旋毛虫副肌球蛋白在BaculoDirect昆虫杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

利用Baculo Direct昆虫杆状病毒表达系统表达重组旋毛虫副肌球蛋白(recombinant Trichinella spiralis paramyosin,r Ts Pmy),以获得生物学活性较好的重组蛋白。通过PCR和DNA重组方法构建含Ts Pmy基因的Gateway入门载体重组质粒p DONR221(p DONR221/Ts Pmy),经测序鉴定后,扩增重组质粒;利用重组质粒p DONR221/Ts Pmy和Baculo Direct线性杆状病毒进行Gateway DNA重组反应,构建重组病毒,用其直接感染昆虫细胞Sf9使得重组病毒具有感染活力;连续感染Sf9以扩增病毒,利用滴度较高的病毒感染Sf9进行r Ts Pmy表达;SDS-PAGE及Western blotting分析鉴定表达的重组蛋白r Ts Pmy。结果显示,重组质粒经测序鉴定显示序列正确;SDS-PAGE及Western blotting显示r Ts Pmy分子量大小约110 k Da,未见不完全表达;可溶性分析显示r Ts Pmy部分可溶,大部分为不可溶沉淀;Western blotting结果显示r Ts Pmy可被旋毛虫感染的小鼠和猪抗血清识别,具有抗原特异性。本研究首次利用Baculo Direct昆虫杆状病毒表达系统成功表达了r Ts Pmy,获得翻译后修饰更加完善、纯化效果更好的重组蛋白,对于进一步研究Ts Pmy的功能,为制备有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子提供了生物学基础。     

IgG4水平及IgG4/IgG比值对IgG4相关性疾病的临床价值

目的 探讨血清免疫球蛋白(Ig)G4水平及IgG4/IgG比值在IgG4相关性疾病(IgG4-RD)的鉴别诊断及疗效观察中的应用价值。方法 2020年8月至2023年2月于南方医科大学附属广东省人民医院就医并确诊的155例自身免疫性疾病患者作为研究对象,其中IgG4-RD患者60例(IgG4-RD组),其他疾病95例(其他疾病组,包括干燥综合征患者31例,血管炎患者19例,系统性红斑狼疮患者19例,强直性脊柱炎患者5例,类风湿性关节炎患者14例,斯蒂尔病患者3例,皮肌炎患者2例,系统性硬化症患者2例)。另选取50例体检健康者作为对照组。采用免疫比浊法检测各组标本血清IgG4、IgG水平,并计算IgG4/IgG比值。绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清IgG4水平、IgG4/IgG比值鉴别诊断IgG4-RD的最佳cut-off值、灵敏度及特异度。比较IgG4-RD患者治疗前后IgG4水平、IgG4/IgG比值及其他实验室指标的差异。结果 IgG4-RD组血清IgG4水平、IgG4/IgG比值均明显高于其他疾病组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显...     

血清IgG4 水平检测在IgG4 相关肝胆胰疾病诊断及疗效评估的价值研究

目的 研究血清免疫球蛋白(Ig)G4 水平在IgG4 相关肝胆胰疾病的诊断及疗效评估中的价值。方法 通过收集2020 年 8 月～ 2022 年 3 月来广东省人民医院检验科进行血清 IgG4 水平检测且明确诊断为肝胆胰疾病的患者267 例,将其分为IgG4 相关肝胆胰疾病组(n=19)和非IgG4 相关肝胆胰疾病组(n=248)。另外选取 50 例体检健康者作为对照组。采用乳胶免疫比浊法检测血清IgG4,比较各组血清IgG4 水平。应用ROC 曲线评价血清IgG4 水平鉴别诊断IgG4 相关肝胆胰疾病的最佳诊断界值及敏感度和特异度。收集实验室检测资料,分析其他实验室指标与血清IgG4 水平之间的相关性。结果 IgG4 相关肝胆胰疾病组血清IgG4 水平[3.86(2.25,6.90)g/L] 显著高于非IgG4 相关肝胆胰疾病组[0.75(0.47,1.29)g/L] 和健康对照组[0.71(0.40,1.03)g/L],差异具有统计学意义(Z = 3.641,6.314, 均P ＜ 0.01)。非IgG4 相关肝胆胰疾病中胆管肿瘤疾病组有20%(4/20) 的患者IgG4 水平高于正常值,在非IgG4 相关肝胆胰疾病中阳性率最高。通过IgG4 相关肝胆胰疾病组和其他对照组绘制ROC 曲线,最佳诊断界值为2.02g/L,AUC 为0.875(95%CI:0.953 ～ 0.995)。血清IgG4 水平仅与IgG 呈显著正相关(r=0.943,P ＜ 0.05)。IgG4 相关肝胆胰疾病组中其他实验室指标阳性率排名前三的是GGT(75.00%),ALP(68.75%)和空腹GLU(61.11%)。IgG4 相关肝胆胰疾病患者有效治疗后血清IgG4 水平均明显降低(Z=-2.547,P=0.011)。结论 血清IgG4 水平鉴别诊断 IgG4 相关肝胆胰疾病最佳诊断界值为2.02g/L。动态观察血清IgG4 水平对诊断IgG4 相关肝胆胰疾病有重大提示作用。血清IgG4 也是判断临床治疗有效的重要指标。     

旋毛虫副肌球蛋白与补体C9结合位点的研究

【目的】 旋毛虫病是呈全球性广泛分布的食源性人兽共患寄生虫病。旋毛虫副肌球蛋白(trichinella spiralis paramyosin,Ts-Pmy)是本课题组首次发现的抗原蛋白。前期研究结果表明,该蛋白通过与补体膜攻击复合物(MAC)组分C9结合,阻碍MAC组装,使虫体逃避补体系统的杀伤。本课题将精确定位Ts-Pmy与补体C9的结合位点,为深入研究Ts-Pmy免疫调节功能奠定基础。 【方法】 将Ts-Pmy分段表达为多个重组截短片段以及合成短肽,利用蛋白质印迹(Western-blot)和斑点印迹(Dot-blot)方法检测截短片段以及短肽与补体C9的结合能力,以定位Ts-Pmy与补体C9的结合位点。通过对Zn²⁺诱导的补体C9聚合反应以及红细胞裂解实验,研究结合位点多肽的功能。进一步制备了抗结合位点多肽的单克隆抗体(monoclonal antibody,mAb)。在鉴定单抗的亚型、亲和力和特异性的基础上,通过单抗体外结合抑制实验和体内被动免疫保护实验鉴定单抗的功能。 【结果】 精确定位Ts-Pmy与补体C9的结合位点位于Ts-Pmy羧基端14个氨基酸残基的区域,即第866位缬氨酸至第879位甲硫氨酸(VSMGKSLSSKVYVM)。结合位点多肽可抑制Zn²⁺诱导的补体C9聚合反应以及红细胞的细胞溶解反应,具有与全长Ts-Pmy相似的功能。制备的mAb 9G3可与旋毛虫不同发育阶段的天然Pmy和重组Ts-Pmy特异识别,且能够抑制Ts-Pmy与补体C9的结合。通过小鼠尾静脉被动回输mAb 9G3,肌幼虫减虫率可达42.6%。 【结论】 精确定位了Ts-Pmy与补体C9的结合位点,获得的抗结合位点多肽的mAb 9G3是一株具有免疫保护性的抗体。上述研究为抗旋毛虫病疫苗及基因工程抗体的研制提供了精确的分子靶标。     

改良纤维支气管镜在气管插管中的应用

目的观察改良纤维支气管镜在气管插管中的临床应用效果。方法选择100例美国麻醉师协会(ASA)Ⅰ～Ⅱ级择期成年手术患者,随机分成2组:A组用纤维支气管镜气管插管;B组用改良纤维支气管镜气管插管。分别记录插管时间、插管次数、脉搏氧饱和度低于95%例数、追加诱导药例数、插管并发症及失败例数。结果插管时间A组与B组比较有统计学意义(P<0.01)。A组一次插管成功率6.0%,失败率32.0%,氧饱和度降低例数90.0%,追加诱导药例数94.0%;B组一次插管成功率70.0%,失败率2.0%,无1例氧饱和度降低,追加诱导药例数6.0%。结论改良纤维支气管镜气管插管时间短,成功率高。     

密室逃脱检验教学探讨及分析

密室逃脱教学法通过设置不同医学检验教学主题，为学生提供沉浸式、游戏式学习机会，使学生通过密室逃脱游戏完成医学检验类教学任务，提高对知识的理解、掌握、融会贯通能力以及增强理论与实践的合理应用技巧。文章主要阐述密室逃脱教学法相比于传统教学法的优势和未来发展方向进行探讨，以此为后续研究提供参考。