用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原

摘要：目的：用免疫蛋白质组学技术筛选烟曲霉分泌蛋白中的免疫优势抗原,用于侵袭性曲霉病（IA）的诊断标志物及疗效监测。 方法：YEPG培养基培养14 d的真菌分泌蛋白质进行二维电泳（2-DE）分离,用抗曲霉抗体阳性的IA确诊患者混合血清进行免疫印迹,再用质谱分析及生物信息学方法鉴定阳性反应点。 结果：2-DE、免疫印迹结果显示,确诊IA患者血清与分泌蛋白质中多种抗原反应强烈。40个蛋白质点被抗体阳性IA患者血清识别。对40个蛋白质点质谱分析,成功鉴定了39个免疫反应阳性的蛋白质点,代表17种蛋白质,包括分泌型二肽基肽酶V（DppV）、NAD-依赖型苹果酸脱氢酶、硫氧还蛋白还原酶、醛脱氢酶、果糖二磷酸醛缩酶、3-羟丁酰辅酶A脱氢酶等。在鉴定出的17种蛋白质中,有2个为已知抗原,15个首次报道为免疫原性蛋白质。有7种免疫原性蛋白质显示有多个蛋白质点。且在新发现的免疫原性蛋白质中,2号蛋白质（共13个蛋白质点）免疫反应最强,鉴定结果为硫氧还蛋白还原酶。 结论：免疫蛋白质组学技术是筛选病原体免疫优势抗原的一种有效方法,此次鉴定的抗原可能是潜在的疾病标志物,但还需进一步地实验加以评估。     

琼山人民医院238例淋病患者的相关因素分析

目的揭示不利于淋病防治工作的潜在因素,为制定性病的预防控制措施提供依据。方法对近5年诊治的238例淋病患者的一般情况、传染源、就诊原因、防病行为特征等进行针对性调查,并对调查结果进行统计、分析。结果2002-2006年淋病患者在性传播病中的构成比分别为31.9%（59/185）、29.0%（53/183）、26.0%（56/215）、19.5%（38/195）、18.8%（32/170）。20-39岁年龄段的患病率最高（172例）占72.3%;职业分布比例最高的是外来务工人员等流动人口（92例）占38.7%。通过性接触传染的为（223例）93.7%;因出现症状就诊的为80.9%（男）和63.9%（女）,由于怀疑感染而就诊的为15.6%（男）和36.1%（女）。94.1%的患者在未感染淋病以前从未使用过避孕套,在本次感染（或怀疑感染）之后,使用避孕套以防性病传播的患者为20.1%（男）和43.3%（女）。结论琼山人民医院近5年淋病患者在性传播病中的构成比呈逐年下降趋势,但是患病人数的绝对值仍较高,因此淋病的防治工作仍不容乐观。缺乏监督约束的外来流动人口、性伦理道德的缺失、以及淋病患者对性病的疏于防范,是不利于淋病治疗的潜在因素。     

无肾造瘘管经皮肾镜取石术的治疗体会

目的评价无肾造瘘管经皮肾镜取石术(PCNL)的临床疗效和可行性。方法选取2016年1月-2018年12月该院泌尿系结石患者96例,根据PCNL术中肾造瘘管留置情况,48例行无肾造瘘管PCNL(观察组),48例行常规留置肾造瘘管PCNL(对照组)。比较两组患者手术时间、住院时间、结石清除率、术后恢复情况和并发症等。结果 96例患者均顺利完成手术。观察组患者术后住院时间、语言评价量表(VDS)、疼痛视觉模拟评分(VAS)、住院费用、尿漏时间、术后发热时间、术后恢复时间和恢复正常工作时间均明显少于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P 0.05);两组患者手术时间和术后血红蛋白下降值比较,差异无统计学意义(P 0.05)。结论无肾造瘘管PCNL较常规留置肾造瘘管PCNL具有术后疼痛轻、恢复快、住院时间短和经济负担较低等优势,是安全、可行、有效的,值得临床推广。     

烟曲霉硫氧还蛋白还原酶重组蛋白的原核表达及抗原性分析

摘要：目的：克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase,TR）基因并构建原核表达载体,获得烟曲霉TR重组蛋白,并鉴定其抗原性。 方法：用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段,克隆至pMD18-T载体,并转化E.coli JM109。经序列分析证实后,提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因,与表达载体pET28a(+)连接,转化E.coli BL21（DE3）,筛选重组表达质粒。用异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导重组融合蛋白表达,用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质,并用亲和层析柱进行纯化。 结果：构建了含TR全长基因的重组表达质粒,IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。 结论：成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR,并在大肠埃希菌中获得了高效表达,重组蛋白质具有良好的抗原性,为进一步研究奠定了基础。     

用动物模型评估抗烯醇化酶抗体测定对系统性白念珠菌病的诊断价值

目的:建立系统性白念珠菌痛(SC)家兔模型,考察免疫功能正常组和免疫功能低下组家兔产生特异性抗体的动力学,评估抗烯醇化酶抗体的诊断价值.方法:新西兰大白兔随机分为A组(免疫功能正常组)和B组(免疫功能低下组,注射氢化可的松建模),每组4只,静脉注射白念珠菌分生孢子,建立SC动物模型.每2d采血,用western blo...     

白念珠菌烯醇化酶N端肽段ENO1 319P的原核表达和鉴定

摘要：目的:制备白念珠菌烯醇化酶N端基因重组肽段ENO1-319P并检测其抗原性。 方法:选择与人烯醇化酶蛋白α-ENO同源性低的白念珠菌烯醇化酶肽段ENO1-319P,将其编码DNA序列克隆到表达载体pET28a(+),并在大肠埃希菌BL21(DE3)中用IPTG诱导带有His标签的重组肽段的表达。用SDS-PAGE电泳分析,TALON金属亲和层析柱纯化重组蛋白,其抗原性用侵袭性白念珠菌感染（ICAI）患者血清进行western blot评估。 结果:成功表达并纯化了目的肽段,该蛋白可与ICAI患者血清发生特异性反应。 结论:获得了白念珠菌烯醇化酶N端肽段ENO1-319P的基因表达工程菌株,为将此重组肽段用于制备特异性更高的抗体打下基础。     

肾盂癌和输尿管癌的手术治疗体会

目的 探讨肾盂癌和输尿管癌根治性切除的手术治疗方法.方法 2004年6月至2011年11月我科共手术治疗肾盂癌和输尿管癌66例,其中采用膀胱电切镜行膀胱壁段输尿管袖状切除+腰部斜切口根治性肾脏及输尿管全长切除术(A组)25例,采用腰部斜切口肾脏及输尿管全长根治性切除+下腹部切口行输尿管下段及膀胱袖状切除(B组)41例.回顾性比较两组手术时间、术中出血量、术后肠道功能恢复时间、术后切口疼痛情况、住院时间、随访时间、手术效果等指标.结果 A组平均手术时间122 min,术中平均出血量131ml,平均术后胃肠道功能恢复时间1.6 d(1～3 d),平均术后曲马多用量131mg,平均术后住院时间10.4 d.B组平均手术时间130 min,平均术中出血量229ml,平均术后胃肠道功能恢复时间2.9d (1～4d),平均术后曲马多用量229mg,平均术后住院时间11.7d.两组手术耗时、术后住院天数比较差异无统计学意义(P＞0.05),术中出血量(P＜0.05)、术后胃肠道功能恢复时间(P＜0.01)、术后曲马多用量(P＜0.05),A组显著优于B组.结论 单切口肾盂癌、输尿管癌根治术与双切口肾盂癌、输尿管癌根治术疗效相当,但前者具有创伤小、安全可靠的特点,是治疗肾盂癌、输尿管癌的有效可行方法,能减少患者的创伤,适合在基层医院开展.     

白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质的制备及鉴定

目的 制备具有高免疫原性的白念珠菌重组烯醇化酶蛋白质。 方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA作为模板,用PCR法扩增烯醇化酶的全长DNA序列,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导重组融合蛋白质表达。用抗his标签的单克隆抗体和白念珠菌抗体阳性的病人血清进行western blot鉴定,亲和层析柱纯化重组蛋白质。 结果 获得了含白念珠菌烯醇化酶全长基因的重组表达载体和相应工程菌株,经IPTG诱导后能高效表达重组融合蛋白质。经已含抗体的病人血清进行western blot鉴定,表明诱导的重组蛋白质有良好的免疫原性。 结论 成功克隆了白念珠菌烯醇化酶全长基因并在大肠埃希菌中获得高效表达;重组蛋白质具有良好的免疫原性。     

抗烯醇化酶抗体检测对侵袭性念珠菌病的诊断价值

目的 利用白念珠菌烯醇化酶重组蛋白质为抗原,建立测定人血清中抗白念珠菌烯醇化酶IgG类抗体的ELISA法,评估其在侵袭性念珠菌病(IC)诊断中的应用价值.方法 收集各类确诊IC患者(66例)和白念珠菌定植者(32例)血清,用重组白念珠菌烯醉化酶包被ELISA微孔板,测定血清中的抗烯醇化酶抗体,确定cut off值并对方...     

癃闭舒联合非那雄胺对老年前列腺增生患者残余尿量的影响

目的探讨癃闭舒联合非那雄胺对老年前列腺增生患者残余尿量(RV)的影响。方法206例老年前列腺增生患者应用双色球法随机均分为对照组和研究组各103例。对照组给予非那雄胺,研究组在对照组基础上加用癃闭舒。比较两组治疗后临床疗效和不良反应发生情况,治疗前后前列腺增生指标、生活质量(QOL)及炎性因子水平变化。结果研究组治疗后总有效率显著高于对照组(P<0.05)。研究组治疗后RV、前列腺体积(PV),国际前列腺症状评分表(IPSS)评分,QOL评分和白细胞介素(IL)-17、单核细胞趋化因子(MCP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平显著低于对照组,最大尿流率(Qmax)显著高于对照组(P<0.05)。两组总不良反应发生率差异无统计学意义(P>0.05)。结论应用癃闭舒联合非那雄胺治疗老年前列腺增生患者效果显著,明显改善前列腺增生指标和QOL,降低炎性因子水平,且安全性较高。