转染胸苷磷酸化酶基因对5'-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响

目的 探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶(TP)基因后转化5′-脱氧氟脲苷(5′-DFUR)为氟尿嘧啶(5-FU)能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化.方法 构建包含TP cDNA的真核表达载体,用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO.转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率;RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达.然后以高效液相色谱法(HPLC)检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量;MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度(IC50).结果 转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95％左右.2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加(695±172)倍(t=-7.00,P=0.002)和(282±87)倍(t=-5.61,P=0.030),Western blot显示TP蛋白表达也明显增强.转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加(t=19.406 ～66.921,P＜0.01).5′-DFUR对SW480的IC50由(1641±53) μmol/L降至(587±17) μmol/L(t=-32.59,P＜0.01);对LOVO的IC50由(1607±57) μmol/L降至(1088±89) μmol/L(t=-8.52,P＜0.01).结论 慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代,转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高,使5′-DFUR转化为5-FU的量增加,对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强.     

β-细辛醚对缺血再灌注损伤心肌细胞线粒体膜电位的影响

目的观察石菖蒲有效成分β-细辛醚对缺血再灌注损伤(MIRI)心肌细胞线粒体膜电位(MMP)的影响。方法采用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立心肌细胞MIRI模型,将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞分6组:正常对照组、MIRI模型组、β-细辛醚高、中、低剂量组(25,12.5,6.25μg/mL)、基质组。利用流式细胞术(FCM)检测MMP平均荧光强度。结果MIRI模型组心肌细胞MMP明显降低,与正常对照组比较有统计学意义(P<0.05);β-细辛醚能不同程度升高MMP,与模型组比较有统计学意义(P<0.05)。结论β-细辛醚能有效抑制MIRI心肌细胞线粒体的损伤,稳定MMP。     

石菖蒲挥发油及β-细辛醚的抗血栓作用

目的研究石菖蒲挥发油及β-细辛醚的抗血栓作用。方法通过血栓形成试验、高黏血症试验、凝血试验和体外溶纤试验，考察石菖蒲挥发油和β-细辛醚对血栓重量、凝血酶原时间（胛）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、血液流变学、小鼠凝血时间、血浆纤维蛋白凝块重量等指标的影响。结果石菖蒲挥发油、β-细辛醚能减轻大鼠静脉血栓重量，延长大鼠血浆PT和APTT；改善高黏血症大鼠的血液流变性，尤其对全血低切黏度和血浆黏度的作用明显；明显延长小鼠凝血时间；减轻血浆纤维蛋白凝块的重量。结论石菖蒲挥发油、β-细辛醚有抑制血栓形成、抗黏、抗凝、溶解血浆纤维蛋白的作用，其作用机制可能与其能延长PT、APTT，改善血液黏滞性等有关。     

5’-脱氧氟尿苷联合干扰素对转染TP基因结肠癌细胞株裸鼠实验模型的影响

背景与目的：人结直肠癌细胞基本无胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase,TP)表达。本实验主要探讨人结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠肿瘤组织中对抗癌药物5’-脱氧氟尿苷(5’-deoxy-5-fluorouridine,5’-DFUR)、氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和干扰素-α2a(interferon-α2a,INF-α2a)干预效果的影响。方法：以慢病毒为载体转染TP基因至结肠癌细胞株LS174T,得到稳定传代的高TP表达株。将96只BALB/c裸鼠分成2组,分别应用野生型及转染TP基因后的LS174T细胞株接种裸鼠背部皮下,制成结肠癌TP低、高表达模型。每组再随机分为6组,分别应用0.9%NaCl溶液、INF-α2a、5-FU、5-FU+INF-α2a、5’-DFUR和5’-DFUR+INF-α2a干预5 d,2周后处死裸鼠,分离肿瘤称重后,分别应用鼠抗人CD34、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和抗PD-ECGF单克隆抗体进行免疫组织化学染色。判定是否有TP表达及对微血管进行计数。结果：在野生型LS174T裸鼠荷瘤模型中,使用抗肿瘤药物的3~6组肿瘤质量与对照组相比均明显降低,抑癌率分别为48%、27%、48%和57%,差异有统计学意义(P<0.05)。其中5’-DFUR组(48%)与5’-DFUR+INF-α2a组(57%)、5-FU+INF-α2a组与5’-DFUR+INF-α2a组(27%与57%)相比,抑癌率差异有统计学意义(P<0.05)。在LS174T-TP细胞株裸鼠模型中,5’-DFUR组和5’-DFUR+INF-α2a组抑癌率分别为27%和48%,而使用5-FU的两组未显示出良好的抗肿瘤效果(7%和3%)。免疫组织化学染色显示,野生型LS174T接种形成的肿瘤组织中TP表达阴性,微血管数目较少,而转染TP基因后,肿瘤组织中TP表达明显上升,微血管密度明显增多(P<0.05)。结论：结肠癌细胞株LS174T转染TP基因后,在裸鼠实验肿瘤模型中,TP表达明显增加,使细胞内激活抗癌药物5’-DFUR的抗癌作用明显增强,联合应用INF-α2a能进一步增强这种抗癌作用。而转染TP基因或联合应用INF-α2a对常规抗癌药物5-FU的抗癌效果无明显影响。     

腰硬联合麻醉剖宫产围术期同理心干预护理对产妇负性情绪的改善价值

目的 评价在剖宫产腰硬联合麻醉中实行同理心干预护理对产妇负性情绪的改善作用。方法 选取2020年1月—2021年3月收治于龙川县妇幼保健院的126例行剖宫产的产妇作为研究对象,按随机数字表法分为对照组（n=63）和试验组（n=63）,对照组采用传统护理,试验组在对照组的基础上实施同理心干预护理。采用焦虑自评量表（SAS）及抑郁自评量表（SDS）对2组实施护理前后的负性情绪进行评价,比较2组麻醉效果、生理应激反应及护理满意度。结果 实施护理前,2组SAS评分及SDS评分差异均无统计学意义（P>0.05）;实施护理后,试验组SAS评分及SDS评分均显著低于对照组（P<0.05）。试验组麻醉总有效率为96.83%,显著高于对照组的79.37%(P<0.05)。术前,2组患者肾上腺素及皮质醇水平差异均无统计学意义（P>0.05）;术后6 h、术后12 h试验组肾上腺素及皮质醇水平明显低于对照组（P<0.05）。试验组护理满意度显著高于对照组（P<0.05）。结论 在剖宫产腰硬联合麻醉中联合同理心干预,可有效改善产妇的负性情绪,保证良好的麻醉效果,降低生理应激...     

干扰素α2a对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶表达和5′-脱氧氟尿苷抗癌活性的影响

目的 探讨干扰素-α2a(IFN-α2a)对人结肠癌细胞胸苷磷酸化酶(TP)mRNA表达水平以及5′-脱氧氟尿苷(5′-DFUR)和氟尿嘧啶(5-FU)抗癌效应的影响.方法 不同剂量IFN-α2a分别处理人结肠癌细胞LOVO和SW480,荧光定量PCR检测TP mRNA表达水平;MTT法检测联合应用IFN-α2a前后5-FU和5′-DFUR对LOVO和SW480抑制作用的半数有效浓度(IC50)变化情况.结果 与0 U/ml IFN-α2a浓度组相比,500 U/ml及5000 U/ml组可明显上调LOVO和SW480细胞TPmRNA表达(P＜0.01),而50 U/ml则对上述两种细胞TPmRNA表达水平无明显影响(P＞0.05).联合应用浓度为20 U/ml的IFN-α2a后,5-FU对LOVO和SW480细胞的IC50无明显改变(P＞0.05),但5′-DFUR的IC50则明显降低(P＜0.05).结论 IFN-α2a能上调结肠癌细胞TP mRNA的表达水平,并可使5′-DFUR对结肠癌细胞的IC50明显下降,而对5-FU则无明显影响.     

熊果酸对过氧化氢诱导大鼠心肌细胞氧化损伤的保护作用

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对过氧化氢(H2O2)诱导大鼠心肌细胞氧化应激损伤模型的保护作用,并探讨其作用机制。方法冷消化法原代培养SD大鼠心肌细胞,3 d后将细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、UA低(2.5μM)、中(5μM)、高(10μM)浓度组。UA预处理心肌细胞后,加入H2O2作用,分别检测心肌细胞存活率、LDH、CAT、SOD的变化,ROS的水平。结果 UA低、中、高浓度组对比模型组OD值明显降低,LDH含量明显下降,CAT、SOD活性升高,ROS水平下降,且P0.05。结论 UA对大鼠心肌细胞氧化损伤具有保护作用,可减轻氧自由基对心肌细胞的氧化损伤。     

基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立

目的：构建表达高度胸苷磷酸化酶（TP）活性并可以稳定传代的结肠癌细胞株。方法合成包含TP cDNA 全长的真核细胞表达载体,用慢病毒包装后转染人结肠癌细胞株 SW480、LOVO、HT29和 LS174T,流式细胞仪检测转染效率,实时荧光定量 RT －PCR 方法检测 TP 的 mRNA 表达,蛋白印迹法（Western blot）检测 TP 蛋白表达。结果转染 TP cDNA 后,SW480、LOVO、HT29与 LS174T 在传代5代后转染效率仍稳定在95％左右。与未转染 TP 基因的亲代细胞相比,SW480－TP、LOVO －TP、HT29－TP 与 LS174T －TP 的 TP mRNA 的表达分别提高了（694．56±171．53）、（282．46±86．85）、（8．45±0．15）和（2615．02±253．97）倍,差异有统计学意义（P ＜0．05）;并且 TP 蛋白的表达水平也显著提高。结论慢病毒载体能够高效地将 TP cDNA 转染至人结肠癌细胞 SW480、LO－VO、HT29和 LS174T 中,所得克隆能够稳定传代,并能显著提高4株结肠癌细胞 TP 的 mRNA 和蛋白表达水平。     

关节镜下前交叉韧带重建术后护理与康复

膝关节前交叉韧带(ACL)的主要功能是防止胫骨前后错动及膝旋转不稳,对完全断裂者应手术治疗[1],其中关节镜手术是一种比较安全实用的新技术,具有诊断率高、微创、恢复快、并发症少,术后痛苦少等优点[2].     

穴位注射足三里治疗腰椎间盘突出症的临床观察

目的：观察维生素B12穴位注射足三里为主保守治疗腰椎间盘突出症与对照组的临床疗效。方法：将120例患者随机分为治疗纽（60例）和对照组（60例）,两组均采用中药熏洗、理疗等综合治疗,治疗组加用维生素B12穴位注射足三里,两个疗程后比较疗效。结果：治疗组总有效率78．33％,疼痛改善率83．33％;对照组的总有效率65．00％,疼痛改善率70．00％。;两组总有效率及疼痛症状改善率比较均有显著性差异（P〈0．05）。结论：穴位注射足三里是治疗腰椎间盘突出症的有效方法。