急性出血坏死性胰腺炎肝损伤中TLR2/4mRNA的表达及氯喹的干预效应

目的： 研究急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）肝损伤中Toll-样受体(TLR)2/4mRNA表达的变化及氯喹的干预效应。 方法：采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠（TAC）注射造成大鼠AHNP肝损伤动物模型。动物分为假手术组（S组）、胰腺炎组和氯喹（CQ）治疗组。后2组于术后3，6，12 h分批剖杀，S组于术后6 h剖杀。观察血清淀粉酶、ALT和AST及肝组织NO和TNF-α的变化，RT-PCR方法检测各组不同时点肝组织TLR2和TLR4mRNA的表达。 结果：相对于S组，胰腺炎组大鼠3 h肝组织TLR2和TLR4mRNA表达开始增高，术后6～12 h肝组织TLR2和TLR4mRNA表达迅速达到峰值（P<0.05），肝损伤加重，血清淀粉酶升高，肝组织TNF-α浓度升高，NO浓度逐渐降低（P<0.05）；相对胰腺炎组，CQ治疗组TLR2/4mRNA表达降低（P<0.05），肝损伤程度减轻，血清淀粉酶降低，肝组织TNF-α浓度降低，NO浓度显著升高（P<0.05）。 结论：AHNP大鼠肝组织内TLR2和TLR4的基因表达上调；其表达增高可能在AHNP肝损伤的发生、发展中起重要作用。氯喹对大鼠AHNP过程中肝损伤可能有保护作用。     

胰腺癌中p16基因甲基化改变及其蛋白表达分析

目的:探讨胰腺癌与癌旁组织中p16基因启动子区异常甲基化的改变及其蛋白表达的特点,以及其与胰腺癌发生发展的关系。方法:分别采用免疫组化SP法及甲基化特异PCR(MSP)检测46例人胰腺癌和癌旁组织中p16基因表达及其甲基化的水平,并结合临床资料进行分析。结果:胰腺癌中p16蛋白表达率为41.3%(19/46),而癌旁组织表达率为95.7%(44/46),两者有差异显著性(P<0.01)。p16蛋白阳性的19例胰腺癌标本中均未检出基因甲基化;p16蛋白缺失的27例标本中有18例检出基因甲基化,甲基化率为39.1%。p16基因甲基化与蛋白缺失有明显关系(P<0.05)。p16基因表达及其启动子区甲基化的发生率与胰腺癌的大小,患者性别﹑年龄的差异无显著意义(P>0.05),但与组织分化程度﹑淋巴结转移﹑PTNM分期有显著意义(P<0.05)。结论:p16基因启动子的异常甲基化可影响p16蛋白的表达,它们与胰腺癌的发生发展有关;p16甲基化和蛋白表达可能成为胰腺癌诊断及预后的候选标志物之一。     

胰腺癌发生机制研究进展

胰腺癌由于解剖位置的特殊性,大多数患者就诊时已属晚期,根治性手术切除率仅为20%,术后5年生存率低于5%.随着新的化疗药物如健择,化疗方式如介入、区域化疗以及新的放射治疗如三维立体适形放射治疗(CRT)、放射粒子植入等技术的综合应用,胰腺癌临床治疗效果有所改观.但相对其他消化道肿瘤而言,胰腺癌的远期疗效仍很不满意.因此,加强对胰腺癌发生与发展分子机制的探讨对于胰腺癌的早期诊断与综合治疗尤其是生物治疗的新策略的研究具有重要意义,本文就胰腺癌发生分子机制研究及相关技术方法进展进行概述.     

胰腺癌发生机制研究进展

胰腺癌由于解剖位置的特殊性,大多数患者就诊时已属晚期,根治性手术切除率仅为20%,术后5年生存率低于5%.随着新的化疗药物如健择,化疗方式如介入、区域化疗以及新的放射治疗如三维立体适形放射治疗(CRT)、放射粒子植入等技术的综合应用,胰腺癌临床治疗效果有所改观.但相对其他消化道肿瘤而言,胰腺癌的远期疗效仍很不满意.因此,加强对胰腺癌发生与发展分子机制的探讨对于胰腺癌的早期诊断与综合治疗尤其是生物治疗的新策略的研究具有重要意义,本文就胰腺癌发生分子机制研究及相关技术方法进展进行概述.     

小鼠原位脂肪肝移植模型的建立

目的　建立了ob/ob小鼠脂肪肝移植模型 ,探讨保证建模成功的关键因素。方法　采用小鼠非动脉化肝移植技术 ,5～ 7周肥胖小鼠为供体 ,正常小鼠为受体 ,双袖套法行原位肝移植。受体肝组织行HE染色和油红O染色 ,血清ALT、AST水平检测采用常规生化分析法。结果非脂肪肝移植组 (lean to lean)受体长期存活率 (n =10 )为 70 % ,脂肪肝移植组 (ob/obtoagematchedlean)受体存活率为 0 (n =10 ) ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。脂肪肝移植给体积相当的正常小鼠 ,其短期存活率为 3 0 % (n =10 ) ,所有小鼠术后存活并苏醒 ,但均未超过 2 4h。脂肪肝移植受体ALT水平为 (62 85± 2 93 7)U /L ,AST为 (5 812± 2 942 )U /L ;而正常小鼠移植组ALT与AST水平分别为 (5 96± 114 )U /L ,(1796± 870 )U/L ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,组织学检测显示大量胆管中央凝固性坏死伴出血。结论　该模型的成功建立为我们提供了一种新的肝原发性肝无功能移植模型 ,为脂肪肝移植后脂肪肝细胞受损的机制研究奠定了基础。     

反义核苷酸抑制人高迁移率族蛋白1表达对胰腺癌细胞的影响

目的　构建高迁移率族蛋白 1(HMGB1)基因的反义真核表达载体 ,寻找胰腺癌基因治疗新途径。方法应用分子克隆技术构建HMGB1基因反义真核表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1,转染胰腺癌细胞株PANC 1,通过逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、免疫印迹法 (Westernblot)、噻唑蓝 (MTT)比色法检测转染 4 8h后胰腺癌细胞HMGB1基因表达和体外增殖活性的变化。结果　成功构建 pcDNA3 1/antisense HMGB1反义真核表达载体。所获反义表达载体 pcDNA3 1/antisense HMGB1转染可使PANC 1细胞HMGB1mRNA和蛋白表达水平显著降低 (P <0 0 1)。反义 pcDNA3 1/antisense HMGB1的导入能有效抑制PANC 1增殖活性 (P <0 0 1)。 结论　应用反义RNA技术阻断HMGB1基因的表达 ,能有效抑制癌细胞的体外增殖活性 ,为基因治疗提供了新思路     

重症急性胰腺炎大鼠血清高迁移率族蛋白-1水平的时相变化及意义

目的 观察重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素19(IL-19)和高迁移率族蛋白-1(HMGBl)水平的时相变化，探讨HMGBl在SAP病程中的意义。方法采用胰管逆行灌注5％牛磺胆酸钠的方法复制大鼠SAP模型。随机分为正常对照组(N组，n=8)、假手术组(Sham组，n=8)和重症急性胰腺炎组(SAP组，n=80)。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组动物血清TNF-α、IL-1β。用Westernblot法检测血清HMGBl水平。结果 SAP组大鼠血清TNF-α和IL-1β在建模后迅速升高，约在4～6h达高峰，之后迅速下降，在建模12h即降至接近正常水平，一直维持至24和48h。SAP组大鼠血清HMGB1水平在建模后12h开始有明显升高，至24和48h仍维持在较高水平。结论 HMGB1可能作为晚期炎症因子参与了SAP的全身炎症反应。     

Construction and Expression of Human PTEN Tumor Suppressor Gene Recombinant Adenovirus Vector

Phosphatase and tensin homologue deleted onchromosome10(PTEN)is a newtumor suppres-sor gene and possesses mutation in multiple kindsof tumors which include breast cancer[1].Teng[2]found the incidence for loss of heterozygosity(LOH)in breast cancer speci mens was48%(32/67),and the mutation and inactivation of PTENgene plays a central role in cell migration,growthandinvasion of breast cancer[3].This study ai ms atestablishing a kind of proliferative defective recom-binant adenovirus vector A…     

Effect of HIF-1α on VEGF-C Induced Lymphangiogenesis and Lymph Nodes Metastases of Pancreatic Cancer

The effect of hypoxia inducible factor-1α(HIF-1α) on vascular endothelial growth factor C (VEGF-C) and the correlation between HIF-1αand lymphangiogenesis and lymph nodes metasta-ses (LNM) in pancreatic cancer were investigated. Immunohistochemical SP method was used to detect the protein expression of HIF-1αand VEGF-C, and Lymphatic vessel density (LVD) was determined by stain of VEGFR-3, collagen type IV in 75 pancreatic head cancers from regional pancre-atectomy (RP) during Dec. 2001 to Dec. 2003. The relationship between HIF-1αand VEGF-C, lymphangiogenesis, LNM was analyzed statistically. The results showed that the positive expression rate of HIF-1αand VEGF-C in pancreatic cancer tissues was 48.00 % (36/75) and 65.33 % (49/75) respectively. In positive group of HIF-1α, the positive rate of VEGF-C and LVD, and LVD rate was 80.56 % (29/36), 13.22±3.76 and 88.89 % (32/36) respectively, and in negative group of HEF-1α, positive rate of VEGF-C and LVD was 51.28 % (20/39), 5.98±2.17 and 66.67 % (26/39) respectively (P<0.01 or P<0.05). It was suggested that HIF-1αcould promote the expression of VEGF-C, lymphangiogenesis and LNM in pancreatic cancer.     

胰腺癌患者血浆k-ras基因与肿瘤标志物联合检测及其意义

目的 :了解胰腺癌患者血浆中肿瘤标志物水平和k ras基因突变情况 ,评价基因突变与肿瘤标志物联合检测对胰腺癌患者的诊断价值。方法 :收集经手术或病理确诊为胰腺恶性疾病患者 2 1例 ,ELISA检测血浆CA19 9、CA2 42、CA5 0、CEA水平 ,PCR RFLP检测k ras基因突变 ,并与 11例胰腺良性疾病患者对照。结果 :胰腺癌患者血浆中k ras基因突变率 73.7%,胰腺良性疾病k ras基因无突变。k ras基因突变检测的敏感性与特异性分别为 6 1.9%和10 0 %,血浆k ras、CA19 9、CA2 42联合检测的敏感性和特异性分别为 85 .7%和 71.9%。结论 :联合检测血浆中k ras基因与肿瘤标志物可提高胰腺癌诊断的敏感性 ,对胰腺癌筛查、诊断与鉴别诊断有一定的临床意义。