miR - 21 慢病毒表达载体的构建及稳定转染 U266 细胞系

目的：构建miR-21慢病毒表达载体,感染多发性骨髓瘤（MM）细胞U266,建立稳定表达miR一21的U266细胞系。方法：以has—miR-21前体序列pre—miR-21为模板,设计并合成引物,进行PCR扩增目的基因,并连接到慢病毒表达质粒LV—anti中。对重组质粒进行双酶切鉴定后,所构建载体命名为LV—anti—miR-21-MOI。再进行miR-21基因慢病毒LV—anti—miR-21的包装及病毒滴度测定,将慢病毒颗粒以最适滴度感染MM细胞株U266,通过Aldefluor流式分选出带有目的基因和空载病毒的细胞,用real—timePCR检测感染效率。结果：目的基因与慢病毒载体连接成功。慢病毒LV—anti—miR-21浓缩后的病毒滴度约为1．0×108TU／ml。慢病毒成功感染目标细胞U266,转染效率达90％以上。real—timePCR检测,U266／LV—anti—miR-21慢病毒MOI20组和MOI40组miR-21表达量分别为0．69±0．03和0．51±0．05较U266／un组（1．08±0．05）下降了38．9％和54．9％,差异有显著统计学意义（P〈0．05）。结论：成功构建了miR-21慢病毒表达载体,并建立U266-miR-21稳定转染细胞系。为进一步研究miR-21的功能及作用机制奠定了基础。     

多发性骨髓瘤中miR-21与SPRY2基因表达的相关性研究

目的：检测多发性骨髓瘤（MM）患者外周血miR-21的表达水平,研究MM中miR-21与SPRY2基因表达的相关性。方法选择30例MM患者、15例意义未明单克隆丙种球蛋白病（MGUS）患者及20例正常对照（NC）的门诊患者,用实时荧光PCR定量检测miR-21和SPRY2表达水平;Western blot检测miR-21和SPRY2在MM细胞系中表达;在荧光显微镜下观察：U266用脂质体转染荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor后miR-21的表达。结果 MM组血清循环miR-21的表达水平较MGUS组和NC组显著增高,差异有统计学意义（P＜0.01）;在miR-21内源性高表达的MM细胞株中,SPRY2明显低表达;反之,明显高表达;荧光标记的 miR-21 mimic/inhibitor,转染效率90%以上,转染mimics细胞miR-21表达量（98.6±14.2）较未处理的U266细胞miR-21表达量（0.82±0.13）升高了120.2倍（差异有显著的统计学意义,P＜0.001）,转染inhibitor细胞miR-21表达量（0.37±0.06）较未处理细胞降低了61.9%（差异有明显的统计学意义,P＜0.05）。结论 miR-21可能是导致SPRY2在MM中表达下调的一个负性调控因子。miR-21与MM 的发生发展和疾病预后有密切关系,可作为判断MM 患者预后不良指标之一。     

多发性骨髓瘤患者外周血miR-21的表达与意义

目的：检测多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者外周血miR-21表达水平,探讨miR-21在MM发生、发展中的调控作用及临床意义.方法：选择30例MM患者、15例MGUS患者及20例正常对照的,测定其血清β2-MG、IgA、IgM、IgG、λ、κ、TP、ALB、Hb、LDH及Ca2＋等水平含量.用SYBR Green实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平.相关检验分析MM患者外周血miR-21水平与临床指标相关性.结果：MM组血清循环miR-21的表达水平较MGUS组和NC组显著增高,差异有统计学意义（P＜0.01）.根据ISS分期,MM组中Ⅰ期miR-21、IgG、κ及ALB水平较Ⅱ期和Ⅲ期明显降低或增高,Ⅲ期IgA、β2-MG和λ的水平较Ⅰ期和Ⅱ期显著增高,差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.MM患者miR-21水平与κ、（κ＋λ）、IgG、（IgG＋ IgA＋ IgM）和β2-MG呈正相关,与ALB呈负相关（均P＜0.01）.结论：miR-21过表达在MM的发病中发挥着重要的致癌基因作用,miR-21与MM的发生发展和疾病预后有密切关系,可作为判断MM患者预后不良指标之一.     

多发性骨髓瘤患者血清胱抑素C和血清肌酐的水平分析

目的:探讨血清胱抑素C(Cys-C)和血清肌酐与多发性骨髓瘤的关系。方法:选择42例初发多发性骨髓瘤患者和40例健康体检者,分别测定其血清Cys-C、尿素(Urea)、肌酐(Scr)及β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)水平含量。结果:多发性骨髓瘤组血清Cys-C和β2-MG水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);血清Scr水平较对照组明显升高(P<0.05)。多发性骨髓瘤患者Ⅲ期中Cys-C水平较Ⅰ期和Ⅱ期明显升高(P<0.01);Ⅲ期中Scr和β2-MG水平较Ⅰ期和Ⅱ期明显升高(P<0.05)。而Ⅰ期和Ⅱ期血清Cys-C、Scr和β2-MG水平之间没有明显差别,差异无统计学意义(P>0.05)。Cys-C与β2-MG呈正相关(r=0.474,P<0.05)。结论:Cys-C可以作为诊断多发性骨髓瘤患者肾功能损害的敏感内源性标志之一,而且优于Urea、Scr和β2-MG,在多发性骨髓瘤分期和判断预后中也有重要的临床意义。     

妊娠高血压综合征患者血清胱抑素C水平变化及与其他肾功能指标的相关性

目的探讨妊娠高血压综合征患者血清中胱抑素C(CysC)的浓度水平变化及与其他肾功能指标的相关性。方法健康未受孕妇女30名为对照组。选择本院健康妊娠妇女120例,分为3组:早期妊娠组(1~12周)34例,中期妊娠组(13~27周)42例,晚期妊娠组(28周以后)44例。另选择本院住院妊娠高血压综合征患者81例,为妊娠高血压组,对5组调查对象均进行血清Cys C、尿素氮及尿液微量清蛋白、肌酐检测。结果健康早、中、晚期妊娠组Cys C浓度比对照组平均分别升高49.4%、58.2%、51.9%,妊娠高血压组Cys C浓度相比健康晚期妊娠组平均升高6.7%。结论妊娠高血压综合征患者Cys C同健康妊娠各期相比显著升高,提示其肾脏存在损伤。     

血清ALT及TP干、湿化学法检测比较

目的探讨干、湿化学法检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及总蛋白(TP)结果的可比性。方法参照美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件,以湿化学法(HITACHI7600)为参考方法 ,以干化学法(VITROS950)为实验方法 ,分别检测80例患者新鲜血清的丙氨酸氨基转移酶(ALT)以及总蛋白(TP),对结果进行统计分析,以美国临床实验室修正法规(CLIA′88)规定的允许误差范围的1/2为标准,判断结果的可比性。结果实验方法与参考方法的系统误差:ALT项目1/2 CLIA′88标准为不能被接受,TP项目系统误差1/2 CLIA′88标准临床可以接受。结论干、湿化学法检测ALT的结果无可比性,TP有可比性。