基于间充质干细胞的小鼠急性移植物抗宿主病骨髓微环境损伤体外细胞模型的建立与评价策略研究

目的:建立小鼠急性移植物抗宿主病(aGVHD)骨髓微环境损伤的体外细胞模型并进行评价。方法:以6-8周龄雌性C57BL/6N小鼠作为骨髓和淋巴细胞的供体,6-8周龄雌性BALB/c小鼠作为aGVHD模型的受鼠。受鼠接受致死剂量(8.0 Gy, 72.76 cGy/min)γ射线全身照射后6-8 h内,尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10⁷/只),建立骨髓移植(BMT)组小鼠模型(n=20);尾静脉输注供鼠来源骨髓细胞(1×10⁷/只)及脾脏淋巴细胞(2×10⁶/只),建立小鼠aGVHD模型(n=20)。造模后d 7麻醉小鼠,摘取眼球取血,静置离心后吸取血清。分离小鼠间充质干细胞(MSC),分别用添加了2%、5%和10%的BMT组血清和相同浓度的aGVHD组血清的培养基进行培养。通过成纤维细胞集落形成实验(CFU-F)评价两组血清对MSC集落形成能力的影响;通过CD29和CD105免疫荧光染色评价两组MSC表面分子表达的差异;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测MSC自我更新相关基因Oct-4、Sox-2和Nano...     

基于类器官技术的小鼠急性移植物抗宿主病肠道损伤模型建立与评价策略研究

目的:借助急性移植物抗宿主病(aGVHD)模型小鼠血清和肠类器官培养技术，建立模拟aGVHD肠道损伤的体外模型并探索类器官水平aGVHD肠道损伤的规律。方法:以20-22 g雌性C57BL/6小鼠和20-22 g雌性BALB/c小鼠分别作为骨髓移植的供鼠和受鼠。受鼠接受致死剂量(8.0 Gy)的γ射线全身照射后的4-6 h内，输注供鼠来源骨髓细胞(1×10⁷/只，n=20)及脾脏有核细胞(5×10⁶/只，n=20)混合液共0.25 ml,建立aGVHD小鼠模型(n=20)。于造模后d 7麻醉aGVHD小鼠，摘取眼球取血，静置离心后收取血清。分离C57小鼠小肠隐窝，在模拟体内肠道干细胞生长增殖的3D培养体系中培养。分别在类器官培养基中加入5%、10%和20%体积比例的aGVHD血清，培养3d,倒置显微镜下观察小肠类器官的形成过程，比较小肠类器官形态。为了进一步评估，收集aGVHD肠道类器官并观察其病理变化。结合HE染色进行肠类器官形态评价；结合Alcian Blue染色，观察aGVHD小肠类器官分泌功能；结合免疫组化技术，分析血清浓度在5%、1...