HBc颗粒样呈现载体研究进展

HBc核壳是由240或180个HBc单体组成的对称性颗粒，免疫原性强，是机体CTL识别的主要靶抗原之一，且具有高表达率、高效装配的特点，作为颗粒样呈现载体能于颗粒表面呈现融合抗原肽，维持天然构象，并增强其免疫原性，在HIV、HBV、HCV、疟原虫等疫苗研究中得到广泛研究与应用，是具有巨大研究潜力和应用价值的疫苗载体，本就HBc核壳结构特点及其作为颗粒样免疫载体的应用作一综述。     

疟疾诊断靶抗原的研究进展

疟疾是广泛流行于热带、亚热带及温带地区的一种重要虫媒传染病 ,极大地威胁着人类的健康。疟疾的早期诊断和早期正规治疗是 WHO和我国疟疾控制的研究重点 ,其意义在于不仅能够降低重症病人和死亡的发生 ,还能防止其传播 ,延缓疟原虫对抗疟药产生抗性[1 ] 。疟疾流行区由于熟练镜检技术人员及设备缺乏 ,仅依靠传统厚薄血膜镜检法已越来越不能适应当前疟疾诊断的需要[2 ,3 ] 。 2 0世纪 80年代以来随着分子生物学的发展而出现的基因诊断技术 (分子杂交[4] 、PCR[5] 、套式 PCR[6 ] 、荧光定量 PCR[7] 等 ) ,显示了较高的敏感性和特异性 …     

HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞中的转染与表达

目的 观察HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞株HepG2细胞内表达情况。方法 将构建的HBc与HBV多表位复合基因真核表达质粒pHBcMep以Lipofectamine介导转染HepG2细胞，通过间接免疫荧光、Western-blot检测表达产物。结果 经G418筛选的阳性转染细胞经间接免疫荧光染色后在紫外光激发时发出明显的荧光，而末转染质粒或转染pcDNA3．1的HepG2细胞则无明显荧光。Western-bot结果显示表达产物约为33kDa，并能与抗preS2多抗特异性结合。结论 HBc与HBV多表位复合基因在肝癌细胞内获得正确表达。     

HBV多表位复合基因在NS-1细胞的表达

目的 研究HB4颗粒为呈现载体的阳V多表垃复合基因在哺乳动物细胞NS-l内的表达。方法 PCR扩增HBc 1-72aa及93-183aa编码序列并合成HBV多表位复合基因，定向克隆至pcDNA3．1( )。经双酶切及核苷酸序列测定等方法筛选阳性克隆。阳性质粒以Lipofetamine介导转染NS-l细胞，通过ELISA及间接免疫荧光等方法检侧细胞表达产物。结果 双酶切及测序结果证实阳性质粒正确克隆了约890bp的HBc与HBV多表位复合基因的杂合基因。重组于成功转染NS-l细胞并表达HBc-Mep融合蛋白。结论 HBc颗粒为呈现载体的HBV多表位复合基因在哺乳动物细胞NS-l内正确表达目的蛋白。为研究pHBc-Mep作为DNA疫苗的免疫活性奠定基础。为后期检测核酸疫苗pHBcMep的细胞免疫效果提供靶细胞。     

稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株的筛选与鉴定

目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株。方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测、鉴定重组细胞表达产物。结果筛选所得稳定表达细胞株经RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测均呈阳性反应,而阴性对照及空白对照未出现相应阳性反应。结论筛选获得稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组细胞株,命名为NS/HBc-Mep。为建立HBc-Mep特异的cELISA及CTL活性测定等实验方法提供可靠的靶细胞。     

酸碱对HiCN法测定Hb的影响

酸碱对ＨｉＣＮ法测定Ｈｂ的影响周道银，徐玉莲，田泽维（上海长海医院临床实验诊断科，上海２００４３３）ＨｉＣＮ法是ＩＣＳＨ推荐，经ＷＨＯ确定的参考方法。国内将该法作为Ｈｂ测定的首选方法。我们在应用中发现，因试管不洁、试剂被酸、碱污染等因素往往造成较大的...     

治疗性乙肝疫苗研究进展

治疗性疫苗是指能打破慢性感染者体内免疫耐受、重建免疫应答的新型疫苗,以诱导细胞免疫应答为主,是抗病毒、抗肿瘤治疗新手段.乙肝治疗性疫苗研究在多分子蛋白疫苗、抗原抗体复合物、表位疫苗及DNA疫苗方面均取得一定进展,部分新型疫苗甚至能部分清除肝细胞内cccDNA,为治疗慢性乙肝提供了新的手段.     

颗粒性HBV多CTL表位基因诱导BALB/c小鼠的免疫应答研究

目的：研究含HBV多CTL表位的杂合HBc基因免疫BALB/c小鼠所诱导的免疫应答.方法：构建以HBV多CTL表位取代MIR区基因的杂合HBc基因疫苗（pHBcMep）并以肌肉注射方式免疫BALB/c小鼠,ELISA、流式细胞术、LDH释放法等分别检测血清特异性抗体与淋巴细胞分泌的IFN-γ水平、CD4^＋/CD8^＋T细胞比例变化及特异性CTLs活性等免疫应答指标.结果：颗粒性杂合HBc基因疫苗pHBcMep免疫BALB/c小鼠诱导明显抗体应答,末次免疫后2周,特异性抗preS2抗体阳性率达100%（12/12）,最高效价1∶1 000,同时诱导淋巴细胞分泌IFN-γ能力增强和刺激CTLs活化,其杀伤活性达16 IU30,CD4^＋/CD8^＋T细胞比例明显升高,且诱导明显回忆反应.结论：颗粒性HBV多CTL表位基因疫苗pHBcMep具有良好免疫原性,能迅速诱导高活性体液和细胞免疫应答及回忆反应.     

通过靶向抑制枯氏锥虫gp90的表达而增加其侵染力

研究表明,枯氏锥虫后锥鞭体的一期特异性gp90表面糖蛋白的表达,对其入侵哺乳动物细胞具有抑制作用。本文作者利用反义核酸技术,通过对gp90的合成抑制对这一现象进行了研究。 由于gp90基因在基因组中呈多拷贝,不     

HCVC区与HBc融合蛋白在大肠杆菌中表达及鉴定

目的 HCV C119与HBc融合蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定。方法 PCR扩增HCV C1-119编码序列并取代HBc脊区基因，杂合HBc基因定向克隆至pET28b Nhe Ⅰ／Xho Ⅰ位点，经双酶切及核酸序列测定筛选、鉴定阳性克隆。工程菌BL21(RIL)-pET28-BCc经IPTG诱导后，10％SDS-PAGE电泳及Western blot检测、鉴定目的蛋白。结果 重组子经Nhe Ⅰ／Xho Ⅰ双酶切获得约880bp目的基因片段，DNA序列测定证实HCV C119基因正确插入并取代HBc脊区基因，杂合基因与HBV adr亚型及HCV日本株相应序列同源性超过97％，工程菌BL21(RIL)-pET28-BCc经IPTG诱导后表达约33kDa目的蛋白，并与HCV血清呈阳性反应。结论 正确克隆、表达了HCV C119与HBc融合蛋白pBCc。