含笑内酯对类风湿关节炎小鼠模型治疗作用研 究!简

目的探讨含笑内酯对类风湿关节炎DBA／1小鼠模型的治疗作用。方法将40只6周龄雄性DBA／1小鼠随机分为4组：未处理的空白对照组（Nor组）、诱导发病并注射甲氨蝶呤药物的甲氨蝶呤治疗组（MTX组）、诱导发病并注射含笑内酯的实验组（MCL组）和诱导发病并注射DMSO的模型对照组（Con组）,用牛Ⅱ型胶原法诱导MTX、C0n和MCL组小鼠发病建立类风湿关节炎模型;在二次免疫注射24h后开始隔天腹腔注射给药并对小鼠体重和关节炎发病情况进行隔天观察,给药28次后停止用药,眼球取血、蛋白芯片测血清中细胞因子,处死小鼠取爪子及膝盖做组织病理学检查。结果成功构建了DBA／1小鼠类风湿关节炎模型;各组小鼠之间体重差异无统计学意义（P〉0．05）;关节炎评价显示MCL组低于Con组（P〈0．01）,高于MTX组（P〈0．01）;病理结果显示Nor组小鼠组织正常．Con组受累关节m现炎症细胞浸润、滑膜增生、炎性肉芽组织形成、坏死组织等症状,MCL组与MTX组受累关节仅出现轻于Con组的炎症细胞侵润、滑膜增生等症状;小鼠血清细胞因子检测结果共显示m6种细胞因子：C5／C5a、TIMP-1、M—CSF、sICAM-1、IFN-吖和BLC;Con组的类风湿关节炎小鼠中C5／C5a、TIMP-1和M—CSF表达量降低,经含笑内酯治疗的MCL组中这些因子均有不同程度的恢复（P〈0．01）,仅仅在MCL组中检测到BLC表达。结论含笑内酯对小鼠DBA／1类风湿关节炎具有治疗作用,C5／C5a、TIMP-1、M—CSF和BLC等因子在这-过程发挥不同的作用。     

shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化

目的探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA（shRNA）真核表达载体,转染K562细胞并作为干扰组,以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率;采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变;采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1（NCF1）、血清黏蛋白1（ORM1）以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、低氧诱导因子1α（HIF1α）mRNA水平的改变;流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变;Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比,干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制（P〈0.05）;K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段;NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高（P〈0.05）;CD11b表达升高（P〈0.01）;ERK1/2磷酸化水平升高（P〈0.05）,而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化,ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。     

沉默Sam68基因对Jurkat细胞增殖影响的研究

本研究探讨Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响.针对Sam68 mRNA 531-552靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞;应用强力霉素（Doxycycline）诱导干扰载体表达,用Real-time PCR和Western blot验证干扰效率,用改良MTT法检测沉默Sam68基因对Jurkat细胞活力的影响,用体外细胞集落形成实验观察沉默Sam68基因对细胞集落形成能力的影响,用流式细胞术分析沉默Sam68前后细胞周期的变化.结果表明：与对照组相比,实验组Sam68基因的表达被有效抑制（P＜0.05）;沉默Sam68基因降低了Jurkat细胞活力,抑制了细胞的集落形成能力并且导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低（P＜0.05）.结论：利用shRNA靶向干扰Sam68基因的表达可以有效抑制人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖.