因子Ⅷ基因与血友病甲

因子Ⅷ(FⅧ)是一种血浆中的微量糖蛋白,在正常凝血中起关键作用。FⅧ的先天缺陷可发生于血友病甲、血管性假血友病(vWD)以及FⅧ、FV联合缺陷症。本文将对FⅧ的结构,特别是关于血友病的基因缺陷以及在遗传咨询中的应用作一综述。     

von Willebrand因子基因克隆与研究

vWF是一种由内皮细胞和巨核细胞合成的多功能大分子粘附蛋白,在血小板与血管壁相互作用过程中起重要作用,同时,它又是FⅧ载体,稳定FⅧ的生物活性。vWF质和量的异常均可导致以初期止血障碍为特征的vWD。迄今,在vWF基因内已发现9种RFLP,并将其应用于vWD的家谱分析,从而确定纯合子和杂合子。在基因水平上对vWD的分子病理研究表明,基因完全缺失和部分缺失以及基因缺陷影响到转录后的调节都可能是vWD的重要病理机制。     

应用凝血因子Ⅷ基因内XbaⅠ/FⅧ_(E22)RFLP对甲型血友病携带者的诊断

用FⅧ基因内第22外显子FⅧ_(E22)为探针,分析苏州地区正常人XbaI/FⅧ_(E22)RFLP,显示出9.6/4.8Kb 的多态性,频率为0.36/0.64.PIC 值为0.46。并以此为基础对1例甲型血友病携带者进行检测。     

基因探针在大肠杆菌中的扩增及其提纯

本文报道了基因探针在大肠杆菌中的扩增与提纯方法。含基因探针的质粒用氯化钙方法转染大肠杆菌,被转染的细菌与质粒在培养液中同步扩增,然后用碱裂解法抽提扩增后的质粒。结果表明:(1)质粒的转化效率与其浓度有关;(2)经转染、扩增与抽提后,获得了大量的纯化质粒DNA;(3)纯化后的基因探针能满意地用于DNA 标记及分子杂交。     

聚合酶链反应条件控制与优化

聚合酶链反应作为一种强有效的DNA 体外扩增技术,已被广泛地应用于一些遗传性疾病的临床基因诊断。然而,它对反应条件的变化颇为敏感.本文观察了不同反应物成分及时间/温度参量对聚合酶链反应产量和特异性的影响.通过探讨这些因素如何影响扩增结果,以及它们之间在扩增过程中如何相互作用等问题,加深了对影响条件优化的相互关联的各生物化学及生物物理参量的理解,为优化扩增条件提供依据。     

L1序列插入引起血友病甲:一种人类基因突变的新机制

本文作者利用Southern blot分子杂交技术对240例无亲缘关系的男性血友病甲患者进行了限制性内切酶图谱分析,其中发现:15例患者是FⅧ基因大片段缺失,12例是基因点突变型,2例重症血友病甲患者是由于其FⅧ基因第14位外显子分别被3.8kb和2.3kbDNA片段插入所致。接着,作者对这两例患者父母亲的FⅧ基因进行了同样的分析,结果没有发现FⅧ基因异常,说明该两例患者的基因缺陷并非是由母亲遗传所致,而是原发的,很可能是在生殖细胞发育过程中,FⅧ基因被外源DNA片段插入造