半夏叶片总RNA四种提取方法及效果的比较

目的 针对三叶半夏成熟叶片化学成分复杂,富含多糖、酚类及其他多种化学物质的特点,选择优化一种简便、经济、高效的半夏成熟叶片高质量总RNA提取方法.方法 用4种不同的RNA抽提方法如异硫氰酸胍法、皂土法、CTAB-LiCl法和改进的SDS/酚法提取总RNA,通过电泳、紫外分光光度计检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行分析比较.结果 4种方法均能从半夏成熟叶片中提取到总RNA.其中皂土法的提取过程只需3～4h,是其他3种提取方法所用时间的一半.提取1g叶片的成本只有其他3种方法的1/13～1/14.此法提取的总RNA 18S、28S带型清晰无弥散,完整性好,无严重的蛋白质和其他杂质污染,A260/A280为1.8～2.0,A260/A230大于2.0,且总RNA的产率高,为365.744 μg/g鲜重,提取的总RNA适用于RT-PCR试验.结论 皂土法提取的RNA完全适用于DDRT-PCR、Northern blotting、cDNA文库构建等分子生物学研究,是一种快速、经济,适于抽提半夏总RNA的好方法.     

半夏叶片总RNA四种提取方法及效果的比较

目的 针对三叶半夏成熟叶片化学成分复杂,富含多糖、酚类及其他多种化学物质的特点,选择优化一种简便、经济、高效的半夏成熟叶片高质量总RNA提取方法.方法 用4种不同的RNA抽提方法如异硫氰酸胍法、皂土法、CTAB-LiCl法和改进的SDS/酚法提取总RNA,通过电泳、紫外分光光度计检测以及RT-PCR验证等对提取结果进行分析比较.结果 4种方法均能从半夏成熟叶片中提取到总RNA.其中皂土法的提取过程只需3～4h,是其他3种提取方法所用时间的一半.提取1g叶片的成本只有其他3种方法的1/13～1/14.此法提取的总RNA 18S、28S带型清晰无弥散,完整性好,无严重的蛋白质和其他杂质污染,A260/A280为1.8～2.0,A260/A230大于2.0,且总RNA的产率高,为365.744 μg/g鲜重,提取的总RNA适用于RT-PCR试验.结论 皂土法提取的RNA完全适用于DDRT-PCR、Northern blotting、cDNA文库构建等分子生物学研究,是一种快速、经济,适于抽提半夏总RNA的好方法.     

半夏试管块茎银染mRNA差异显示条件的建立及优化

目的：建立半夏试管小块茎DDRT-PCR反应最佳体系，为进一步研究半夏试管小块茎相关基因表达提供技术参考。方法：以半夏试管苗的叶柄﹑试管小块茎为材料，利用正交试验设计，研究模板。Mg²⁺，dNTPs，引物和DNA聚合酶等因素，对DDRT-PCR反应体系的影响。结果与结论：20 μL 的反应体系中含有dNTPs 150 μmol·L^-1，Taq酶0.6 U，锚定引物2 μmol·L^-1 ,随机引物1 μmol·L^-1，Mg²⁺ 2.5 mmol·L^-1，2 μL 10×buffer和2.5 μg的cDNA模板。各因素影响程度依次为Taq酶＞cDNA 模板＞dNTPs＞Mg²⁺＞引物。     

脑性瘫痪幼鼠脑中γ-氨基丁酸A受体mRNA表达变化

目的：探讨缺血缺氧窒息脑性瘫痪(以下简称脑瘫)幼鼠脑中γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABAA)受体α1,β2亚单位mRNA的变化规律，及脑瘫形成的生物学机制。方法：应用RT-PCR方法分别检测大鼠缺血缺氧后不同时间(2，12，24，48，96h)大脑、海马中GABAA受体α1,β2亚单位mRNA表达情况。结果：正常对照鼠脑内GABAA受体α1,β2亚单位的mRNA广泛表达；脑瘫组单位面积(mm^2)皮质及海马GABAA受体α1mRNA阳性细胞数在窒息后12h分别增加20％和34％，96h分别增加57％和75％与对照组比F=7、22，3、23，P&;lt;0、05或0、01；单位面积(mm^2)皮质及海马GABAA受体132mRNA阳性细胞数窒息后2h分别下降19％和34％与对照组比F=7、12，P&;lt;0、05，12h分别下降34％和46％与对照组比F=2．56，P&;lt;0．01，24h恢复正常。结论：GABAA受体α1,β2mRNA的变化可能为脑瘫形成的重要原因。     

设乡镇级专职药品检查员加强基层药品管理

山东省曲阜市辖8乡5镇,495个行政村;56万人口。有1个药厂,7个医药经营批发部,18个医疗单位,680个村卫生室及25个企事业单位卫生所。 1987年前,我市虽然在贯彻《药品管理法》,加强监督管理方面做了大量工作,但由于管辖的面积大,又没有专职基层监督人员,存在着兼职监督人员兼而不管;管而不严的被动局面。面对这种现实,我们感到,基层药品监督管理工作政策性强、涉及面广、难度比较大,切实落实“以质量监督为中心,以基层为     

科技期刊人力资源开发中的目标激励机制

阐述了目标激励机制在科技期刊人才开发中的重要性,结合办刊实践具体论述了编辑工作过程中的组稿、编校、学习目标的设置以及在目标设置过程中应该注意的问题。