血清异常凝血酶原检测在原发性肝癌临床诊断中的应用

目的研究血清异常凝血酶原[又称维生素K缺乏或拮抗剂Ⅱ诱导的蛋白质(PIVKA-Ⅱ)]检测在临床原发性肝癌诊断中的价值及意义。方法收集瑞金医院住院365例患者的血清,其中100例为原发性肝癌患者血清,265例为非原发性肝癌者血清(包括慢性肝病59例、消化系统肿瘤50例、继发性肝癌50例、其他肝脏病变56例和正常对照50例)。采用罗氏Cobas e601全自动免疫分析仪和LUMIPULSE G1200全自动免疫分析仪分别检测血清标本甲胎蛋白(AFP)和PIVKA-Ⅱ水平。所有数据采用SPSS 16.0分析软件进行统计学分析。结果原发性肝癌组血清AFP和PIVKA-Ⅱ水平均明显高于其他疾病组和正常对照组(P0.01)。血清AFP单独诊断原发性肝癌敏感性为63.00%,特异性为84.91%;血清PIVKA-Ⅱ单独诊断原发性肝癌敏感性为74.00%,特异性为89.81%。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,AFP和PIVKA-Ⅱ曲线下面积分别为0.789和0.873。采用PIVKA-Ⅱ和AFP不同的联合诊断方案,可将诊断原发性肝癌的敏感性和特异性分别提高到81.0%和98.49%。结论血清PIVKA-Ⅱ用于原发性肝癌的诊断价值优于AFP,可作为临床诊断原发性肝癌的肿瘤标志物,其与AFP的联合检测可大大提高原发性肝癌的诊断敏感性和特异性。     

自建半胱氨酸蛋白酶抑制剂C检测系统的方法学评价

目的:遵循ISO 15189的规定,对自建开放系统半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)的分析性能进行方法学评价。方法:参照CLSI文件,对亚能Cystatin C试剂盒进行方法学评价,包括精密度、分析测量范围、准确度、干扰试验以及参考区间的调查。结果:CystatinC在浓度1.22mg/L和4.08mg/L时,总不精密度分别为5.81%和2.06%,均小于7.5%。分析测量范围为0.88～7.41mg/L。甘油三酯<10mmol/L、血红蛋白<10g/L、总胆红素<300mg/L时,亚能Cystatin C检测不受影响。通过准确度评价,亚能Cystatin C试剂检测结果与Dade的测定结果呈明显相关(r=0.986),且在医学决定水平亚能Cystatin C的系统误差小于CLIA’88的允许范围。以年龄50岁对Cystatin C的参考区间进行分组,50岁以下年龄组的Cystatin C参考区间为0.63～1.07mg/L,50岁以上年龄组Cystatin C的参考区间为0.61～1.49mg/L。结论:亚能Cystatin C试剂精密度、分析测量范围、抗干扰、准确度符合临床要求。临床实验室在建立或引进新的检验项目必须进行系统的方法学评价以验证检测系统的有效性和完整性。     

华支睾吸虫钙结合蛋白Cs16的重组表达及血清诊断应用的初步评价

目的以原核和真核表达系统克隆、表达华支睾吸虫含有EF手型结构域的钙结合蛋白(Cs16),纯化并初步评价其在华支睾吸虫病免疫诊断中的作用。方法以华支睾吸虫成虫c DNA为模板,PCR扩增含有EF手型结构域的Cs16基因,分别构建原核重组质粒p GEX-4T-1-Cs16和真核重组质粒p PIC9K-Cs16,将酶切和测序鉴定正确的重组质粒分别转入大肠埃希菌BL21和毕赤酵母GS115后,表达并纯化目的蛋白,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)验证其纯度及免疫原性。以华支睾吸虫重组蛋白Cs16为包被抗原,采用ELISA检测24例华支睾吸虫病患者血清中相应抗体的反应性及其与日本血吸虫病患者血清的交叉反应性。结果PCR扩增获得Cs16基因片段,大小为515 bp。构建的重组质粒p GEX-4T-1-Cs16和p PIC9K-Cs16经酶切和测序鉴定正确。SDS-PAGE结果显示,2个重组质粒在大肠埃希菌BL21和毕赤酵母GS115中均为可溶性表达,重组蛋白Cs16相对分子质量约为16 000。Western blotting结果显示,2个重组蛋白能分别被抗GST抗体和抗His抗体特异性识别。ELISA检测结果显示,原核表达和真核表达重组蛋白Cs16的敏感性分别为70.8%(17/24)和54.2%(13/24),特异性分别为95.2%(20/21)和100%(21/21),差异均有统计学意义(P0.05)。与日本血吸虫病患者血清的交叉反应为1/10。结论获得了原核和真核Cs16重组抗原,其在华支睾吸虫病的诊断上具有潜在的应用价值。