RAI16蛋白合成肽多克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备RAI16蛋白的合成肽多克隆抗体, 并进行初步鉴定和应用, 为研究RAI16蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具.方法: 应用Fmoc法化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 经C18的RP-HPLC纯化后, 通过高碘酸钠法将纯化的RAI16蛋白的多肽与KLH交联; 皮下注射抗原免疫新西兰纯种大耳白兔, 加强免疫得到抗血清, 应用蛋白G纯化获得多克隆抗体.对纯化的抗体进行ELISA、免疫组化、 Western blot等初步鉴定和应用.结果: 化学合成RAI16蛋白N端第44～55位氨基酸的多肽, 纯化后多肽纯度为96% , 达到免疫用抗原标准.多肽与KLH交联, 用于免疫动物.经纯化后的抗体效价为1∶ 125 000.该多肽抗体可特异识别人脾脏组织中相对分子质量(Mr)约为55 000的RAI16蛋白.结论: 所制备的多克隆抗体能与天然RAI16蛋白发生特异性反应, 可应用于ELISA、免疫组化、免疫沉淀和Western blot等实验, 为确定RAI16蛋白的组织分布和亚细胞定位、研究RAI16蛋白的功能及作用机制提供了重要的实验工具.     

人肝细胞生成素受体的确定及特性

目的　研究人重组肝细胞生成素 (rhHPO)特异性刺激肝细胞增殖的信号转导是否通过特异性受体结合介导。方法　通过受体结合和特异性竞争抑制实验及Scatchard分析原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞的特性。结果　原代培养大鼠肝细胞、人胎肝细胞和肝癌细胞存在HPO受体 ,受体数量分别为 10 0 0 0个 /细胞、2 0 0 0 0个 /细胞和 5 5 0 0 0个 /细胞 ,平衡解离常数(Kd)分别为 2、1.4及 0 .7pmol,HPO与受体结合的复合物分子量约为 90× 10 3 ,推算出HPO与该受体结合具有饱合性和特异性 ,此结合不能被EGF、TGF α和胰岛素所竞争抑制。通过交联反应在SDS PAGE电泳上显示此受体分子量约 75× 10 3 。结论　HPO促肝细胞增殖作用是通过肝细胞表面这种特异性膜受体介导的。     

PD98059对肝癌HepG2细胞Tec信号转导作用的初步研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对肝癌细胞株HepG2细胞中Tec(tyrosine kinase expressed in hepatocellular carcinoma)及ERK2作用.方法免疫细胞化学方法检测Tec、ERK2在HepG2细胞中的表达;用RT-PCR和Westernblot方法检测,不同浓度PD98059处理细胞后,HepG2细胞中的Tec、ERK2 mRNA及蛋白表达.结果Tec、ERK2在HepG2细胞中呈高表达,PD98059明显影响HepG2细胞Tec、ERK2 mRNA以及蛋白表达,呈剂量依赖性,40 μmol/LPD98059细胞抑制最明显.结论Tec可能是肝癌细胞内Ras/Raf/ERK信号转导途径上游的信号蛋白,与Ras/Raf/ERK信号转导通路存在着某种信号联系.     

血卟啉衍生物介导的光动力疗法对人肺腺癌细胞杀伤效应的实验研究

目的研究血卟啉衍生物(hematoporphyrin derivative,HpD)介导的光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对在体和离体人肺腺癌细胞A549的杀伤作用。方法以MTT法检测HpD-PDT对A549细胞增殖抑制的量效关系,应用流式细胞术分析其对细胞凋亡的影响。进一步构建A549细胞裸鼠移植瘤动物模型,通过绘制肿瘤生长曲线观察HpD-PDT对肺癌生长的抑制作用,并应用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果HpD-PDT作用后,A549细胞增殖受抑,凋亡增加,显著高于对照组(P<0.05),且其抑制效率依赖于HpD浓度及激光剂量;裸鼠移植瘤动物模型肿瘤生长受抑、凋亡增加,也与对照组存在显著性差异(P<0.01)。结论HpD-PDT可有效杀伤肺腺癌细胞,其作用机制可能与抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡有关。     

原发性肝癌B细胞异位基因2的表达及临床意义

目的 探讨B细胞异位基因2 (B cell translocation gene 2,BTG2)在原发性肝细胞癌中的表达及与术后生存期之间的关系.方法 共纳入125例可手术切除的原发性肝细胞癌患者,其中有完整随访记录101例;用免疫组化方法检测患者肿瘤组织中BTG2蛋白的表达,并分为3组:BTG2高表达组,BTG2蛋白中表达(++)或强表达(+++);BTG2低表达组,BTG2蛋白低表达(+);BTG2阴性组,BTG2蛋白无表达(-).分析BTG2表达水平与临床病理因素和术后总生存期的相关性.选取12对癌与癌旁配对组织,用RT-PCR检测其BTG2表达水平.结果 125例癌组织中,BTG2阴性组、低表达组和高表达组分别为106、13、6例;癌旁组织中,BTG2阴性组、低表达组和高表达组分别为41、14、22例,癌与癌旁组织BTG2表达差异有统计学意义(x2=28.102,P＜0.001).RT-PCR检测结果显示12对癌与癌旁配对组织中,癌组织BTG2表达水平低于癌旁的有8例.癌栓发生与BTG2表达有明显相关性(x2=8.305,P=0.013),其中低表达组癌栓发生率最高.BTG2低表达组中位总生存期为36个月(95％ CI:8.437 ～ 63.564),而高表达和阴性表达组未达到中位总生存期(Log-Rank x2=4.512,P=0.105).亚组分析表明,BTG2高表达组患者总生存期显著长于低表达组(x2=4.266,P=0.039),而高表达与阴性组(x2=2.729,P=0.099)以及低表达与阴性组(x2=1.400,P=0.237)之间差异没有统计学意义.逐步Cox回归分析结果显示,分化程度、肝硬化、癌栓和转移情况是总生存期的独立预后因素.结论 BTG2蛋白在原发性肝细胞癌中的表达呈低表达,并且BTG2蛋白的高表达提示肝癌患者预后较好,可作为肝细胞癌的潜在预后指标.     

c-met和EGFR蛋白表达与声门型喉磷癌术后复发的关系

目的 探讨表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)和肝细胞生长因子受体(mesenchymal-epithelial transition factor,c-Met)在声门型喉鳞癌中的表达及与术后复发之间的关系.方法 共纳入66例声门型喉磷癌患者,复发组和未复发组各33例.免疫组化法检测c-Met及EGFR在原发灶组织的表达情况,用H评分法对免疫组化结果进行评估.定义H评分值高于中位值为高表达,相反为低表达.结果 在总群体中,c-Met和EGFR的H评分中位值分别为150 (0～270)和225(0～ 270).单变量Logistic回归分析表明,c-Met或EGFR高表达患者的复发风险显著高于低表达患者(OR =7.111,P＜0.001;OR=5.290,P=0.002).逐步回归分析表明c-Met或EGFR的高表达均可作为声门型喉癌术后复发的独立危险因素(OR=5.909,P=0.002; OR =4.231,P=0.013).ROC曲线分析显示联合检测c-Met和EGFR的表达情况对评估术后复发风险具有良好的预测效能(AUC=0.795,95％ CI:0.685 ～0.905).结论 c-Met和EGFR的表达均与声门型喉磷癌术后复发密切相关,可作为术后复发的有效预测指标.     

调强计划对射野角度敏感性的研究

目的:通过改变调强计划中各射野的角度,探究调强计划对射野角度的敏感性,为调强计划设计角度的选择提供科学指导。方法:选择首治鼻咽癌患者三例做调强放疗计划。每例计划均由有多年经验的物理师来做。之后分别在做好的计划基础上,只对射野的角度作调整其他参数的设置保持不变,射野角度做10°大小的改变。经逆向优化、剂量计算后用等剂量曲线和剂量-体积直方图(DVH)评价治疗计划,并分别记录每次改变角度后靶区剂量和靶区周围重要器官的受量,评价参数包括:PTV靶区的D5%、D95%、平均剂量(mean dose)、适形度(TVR)、剂量不均匀性指数(HI)和靶区周围重要器官的受量等。结果:在这些评价参数中仅鼻咽癌病例3的PTV靶区的D95%(P=0.01)和鼻咽癌病例2脊髓最大受量(P=0.01)有显著性差异(P<0.05),即有统计学意义。其他评价参数均较接近,差异无统计学意义(P>0.05)。即在不同射野角度组合的调强计划中,评价数据大都无显著性差异。结论:改变射野角度,调强计划靶区剂量和危及器官受量总的来说变化不明显,即调强计划对射野角度小范围(10°以内)改变不敏感。     

饮食预防肝癌的作用研究进展

肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,具有高发病率、高死亡率的特点。因此,降低肝癌发病率的预防措施非常必要[1]。肝癌的主要危险因素包括：HBV/HCV感染、黄曲霉素暴露及肝硬化等,而吸烟、饮酒、肥胖和糖尿病等也可增加肝癌的发病风险。近几十年来,饮食习惯与癌症发病风险之间的关系越来越引起人们的重视。在肝癌研究中发现,一些常见饮食（如肉、蔬菜、水果、咖啡及茶等）在肝癌的发生、发展及预防中发挥着举足轻重的作用。     

IGRT不同匹配方式对前列腺癌患者放疗摆位精度的影响

目的：观察图像引导放射治疗技术（ IGRT ）不同匹配方式对前列腺癌患者放疗摆位精度的影响。方法25例前列腺癌患者,每周进行五次IGRT放疗,对每例患者分别根据骨性定位、灰度定位、手动定位三种方式摆位后,用CBCT采集图像信息,得到肿瘤放疗靶位图像,并与计划放疗参考图像匹配,通过XVI系统自动得出三种匹配方式在X、Y、Z轴上的误差,进而分析误差大小。结果骨匹配、灰度匹配、手动匹配在X轴上的摆位误差分别是（－0．02±0．08）、（－0．06±0．31）、（－0．01±0．22） cm,在Y轴上的摆位误差分别是（－0．15±0．32）、（－0．08±0．26）、（－0．14±0．26）cm,在Z轴上的摆位误差分别是（－0．28±0．30）、（－0．14±0．23）、（－0．14±0．23）cm,骨匹配分别与灰度匹配、手动匹配比较,P均＜0．05。结论对前列腺癌患者行IGRT放疗时,骨匹配比灰度匹配、手动匹配摆位更为精确。