不同保存条件对丙型肝炎病毒核酸稳定性的影响

目的探讨不同温度和时间条件下保存对血液中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)稳定性的影响。方法采集12名丙型肝炎患者4 ml的外周血,分装、保存在不同温度及相同温度下的不同时间,利用实时荧光定量PCR检测其不同时间点血浆HCV RNA的水平(log IU/ml),并与该血液标本的起始HCV RNA水平做比较分析。结果当血液标本中的HCV RNA起始水平≥105IU/ml时,在25℃放置6 h后转至4℃保存18 h(a)、25℃放置12 h后转至4℃保存12 h(b)及4℃放置24 h(c)等3种保存条件,24 h时内检测到血液标本的HCV RNA水平105IU/ml组分别为(5.15±0.16)、(5.15±0.15)及(5.16±0.16)IU/ml(P>0.05),107 IU/ml组分别为(7.45±0.21)、(7.44±0.23)及(7.45±0.24)IU/ml(P>0.05);当血液标本中HCV RNA起始水平在临界范围[(3.38±0.14)IU/ml]时,在条件a、b保存24 h血液标本的HCV RNA含量分别为(2.28±1.52)IU/ml、0(均为P<0.01),而条件c保存24 h血液标本的HCV RNA含量为(3.28±0.20)IU/ml(P>0.05);当血液标本中HCV RNA起始水平为103 IU/ml时,在4℃保存48 h时HCV RNA含量为(2.31±1.54)IU/ml(P<0.01)。结论当血液中HCVRNA起始浓度较低时,HCV RNA的稳定性较差,短时常温保存都会造成病毒核酸的降解。     

便隐血胶体金免疫层析试条制备及其临床应用研究

[目的]为建立一种快速简便胶体金免疫层析法检测大便中血红蛋白及其临床应用评价。[方法]将人血红蛋白单克隆抗体标记胶体金并包被硝酸纤维膜，制成免疫层析试条，用Hb标准品进行校准，同时与万华普曼公司生产的同类金标试条以及邻联甲苯胺法作对比试验，检测临床病人粪便标木中FOB(便隐血)。[结果]木FOB金标试条灵敏度达40ng／ml，特异性强，重复性好，经广州军区总院100份住院病人大便FOB检测，结果准确率达100％。[结论]金标免疫层析法检测FOB具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

液态芯片检测妇女HPV感染及基因亚型分布

目的探讨广州地区女性人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及其与年龄的关系。方法取妇女宫颈脱落细胞,利用液态芯片技术检测26种HPV亚型。结果在743例女性标本中,检出HPV阳性297例,检出率39.97%,其中单纯高危型HPV阳性211例,检出率28.40%;单纯低危型HPV阳性55例,检出率7.40%;高低危混合型HPV阳性31例,检出率4.17%。所有阳性标本中,单一感染232例(78.11%),二重感染61例(20.54%),三重感染4例(1.35%)。单一感染主要以HPV16和HPV52为主;多重感染中以HPV52合并HPV16、33亚型感染,以及HPV16合并HPV6、11亚型感染最为多见。单一HPV亚型的感染率在20岁以下年龄段明显高于其他年龄段(P<0.01);而HPV亚型双重感染主要发生在21～25岁年龄段,这个年龄段的双重感染率显著高于其他年龄段(P<0.0001)。HPV各亚型感染在年龄上的分布差别无统计学意义(P>0.05)。结论广州地区妇女宫颈HPV感染常见型别为HPV52、16、6、11、58,HPV感染与女性年龄密切相关,但HPV亚型的分布与年龄无关。     

血清维生素D水平与前列腺癌的相关性研究

目的探索中国南方人群的血清维生素D(VD)水平与前列腺癌的相关性。方法对90例前列腺癌患者和129例年龄匹配的正常对照者的血清25-羟维生素D水平进行分析,比较两组的血清VD水平均数,以及VD正常(≥30 ng/mL)、不足(20 ng/mL≤VD<30 ng/mL)和缺乏(<20 ng/mL)个体所占比例的差异。结果前列腺癌组的血清VD水平为(27.10±8.26)ng/mL,显著低于正常对照组的(30.10±9.08)ng/mL(P<0.05)。前列腺癌组中血清VD水平正常个体所占的比例低于正常对照组(37.78%vs.45.74%),但前列腺癌中VD水平缺乏个体所占的比例高于正常对照组(22.22%vs.13.18%,OR=1.882,P=0.078 9)。结论血清VD水平低下与前列腺癌存在相关性,VD缺乏(<20 ng/mL)可能增加患前列腺癌的风险。     

黄芪甲甙对骨髓间充质干细胞分泌干细胞因子的影响

目的：初步探讨中药黄芪甲甙对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）表达细胞因子的影响。方法：全骨髓贴壁法和单克隆培养法分离培养大鼠MSCs,间接免疫荧光法鉴定其生物学特性,用MTT法检测黄芪甲甙对MSCs增殖的影响,RT-PCR方法检测多种细胞因子的表达及黄芪甲甙对细胞因子的影响。结果：成功分离出大鼠MSCs,有干细胞因子（SCF）、血小板生成素（TPO）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、转化生长因子（TGF-β1）的表达,不表达白介素-3（IL-3）;加入不同浓度的黄芪甲甙与MSCs共培养24、48、72 h后,以200 mg/mL黄芪甲甙组72 h增殖作用最明显（P<0.05）;RT-PCR分析示黄芪甲甙培养组MSCs分泌SCF mRNA高于未加黄芪甲甙的对照组（P<0.01）,其余细胞因子表达量与对照组相比差异无统计学意义。结论：黄芪甲甙能促进MSCs体外增殖,并可以诱导和促进MSCs分泌SCF,这可能揭示了其促进MSCs增殖和分化的部分机制。［中国当代儿科杂志,2010,12（4）：290-292］     

丙型肝炎病毒载量与肝功能指标的关联分析

目的通过观察丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）RNA水平与常规生化指标间的关系,寻找可指导HCV筛查及反映丙型肝炎治疗情况的有效指标。方法利用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测HCV RNA含量,生化指标在全自动生化分析仪上测定,采用Bivariate correlation和Logistic regression分析血浆HCV RNA含量与性别、年龄及常规生化指标间的相关性。结果 Bivariate correlation分析表明HCV RNA含量与腺苷脱氨酶（ADA）、亮氨酸氨基肽酶（LAP）、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰基转移酶（GGT）及总胆汁酸（TBA）呈正相关（P〈0.05）;与前白蛋白（PA）和AST/ALT呈负相关（P〈0.05）。逻辑回归分析提示HCV RNA含量只与ADA水平成正相关（P〈0.001）,与PA水平及AST/ALT比值成负相关（P=0.008）。结论血浆HCV RNA含量与性别及年龄无关,血浆HCV RNA含量增加可能导致ADA水平升高,同时导致PA水平及AST/ALT比值下降,这三个指标可指导HCV的筛查及反映丙型肝炎的治疗情况。     

miR-29下调AKT信号通路中多个基因的表达

目的 AKT信号通路在心力衰竭的病理机制中扮演重要角色,本研究旨在筛选调节AKT信号通路的microRNA,为进一步研究microRNA在心力衰竭发生发展中的作用奠定基础。方法首先用Gene-SetEnrichmentAnalysis方法及Targetscan和RNAhybrid软件寻找可能调节AKT信号通路的microRNA,然后用双荧光素酶报告系统验证microRNA对AKT信号通路基因3’-UTR的调节作用。结果 GeneSetEnrich-mentAnalysis分析提示:miR-15/16、miR-21、miR-29、miR-103、miR-126、miR-128、miR-129、miR-200和miR-493共9个microRNA家族可能调节AKT信号通路;利用Targetscan和RNAhybrid软件反向验证以上9个候选microRNAs,miR-29与AKT信号通路中的10个基因(TGFβ3、HDGF、VEGF、LEP、PDGFRB、PIK3RI、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A)的3’-UTR杂交分值较高,进一步实验验证发现TGFβ3、VEGF、LEP、AKT1、AKT2、AKT3和HIF1A都是miR-29的靶基因。结论 AKT信号通路中的多个基因都是miR-29的靶基因,可受到miR-29的负调节作用。     

荧光定量PCR检测脂肪肝患者血浆循环DNA及其临床意义

目的检测脂肪肝患者血浆循环DNA（plasma circulatingDNA,PC-DNA）是否发生显著改变,探讨PC-DNA作为脂肪肝早期筛查标志物的可能性。方法从本院体检人群中选取脂肪肝患者和年龄与性别都与之匹配的健康对照人群作为研究对象,采集受试者的全血,分离血浆,提取PC-DNA,采用荧光定量PCR对看家基因—人生长激素基因（HGH）的DNA浓度进行定量以评价PC-DNA水平;另外,我们还检测了每份样本中谷丙转氨酶（ALT）、谷氨酰转移酶（GGT）及高密度脂蛋白（HDL）的浓度。最后,利用t检验和Spearman＇s correlation coefficients等分析方法对数据进行统计分析。结果在脂肪肝患者中PC-DNA的水平（Median=4.10）明显高于健康对照人群的PC-DNA水平（Median=3.47）,P值等于0.0329;分析PC-DNA水平与ALT、GGT及HDL之间的相关性,发现PC-DNA与ALT及GGT正相关,而与HDL呈负相关。结论检测脂肪肝患者PC-DNA水平,并联合ALT、GGT及HDL等生化指标,可筛查脂肪肝。     

PBL教学也许是解决我国大学生科研思路欠缺的良方

在传统教学模式下成长起来的我国大学生缺乏创新和科研思路已成为共识,说教式的教学禁锢了学生的思维,以考试为导向的课程迫使学生死记硬背。科学始于问题,而我国大学生却拙于提出问题,要改善这种现状,教学模式的改革迫在眉睫,而全球医学院校广泛采用的以问题为基础的学习方式（problem-based learning,PBL）正是一种锻炼学生提出问题、解决问题的能力,同时提高学生逻辑推理能力的教学模式。因此,加强PBL教学模式在我国高校中的应用,将是解决我国大学生科研思路缺乏的良策。     

miR-122启动子rs7227488单核苷酸多态性及其对HCV易感性研究

目的了解miR-122启动子单核苷酸多态(SNP)(rs7227488)对启动子活性的影响及其不同基因型对丙型肝炎病毒(HCV)易感性造成的差异。方法采集来本院做HCV感染情况检查患者的血液标本,利用实时荧光定量PCR和ELISA方法检测其HCV感染情况,HCV-RNA和抗-HCV均为阳性者纳入HCV阳性组,HCV-RNA和抗-HCV均为阴性者纳入HCV阴性组;利用高分辨率熔解曲线分型技术检测rs7227488各基因型在HCV阳性组和阴性组中的频率分布。分别构建含rs7227488 A和G等位基因型的miR-122启动子驱动的萤光素酶报告基因载体,利用双萤光素酶报告基因系统检测2种启动子活性差异。结果在所检测的患者中,171名被纳入HCV阳性组,125名被纳入阴性组。HCV阳性组和阴性组中的AA基因型频率分别为23. 98%(41/171) vs 12. 80%(16/125)(P0. 05,OR=2. 149)、AG基因型频率分别为14. 04%(24/171) vs 29. 60%(37/125)(P0. 05,OR=0. 388)、GG基因型频率分别为61. 99%(106/171) vs 57. 6%(72/125)(P0. 05)。在肝癌细胞株QGY中,G等位基因型的miR-122启动子活性是A等位基因型的miR-122启动子活性的1. 7倍(P0. 05);在另一肝癌细胞株7721中,G等位基因型的miR-122启动子活性是A等位基因型的miR-122启动子活性的1. 4倍(P0. 05)。结论 rs7227488 A等位基因型可影响miR-122的启动子活性,不同rs7227488基因型在HCV阳性者和阴性者中的分布频率不同,推测AA基因型可能增加HCV感染风险,而AG型则可能降低HCV感染风险。