锌指蛋白545在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨锌指蛋白545（ZNF545）在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法采用qRT-PCR法检测32对结直肠癌组织及癌旁正常组织中（来自本院行结直肠癌根治术的32例患者）ZNF545mRNA相对表达量;进一步采用免疫组化法检测136对结直癌组织及配对癌旁正常组织（来自组织芯片）中ZNF545蛋白表达,并分析这一表达与患者临床特征及生存预后的关系。结果结直肠癌组织中ZNF545mRNA相对表达量明显低于配对癌旁正常组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。结直肠癌组织中ZNF545蛋白低表达（免疫组化评分≤3分）率为65.4%,明显高于配对癌旁正常组织的25.7%（P＜0.05）;ZNF545蛋白低表达与患者肿瘤直径、浸润深度、TNM分期相关（均P＜0.05）,与患者性别、年龄、肿瘤位置、分化程度、淋巴结转移无关（均P＞0.05）。Kaplan-Meier生存分析结果显示,与ZNF545蛋白高表达的结直肠癌患者比较,ZNF545蛋白低表达患者的5年生存率明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论ZNF545在结直肠癌组织中呈低表达,与患者肿瘤直径、浸润深度、TNM分期及生存预后有关。     

低位直肠癌前切除术后吻合口瘘防治措施

目的：探讨低位直肠癌前切除术吻合口瘘的病因及有效的防治措施。方法回顾性分析低位直肠癌患者行前切除术后发生吻合口瘘16例患者的临床资料。结果16例吻合口瘘患者均痊愈，无一例死亡，平均愈合时间15.4d（11~20d）。横结肠造瘘患者分别于3个月及5个月后将造瘘口还纳腹腔，治愈出院。结论吻合口瘘是低位直肠癌前切除术的常见并发症，应重视其发生的原因、预防措施及临床诊断，绝大部分可经非手术治疗治愈。     

泛素结合酶UBE2T在结直肠癌中的表达及其生物学作用

目的 探索泛素结合酶UBE2T在结直肠癌的表达及其生物学作用。 方法 运用免疫组化法检测78对结直肠癌和对应癌旁正常组织中UBE2T的蛋白表达水平。脂质体转染法将UBE2T-siRNA及对照NC-siRNA转染结直肠癌细胞SW480后，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)及平板克隆实验分析增殖情况；流式细胞仪检测细胞周期情况；Western blotting检测细胞中UBE2T、cyclin D1、cyclin E等蛋白表达情况。 结果 与正常结直肠组织相比，结直肠癌组织中UBE2T表达水平增高(P<0.001)。癌组织中UBE2T异常高表达与不良病理指标相关:肿瘤大小(P=0.014)、组织分化程度(P=0.005)、浸润深度(P=0.033)和TNM分期(P=0.014)。CCK-8增殖实验和平板克隆形成实验都提示沉默UBE2T表达能显著抑制结直肠癌细胞的增殖。沉默UBE2T抑制周期蛋白cyclin D1和cyclin E的表达，促进结直肠癌细胞发生G₁/S期细胞周期阻滞。 结论 UBE2T在结直肠癌组织中异常高表达，并与不良病理指标相关。沉默UBE2T通过促进G₁/S期细胞周期阻滞抑制结直肠癌细胞的增殖。      

锌指蛋白545对结直肠癌上皮间质转化和迁移侵袭的影响

目的探讨锌指蛋白545（ZNF545）对结直肠癌上皮间质转化（EMT）和迁移侵袭的影响。方法免疫印迹试验检测ZNF545在结直肠癌细胞系中的表达,并构建过表达和敲低ZNF545的细胞株;采用Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力,免疫印迹试验检测EMT相关分子标志物[E钙黏蛋白（E-cadherin）、磷酸化锌指转录因子（slug）]的表达;细胞免疫荧光检测ZNF545表达变化对结直肠癌细胞E-cadherin表达的影响。结果内源性ZNF545蛋白在SW480细胞中表达最高,在Lovo、Caco2细胞中的表达次之,在HCT116细胞中表达最低。过表达ZNF545可抑制HCT116细胞的迁移和侵袭能力（均P＜0.01）,抑制slug的表达（P＜0.01）,增加E-cadherin的表达（P＜0.01）;而敲低ZNF545的表达后,SW480细胞的迁移和侵袭能力明显增强（均P＜0.01）,可增加slug的表达（P＜0.01）,抑制E-cadherin的表达（P＜0.01）。在荧光显微镜下,过表达ZNF545可增加E-caherin表达;敲低ZNF545表达后抑制E-caherin表达。结论ZNF545通过参与结直肠癌EMT过程调控结直肠癌细胞迁移和侵袭能力。     

HOXB5对结直肠癌细胞有氧糖酵解和恶性增殖的影响

目的 探讨同源盒蛋白（HOX）B5对结直肠癌（CRC）细胞有氧糖酵解和恶性增殖的影响。方法 通过预实验选取CRC细胞株Caco2构建过表达HOXB5的细胞株,HCT116构建敲低HOXB5的细胞株;分别采用CCK-8法、平板克隆实验、糖代谢检测试剂盒、Western blot法检测过表达或敲低HOXB5对CRC细胞增殖能力、平板克隆形成能力、有氧糖酵解、糖酵解相关蛋白的影响。结果 在Caco2细胞中,过表达HOXB5能明显增强细胞增殖及平板克隆形成能力（均P<0.05）,增加细胞葡萄糖消耗量以及乳酸、三磷酸腺苷（ATP）含量（均P<0.05）,上调丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)蛋白表达水平（均P<0.05）;在HCT116细胞中,敲低HOXB5能明显减弱细胞增殖及平板克隆形成能力（均P<0.05）,减少细胞葡萄糖消耗量以及乳酸、ATP含量（均P<0.05）,下调PKM2、LDHA、GLUT1蛋白表达水平（均P<0.05）。结论HOXB5通过促进CRC细胞有氧糖酵解来增强其恶性增殖。     

结直肠癌HOXA11基因启动子甲基化状态的研究

目的探讨结直肠癌HOXA11基因启动子异常甲基化及其与临床病理特征之间的关系。方法从89对结直肠癌组织和配对的正常肠黏膜组织中分别提取基因组DNA,采用甲基化特异PCR(MSP)检测HOXA11基因启动子区甲基化状态,比较结直肠癌及正常肠黏膜组织中HOXA11甲基化的发生率,并统计分析结直肠癌组织中甲基化水平与患者临床病理特征的关系。在体外实验中,采用甲基化转移酶抑制剂5-Aza-dC处理细胞,实时荧光定量PCR检测HOXA11mRNA表达水平的变化。结果结直肠癌组织中HOXA11基因启动子甲基化阳性率显著高于配对的正常肠黏膜组织（P＜0.01）。HOXA11基因启动子异常甲基化与直肠癌淋巴结转移（P＜0.01）及TNM分期（P＜0.01）密切相关。结直肠癌细胞经5-Aza-dC处理后HOXA11mRNA表达水平显著增高（P＜0.05）。结论在结直肠癌组织中,HOXA11基因启动子区异常甲基化抑制HOXA11基因的转录表达。HOXA11启动子区异常甲基化与结直肠癌患者的淋巴结转移及TNM分期密切相关。     

老年梗阻性左半结肠癌一期切除吻合术38例临床分析

左半结肠癌合并急性肠梗阻多见于老年人，老年人多合并其他疾病，对疾病敏感性差，就诊较晚，结肠梗阻已多为闭袢性梗阻。2005年1月至2014年3月本院对38例老年左半结肠癌合并急性肠梗阻患者，术中做结肠灌洗后行一期切除吻合，疗效满意。报告如下。     

大黄素联合5AzA-cdR对胰腺癌抑癌基因p16、RASSF1A去甲基化作用研究

目的研究大黄素是否可增强5AzA-cdR对胰腺癌Panc1细胞抑癌基因p16、RASSF1A的去甲基化作用。方法采用细胞增殖实验检测不同浓度大黄素对Panc1细胞的生长抑制情况,焦磷酸盐测序PCR（BSP）分别检测大黄素、5AzA-cdR及大黄素联合5AzA-cdR对Panc1细胞抑癌基因p16、RASSF1A甲基化状态的影响,并用荧光定量PCR（FQ-PCR）和Westernblot分别检测p16、RASSF1A及甲基转移酶DNMT1、DNMT3a在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果大黄素以时间和浓度梯度依赖性抑制Panc1细胞生长。BSP结果显示大黄素具有微弱的去甲基化作用,5AzA-cdR具有一定程度的去甲基化作用,当两者联用时,去甲基化作用更加显著;FQ-PCR和Westernblot结果显示大黄素与5AzA-cdR联用时,p16、RASSF1A的表达水平均较空白对照明显增高（均P＜0.05）,DNMT1、DNMT3a的表达水平均较空白对照明显降低（均P＜0.05）。结论大黄素与5AzA-cdR联用可通过降低DNMT1和DNMT3a的表达水平来增强5AzA-cdR对胰腺癌抑癌基因p16、RASSF1A的去甲基化作用。     

PCBP3 过表达对结直肠癌细胞 增殖和迁移的影响

目的 探讨多聚胞嘧啶结合蛋白（PCBP）3 过表达对结直肠癌（CRC）细胞增殖和迁移的影响。 方法 收集 2022 年 5 至 6 月在嘉兴市第一医院行 CRC 切除术患者的 CRC 组织及癌旁正常组织标本各 10 份,比较 CRC 组织与癌旁正常组 织中 PCBP3 mRNA 及蛋白表达水平。取人 CRC 细胞系 HCT116、HT29,使用含有 PCBP3 CDS 区序列的过表达质粒分别转染 HCT116 和 HT29 细胞（设为 HCT116 过表达组、HT29 过表达组）,未经转染的 HCT116 和 HT29 细胞分别设为 HCT116 对照组、 HT29 对照组,检测 PCBP3 过表达对 CRC 细胞增殖、侵袭能力以及 E-钙黏蛋白（E-cadherin）、裂解的胱天蛋白酶 3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平的影响。 结果 CRC 组织中 PCBP3 mRNA 及蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织（均 P＜ 0.05）。与对照组比较,PCBP3 过表达可明显减弱 HCT116 和 HT29 细胞增殖和侵袭能力（均 P＜0.05）,上调 HCT116 和 HT29 细 胞 E-cadherin、Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平（均 P＜0.05）。 结论 PCBP3 过表达能抑制 CRC 细胞增殖和侵袭,可能通 过上调 E-cadherin、Cleaved Caspase-3 蛋白表达水平发挥作用。