察不同剂量TGF—β对成骨细胞增殖、分化及OPGmRNA基因表达的影响，明确其作用机理。方法 取新生24h内的Wistar大鼠颅盖骨分离成骨细胞，在TGF—β为0μg／L、1μg／L、10μg／L、100μg／L的浓度中培养。对细胞的生长及钙结节的形成观察其生长状态，经MTT法测定细胞增殖，细胞分化由碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平测定得到。用RT—PCR技术测定TGF—β对成骨细胞OPG基因mRNA表达的影响。结果 成骨细胞在7d可铺满瓶壁，30d可形成钙结节，TGF—β可促进成骨细胞的增殖、ALP和OCN的分泌，以TGF—β为1μg／IJ时作用明显。TGF—β可促进OPG基因的表达在为1μg／L时作用明显。结论 1μg／L可促进大鼠成骨细胞的增殖、分化，促进成骨细胞OPG基因mRNA的表达。TGF—β可能通过影响OPG而调节成骨细胞、破骨细胞的平衡，使骨重建。     

失重状态下共育大鼠成骨与破骨细胞中护骨素表达的变化

目的:通过观察失重状态下共育的大鼠成骨与破骨细胞中护骨素的表达及其变化特点,探讨失重状态下骨结构的生物学变化。方法:实验于2004-07/12在哈尔滨医科大学附属二院科研中心完成。体外分离培养1周龄15只Wistar大鼠的颅骨成骨细胞及四肢骨破骨细胞,随机分为4组:成骨细胞+破骨细胞共育组,成骨细胞组,失重下成骨细胞+破骨细胞共育组,失重下成骨细胞组。前两组为空白对照。后两组均在回转加速器中48h。倒置相差显微镜下观察鉴定成骨细胞、破骨细胞,采用多聚酶链反应方法测定各组护骨素的表达。结果:①护骨素在各种情况下的表达:总RNA电泳条带28s,18s,5s,表明RNA完整。吸光度比A260/A280在1.8～2.0,失重共育组护骨素较非失重共育组明显低表达,失重单纯成骨细胞组护骨素表达较失重共育组明显低表达(P<0.05)。单纯成骨细胞组明显低于失重单纯骨细胞组(P<0.05)。②5天后成骨细胞与破骨细胞在倒置相差显微镜下观察:成骨细胞呈多角形、三角形,胞浆丰富,邻近细胞中突起与之相联,胞核大,圆形,含一两个核仁;破骨细胞细胞核核大,4～6个,胞浆伸出丝状或片状伪足。结论:失重状态下共育成骨与破骨细胞中护骨素低表达,成骨作用减弱,说明力学作用参与了成骨细胞与破骨细胞之间的信号传递。     

白术汤对类风湿性关节炎患者免疫功能影响的临床研究

目的：从细胞免疫、体液免疫及分子免疫方面，研究探讨白术汤对类风湿性关节炎的免疫调节作用，阐明白术汤治疗类风湿性关节炎的作用机理。方法：将患者分为治疗组，对照组以及正常对照组，分别于治疗前后检测各组IL-1、TNF-α，IgG，IgA、IgM、RF、CD^ 、CD4^ ,CD8^ ,CD4^ /CD8^ 等指标，同时进行组间对照和治疗前后对照分析，结果：白术汤能显著降低血清内升高的TNF-α，对IL——1影响不显著，能显著提高血清内CD8^ 的含量，降低血清IgG,IgA,IgM的含理，降低RF的阳性率，结论：白术汤能纠正免疫失调，抑制体液免疫反应，减轻其对关节，滑膜的破坏，清除抗原，抑制抗体的产生，减少免疫复合物的形成，调节免疫系统失衡而发挥临床疗效。     

腺病毒介导入BMP-2对骨髓间质干细胞成骨能力的影响

目的　探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白 (BMP 2 )转染对体外培养骨髓间质干细胞(MSCs)成骨能力的影响。　方法　取日本大耳白兔 2 0只自双侧股骨大转子取材培养MSCs ,左侧来源细胞为实验组 ,右侧为对照组。以复制缺陷重组腺病毒介导人BMP 2基因转染MSCs后 ,用ALP检测两组细胞的ALP活性 ;骨钙素RT PCR检测两组细胞Ⅰ型胶原的表达 ;BGP放免分析检测两组细胞的骨钙素含量。　结果　转基因组和对照组ALP分泌量 (U/L)分别为 7 0 1± 0 5 9、5 2 3± 0 5 5 ;RT PCRⅠ型胶原的表达为 1 3 5± 0 12、3 65± 0 3 7;骨钙素 (ng/ml)为 2 4 5 0± 0 93和 15 45± 1 81。两组间差异均有显著性 (P <0 0 5 )。　结论　用腺病毒介导人BMP 2蛋白作用后的MSCs具有成骨细胞的生物学特性。腺病毒介导人BMP 2转基因可以提高MSCs的体外成骨能力。     

细胞因子、激素调节骨保护素和骨保护素配体基因表达及破骨细胞功能的研究进展

破骨细胞(Osteoclast OC)是骨吸收细胞，已知其功能与分化的调节是由成骨细胞(Osteoblast OB)完成的。发现了其调节的新的分子学机理。破骨细胞的分化依赖于成骨／基质细胞，在研究破骨细胞的过程中发现了一种由成骨／基质细胞产生的因子一骨保护素(Osteoporotegerin OPG)及骨保护素配体(Re-     

壮骨液对激素致股骨头缺血性坏死大鼠血清胆固醇和甘油三酯的影响

通过对壮骨液防治激素所导致的大白鼠股骨头缺血性坏死的动物模型进行了研究.实验分为壮骨液组、激素对照组、正常对照组,以不同时间对其体重的变化、血清胆固醇、甘油三酯肝脏及股骨头的病理进行了观察.实验结果表明:壮骨液对激素所导致的皮下脂肪的分解,血清总胆固醇、甘油三酯的升高具有较好的防治作用.     

Ad-BMP-2促进兔骨髓间质干细胞成骨转化的研究

探讨用携带有人BMP 2基因片段的复制缺陷重组腺病毒 (Ad BMP 2 )转染对体外培养MSCs成骨转化的影响。取日本大耳白兔 2 0只自双侧股骨大转子取材培养MSCs,左侧来源细胞为实验组 ,右侧为对照组。以复制缺陷重组腺病毒介导人BMP 2基因转染MSCs后用RT PCR法及免疫组化染色证实转基因MSCs的BMP 2蛋白表达情况 ,通过改良Gomori钙钴法及ALP检测试剂盒检测两组细胞的ALP活性 ;通过RT PCR及Westernblot检测两组细胞Ⅰ型胶原的表达 ;通过BGP放免分析试剂盒检测两组细胞的OCN含量 ;并通过透射电镜观察转基因前后MSCs超微结构的变化。实验证实用Ad BMP 2转染的MSCs具有成骨细胞的结构特征和生物学特性。定量分析显示转基因组MSCs培养上清中ALP活性为 ( 7 0 1± 0 5 9)U L ,对照组为 ( 5 2 3± 0 5 5 )U L。Ⅰ型胶原表达的半定量分析显示转基因组为 1 3 5± 0 12 ,对照组为 3 65± 0 3 7。OCN含量在转基因组为 ( 2 4 5 0± 0 93 ) μg L ,对照组为 ( 15 45± 1 81) μg L。认为Ad BMP 2转染可以提高MSCs的体外成骨能力     

转基因骨髓间充质干细胞复合纤维蛋白凝胶修复兔桡骨缺损

目的：探讨以复制缺陷重组腺病毒介导人骨形态发生蛋白(BMP)-2转基因的骨髓间充质干细胞(MSCs)复合纤维蛋白凝胶来修复节段性骨缺损的可行性。方法：于14只日本大耳白兔双侧桡骨中段造成10mm骨缺损，采用四种方法进行处理：A组植入转基因MSCs与纤维蛋白凝胶的复合物；B组植入单纯MSCs与纤维蛋白凝胶的复合物；C组植入纤维蛋白；D组不做处理，留作空白对照。每组7条桡骨。术后12周进行组织学、放射学检查及生物力学检测。结果：A组缺损区在成骨活跃程度、骨再生量和再生髓腔结构等方面均显著优于B组，其骨缺损得到了较彻底的修复。C、D两组均不能产生骨性愈合。结论：转基因MSCs复合纤维蛋白凝胶修复节段性骨缺损可达到较好的效果。