组织途径抑制因子-2基因重组腺病毒载体的构建及其抑制喉鳞癌侵袭的研究

目的 构建载有TFPI-2基因的重组腺病毒载体,探讨其对喉癌侵袭能力的抑制作用.方法 将TFPI-2 cDNA克隆于腺病毒载体PSG-CMV,得到重组质粒PSG-TFPI-2.将质粒PSG-TFPI-2与5型腺病毒共转染至293细胞,生成带有TFPI-2基因的重组腺病毒载体.重组腺病毒质粒经过293细胞的扩增和CsCl的纯化,感染Hep-2细胞.运用侵袭实验观察感染后的喉癌细胞侵袭能力的变化.结果 经酶切和测序等方法的鉴定,证实了载体构建的正确性,病毒滴度为2.8×1010PFU/mL.侵袭实验显示转染Ad-TFPI-2的喉癌细胞侵袭能力下降.结论 成功构建带有TFPI-2的重组腺病毒载体,运用Ad-TFPI-2重组腺病毒能够有效地抑制喉癌细胞的侵袭能力.     

MMP-2与喉癌关系的研究进展

基质金属蛋白酶（MMPs）是Zn2+家族依赖性蛋白酶,能够裂解所有细胞外基质（ECM）。ECM 的降解参与喉癌的侵袭和转移,因此MMP-2在喉癌局部血管生成,侵袭转移等过程中可能发挥重要作用。     

MMP-9小干扰RNA重组慢病毒抑制喉癌体内生长的实验研究

目的:探讨重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因沉默对喉鳞状细胞癌移植瘤生长的抑制作用。方法:构建喉癌移植瘤模型,采用RNA干扰技术,瘤内注射MMP-9-RNAi-Lentivirus重组慢病毒,以空病毒载体作为对照,观察抑瘤效果。运用Western-blot方法检测移植瘤中MMP-9蛋白表达。运用免疫组织化学方法检测移植瘤中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,评估其对细胞增殖的影响。结果:重组慢病毒MMP-9-RNAi-Lentivirus治疗后,治疗组裸鼠移植瘤平均重量为(1.484±0.391)g,明显小于对照组(2.618±0.465)g(P<0.05)。治疗组肿瘤平均体积为(1.177±0.270)cm3,明显小于对照组(2.034±0.366)cm3(P<0.05),抑瘤率为43.32%。Western-blot结果显示治疗组MMP-9蛋白表达阴性7例,弱阳性3例,对照组MMP-9蛋白表达均阳性。免疫组织化学显示治疗组PCNA指数为(55.41±8.77)%,显著低于对照组(77.04±6.91)%(P<0.05)。结论:MMP-9-RNAi-Lentivirus重组慢病毒能有效抑制喉癌移植瘤生长及增殖。     

MMP-9基因RNAi重组慢病毒的构建及其对喉癌细胞侵袭的抑制

目的构建基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒,观察其对喉癌细胞体外侵袭的抑制作用。方法筛选确定的MMP-9基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与含H1启动子和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的pLVTHM载体连接产生LV2shMMP-9慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用重组慢病毒体外转导喉癌细胞,Southern印迹法检测喉癌细胞MMP-9蛋白表达。Boyden侵袭小室法实验观察转导后的喉癌细胞侵袭能力的变化。结果成功构建MMP-9 shRNA的慢病毒载体LV2shMMP-9,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为8×10~(10)TU/L。转导MMP-9 siRNA的喉癌细胞MMP-9蛋白表达阴性。MMP-9 siRNA转导后喉癌细胞体外侵袭能力下降。结论成功构建人MMP-9基因RNAi慢病毒载体,MMP-9基因沉默对喉癌细胞体外侵袭有明显的抑制作用。     

单细胞测序技术在头颈部恶性肿瘤中的研究与发展

单细胞测序是针对单个细胞的遗传信息进行测序,能更好地认识细胞之间的差异,解决了普通测序带来的异质性问题。头颈部恶性肿瘤已经成为癌症相关疾病死亡的第六大病因,单细胞测序技术应用于揭示头颈部恶性肿瘤的异质性、描述头颈部恶性肿瘤的微环境、评估头颈部恶性肿瘤的侵袭、转移和评价治疗效果、评估治疗抵抗、探究循环肿瘤细胞的作用等方面,对头颈部恶性肿瘤发生发展的研究和个体化治疗方案的探索有着巨大的推动作用。本综述旨在概述单细胞测序的机理和意义,总结其在头颈部恶性肿瘤中的研究进展。     

转化生长因子β1在慢性鼻窦炎的表达

目的 探讨转化生长因子β1在慢性鼻窦炎组织中的表达情况.方法 采用逆转录-聚合酶链反应方法和免疫组化方法检测56例慢性鼻窦炎患者鼻窦黏膜组织中转化生长因子β1的mRNA和蛋白表达情况.结果 转化生长因子β1在慢性鼻窦炎组织表达较下鼻甲黏膜组织增高.无论在mRNA水平还是蛋白水平的相对表达量均随着慢性鼻窦炎的病程发展显著增加,呈正相关.结论 转化生长因子β1的表达增高,可能是促进慢性鼻窦炎发展和复发的一个重要因素.     

反义microRNA-21慢病毒表达载体的构建及对喉癌细胞的增殖抑制作用

目的：克隆反义微小RNA hsa-miR-21并构建其慢病毒表达载体,观察反义寡核苷酸重组慢病毒（ASO-miR-21）对喉癌细胞增殖的调控作用。方法：针对hsa-miR-21核苷酸序列,设计并合成mir-21反义寡核苷酸,将pGCSIL-GFP Vector经双酶切后连接产生pGCSIL-GFP-miR-21慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。pGC-LV-miR-21、pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒共转染细胞293T,包装慢病毒。以293T细胞绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的表达水平测定病毒滴度。采用MTT法及克隆形成实验检测反义miR-21（ASO-miR-21）重组慢病毒对喉癌细胞增殖能力的影响。结果：成功构建反义hsa-miR-21的慢病毒表达载体,采用ASO-miR-21抑制喉癌细胞内高水平表达miR-21的活性后,可显著抑制喉癌细胞增殖。结论：成功构建反义miR-21的慢病毒表达载体,ASO-miR-21可以明显抑制喉癌细胞增殖。